1. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERIA
E.A.P AGROINDUSTRIAL
ESPECTROFOTOMETRIA MOLECULAR.
CURSO :LABORATORIO DE QUÍMICA A.
DOCENTE :.
INTEGRANTES :VEGA VIERA JHONAS ABNER
CÓDIGO : 0201212051
CICLO: “III”
NUEVO CHIMBOTE - PERÚ
2013

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ESPECTROFOTOMETRIA MOLECULAR
I. OBJETIVOS
Determinar la longitud de onda adecuada (longitud de onda máxima de
absorción) y los niveles de concentración también adecuados para el
análisis cuantitativo por espectrofotometría.
II. FUNDAMENTO
La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis que se emplean
con mas frecuencia dentro del análisis de los alimentos: las regiones de
los espectro mas usados en dicho campo son las ultravioleta y el visible,
y en algunos casos el infrarrojo cercano.
A = a.b.c
Donde:
A = Absorbancia, o extinción o densidad óptica
a = Absortividad
b = Longitud de paso o recorrido de luz
c = Concentración
Esta expresión muestra que existe una relación lineal entre la
absorbancia (A) y la concentración (c) de una solución dada, siendo
contraste la longitud de trayecto óptico y la longitud de onda.
Esta relación se cumple y por lo tanto el análisis espectrofotométrico
cuantitativo se puede aplicar cuando:

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A) Todos los cuantos de energía tienen la misma posibilidad de ser
absorbidos por la sustancia, es decir, la luz empleada debe ser
monocromática y a la de máxima absorción.
B) Todas las moléculas de la sustancia deben tener la posibilidad de
absorber los cuantos de energía, es decir, la sustancia debe estar lo
suficientemente diluida para que ninguna molécula quede oculta o a la
sombra de otra. Se estima como promedio una concentración de 1x
10-2
mol/L.
De no cumplirse estos requisitos, se estaría produciendo
desviaciones de la ley de Beer obteniéndose en consecuencia
resultados erróneos o inexactos en la determinación cuantitativa.
III. MATERIALES Y METODOS
3.1 Materiales y Equipos
- Espectrofotómetro UV – VIS – Marca Tuner.
- Celda de Cuarzo.
- Fiolas de 250 ml, 100 ml y 5ml.
- Embudo de vidrio.
- Papel filtro.
- Papel Tissue.
- Pizeta con agua destilada.
- Azul de metileno.
3.2 Métodos
3.2.1 Manejo de espectrofotómetro
Se siguen las instrucciones del manual del equipo
3.2.2 Procedimiento
a) Determinación de la longitud de onda de máxima absorción.
Pesar 0.1 gramos de azul de metileno.

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Colocar a una fiola de 100 ml. Y aforar con agua destilada.
Hacer diluciones de 1.0 ppm, 1.5 ppm, 2.0 ppm, 3.0 ppm.
Preparar blanco
Leer la absorbancia vs longitud de onda desde 400 – 700
nm.
Graficar la absorbancia vs la longitud de onda para cada una
de las concentraciones realizadas.
b) Determinación del rango de concentración adecuado.
Trabajar con seleccionada.
Preparar el rango suficiente de concentraciones
(hasta donde se desvié la ley de Beer).
Leer absorbancia vs [ ] a .
Graficar
Fijar el rango optimo o adecuado.
c) Determinar el coeficiente de extinción molar (ԑ).
Donde:
= coeficiente de extinción molecular
Concentración molar
Espesor de la cubierta
= Densidad óptica de extinción

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IV. RESULTADOS
En el azul de metileno la longitud de onda apropiada para realizar la lectura
espectrofotométrica es de 664,5 nm. En el dicromato de potasio la longitud de
onda apropiada para realizar la lectura espectrofotométrica es de 340 nm.
PPm abs.
2 0.156
4 0.538
6 0.889
PPm abs.
2
4
6
y = 0.183x - 0.205
R² = 0.999
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
0 1 2 3 4 5 6 7
AxisTitle
Axis Title
abs.
Linear (abs.)
Linear (abs.)
0
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.07
0.08
0 2 4 6 8
AxisTitle
Axis Title
ABSORBANCIA
Linear (ABSORBANCIA)

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V. CUESTIONARIO
A) ¿Qué tipo de soluciones no cumplen la ley de Lambert Beer?
La ley de Bourguer – Lambert – Beer predice, para una longitud de onda
constante y paso óptico fijo, una relación lineal entre Absorbancia y
Concentración con pendiente e l b e intercepto cero. Sin embargo esta
ley sólo se cumple estrictamente o está limitada para soluciones diluidas,
generalmente concentraciones menores o iguales que 10-2
M. La suposición de
que e es independiente de la concentración de una sustancia para una
longitud de onda dada, sólo se cumple en soluciones diluidas ya que ԑno es
constante para soluciones concentradas sino que depende del índice de
refracción de la solución.
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de
C altos, ε varía con la concentración, debido a fenómenos de dispersión de la
luz, agregación de moléculas, cambios del medio, etc. Desafortunadamente
esta ley no se cumple correctamente cuando la concentración es
excesivamente alta debido a la difusión del haz de luz en el medio o si la
intensidad de la fuente luminosa es muy alta ya que se producen variaciones
no lineales en las mediciones. Esto también se observa en concentraciones
diluidas de sustancias absorbentes que contienen concentraciones altas de
otras especies, electrolitos en particular. Cuando los iones están muy cerca
de analitos, alteran su absortividad molar por interacción electrostática,
ocasionando desviaciones de la ley de Beer
B) De acuerdo al color de la sustancia analizada, cuál sería la
longitud de onda más apropiada para realizar la lectura
espectrofotométrica?
En el azul de metileno la longitud de onda apropiada para realizar la lectura
espectrofotométrica es de 664,5 nm. • En el dicromato de potasio la
longitud de onda apropiada para realizar la lectura espectrofotométrica es
de 340 nm.

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C) Consulte aplicaciones industriales de espectrofotometría de
absorción.
Se puede utilizar para analizar la concentración de más de 62 metales
diferentes en una solución. También se emplea en análisis de aguas pues se
puede determinar los metales pesados como el cromo y plomo; también en
los suelos para determinar la fertilidad de los mismos y la presencia de
residuos de placiguidas; en los alimentos también los vemos, puesto que se
utiliza para determinar la cantidad de potasio en productos como la leche en
polvo, frutas, etc. y en la arqueología, es de utilidad para establecer los
elementos metálicos a través de una tabla periódica. Por tanto podemos
decir que la EAA, es el método de análisis óptico más usado en las
investigaciones químicas y biológicas, puesto que es el más efectivo, el cual
ha sido de mucha ayuda a personas como físicos, químicos e ingenieros para
hallar valores muy precisos.
Aplicaciones
La espectrometría UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinación
cuantitativa de soluciones de iones metálicos de transición y compuestos
orgánicos muy conjugados.
Aplicaciones de la espectrofotometría visible yultravioleta.
La espectrofotometría es de gran utilidad en el análisis de espacies
químicas sobre todo para el químicoanalítico.
1. En bioquímica se utiliza:
I. Identificar compuestos por su espectro de absorción.
II. Conocer la concentración de un compuesto en una disolución.
III. Determinar la glucosa en sangre en un laboratorio de análisis
químico.
IV. Seguir el curso de reacciones químicas y enzimáticas

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El espectrofotómetro es de gran utilidad en análisis cuantitativo de
proteínas, en la determinación de ácidos nucleicos incluyendo ADN / ARN,
enzimas.
2. caracterización de aceites crudos de petróleo
El Potencial de espectroscopia de absorción UV-visible para la
determinación exacta de petróleo crudo propiedades físicas y químicas es
fundamental no sólo para la caracterización y producción de un yacimiento,
sino también para el diseño y acabados, conexiones submarinas e
instalaciones de la superestructura. Para medir estas propiedades, las
muestras de reserva de crudo son frecuentemente evaluados por UV /
absorción visible (UVVA) espectroscopia. Esta técnica es cada vez más
empleado para aplicaciones en el campo, para estudios de laboratorio de los
aceites de petróleo crudo y asfáltenos).
VI. BIBLIOGRAFIA
Borfost R. y Scholz, M.1964. Spektroskopische Methoden in der
organischen. Chemie. Berlin.
Sánchez, D.1995. instrumentación en Bioquímica. Consejo nacional
de Ciencia y Tecnologia (CONCYTEC). Lima.
Walton y Reyes. 1978. Análisis químico e instrumental moderno.
Editorial Reverte S.A. España.