El documento describe los pasos para realizar un corte histológico de una muestra de tejido, incluyendo la obtención de la muestra, fijación, deshidratación, inclusión en parafina, corte en el micrótomo, desparafinación, hidratación, coloración, deshidratación y montaje para su observación microscópica.

1. Laboratorio
de histología 1
QFB Erick Rafael Ibarra Coronado

2. 1.Obtención de la muestra
2.Fijación
3.Deshidratación
4.Inclusión
5.Corte
6.Desparafinación
7.Hidratación
8.Coloración
9.Deshidratación
10.Montaje

3. 1. Fijación
Al microscopio debe revelar fielmente la morfología y la localización de los
distintos componentes
• Preservar la estructura
• Abolir el metabolismo celular
• Impedir la degradación enzimática de las células y tejidos
por la autólisis (autodigestión)
• Destruir microorganismos patógenos tales como
bacterias, hongos o virus (putrefacción)
• Endurecer el tejido como resultado de la formación de
enlaces cruzados o de la desnaturalización de moléculas
proteicas.

4. Un buen fijador No debe:
• Extraer componentes químicos
de las células
• Agregar elementos
(precipitados, cristales)
Un buen fijador debe:
• Mantener pH neutro
(7,2 – 7,4)
• Tener una Osmolaridad similar
a la del tejido (evite el colapso
de estructuras)
• Penetrar al interior de la
muestra
Los Fijadores endurecen las piezas
El endurecimiento excesivo del tejido debe evitarse porque lo volvería quebradizo

5. Fijadores químicos
Simples mas usados:
• En microscopia óptica es el
formaldehído 4%
• En microscopia electrónica es el
glutaraldehído
Otros fijadores simples son:
 Alcohol metílico, se emplea para los frotis celulares
 Bicloruro de mercurio, que es una sustancia oxidante
ácida que permite buenas coloraciones nucleares
 Tetróxido de osmio al 1-2% P/V, que es ácido, volátil y
tiene gran afinidad por los lípidos
 Bicromato de potasio, y el ácido acético
 Alcohol etílico se puede emplear como fijador, pero
tiene el inconveniente de endurecer mucho las piezas

6. Formaldehído
• El formaldehído comercial se obtiene en soluciones al 40% P/V en agua y se
lo diluye 10 veces para obtener la formalina, cuya concentración final de
formaldehído es del 4% P/V.
• Las diluciones se realizan con una solución buffer o amortiguadora de
fosfato 0,1M pH 7,4
• El empleo de mezclas frías (4 °C) retarda los procesos de autólisis y favorece
la acción del fijador

7. Mezclas fijadoras
Común:
• Bouin, que contiene ácido pícrico,
formol y ácido acético
Otras mezclas son:
• Líquido de Zenker (bicromato,
acético)
• Líquido de Helly (bicromato,
formol).

8. Fijadores físicos
Objetivo:
 Conservar las muestras biológicas
Congelación:
• Nitrógeno líquido
• Mezclas refrigerantes
Problemas
• La congelación no desnaturaliza las
proteínas
• Muchas de sus propiedades reaparecen
al hidratarse el tejido
• Reproducen procesos de autólisis por
esa razón el Frío no es un fijador
estrictamente hablando.

9. Ventajas
 Inmediatez para diagnosticar la muestra histológica
 La congelación mantiene en el tejido componentes químicos
 La congelación evita las alteraciones antigénicas
 La congelación ofrece la ventaja de preservar la actividad de las enzimas
 Es procedimiento de elección para llevar a cabo estudios histoquímicos

10. Para frotis de sangre
Suspensiones celulares de líquidos de punción abdominal o
torácica
 Desecar la muestra sobre el portaobjeto y flameándolo 3 a 4 veces sobre la
llama esto coagulan las proteínas y luego se procede a la coloración de la muestra
 Desecar a temperatura ambiente y fijar las muestras por inmersión en alcohol
metílico.

11. 2. Deshidratación
• La deshidratación se logra mediante pasajes en
alcoholes de gradación creciente
(alcohol 50°, 70°, 96° y 100°)
• Luego el tejido se sumerge en un solvente orgánico,
generalmente xilol(xileno) o tolueno
Desplaza al alcohol y que es solvente de la parafina
 El tejido se vuelve translúcido, razón por la que
esta fase se conoce como aclaración
 Si la muestra se ve de «aspecto lechoso», la
deshidratación ha sido insuficiente y hay que
recomenzar el proceso.

12. 4.3 Inclusión
Objetivo:
• Endurecer homogéneamente el tejido
• Para lograr obtener secciones delgadas
que puedan observarse al microscopio
óptico
Durante este paso, el bloque se embebe en parafina
o medios sintéticos
 A temperatura ambiente tiene la consistencia de
una vela
 Se calienta para que pase al estado líquido

13. Proceso
• Se sumerge la muestra en un recipiente que contiene parafina líquida/xilol (mezcla 1:1) y se lo deja en el
interior de la estufa de inclusión
• Se hacen otros dos pasajes de 2h cada uno en parafina líquida pura durante los cuales la parafina desplaza
al xilol
• Se construye/usa un molde en papel, en aluminio o en barras de metal («barras de Leuckart»)
• En el que se coloca el bloque de tejido embebido en parafina
• Se llena con parafina líquida
• Orienta el bloque de tejido según el sentido en el que luego se quieran hacer los cortes
• Se enfría el molde, de modo que la parafina se solidifica y se obtiene el taco (bloque de parafina)

14. 4.4 Corte
Los “tacos” de parafina que contienen la
muestra se cortan con un instrumento
denominado micrótomo
 Se asemeja a una máquina de cortar fiambre
 Las secciones para microscopio óptico tienen
un espesor de 5mm
• Micrótomo

15. Vibrátomo
• No está incluido en parafina, no ha sido sumergido
en solventes orgánicos ni ha sufrido calentamiento,
la preservación antigénica del tejido es mejor que la
obtenida con la técnica histológica convencional
• Procedimiento de elección para la
inmunocitoquímica

16. Crióstato
• Tejidos que no han experimentado los procesos
de inclusión ni deshidrataciones
• Para estudios utilizando técnicas
inmunoenzimáticas e inmunofluorescentes

17. Proceso
 Las secciones se levantan con un pincel y se sumergen en un baño termostático con agua a 40 °C
(Esto hace que las secciones se estiren)
 Luego se sumerge un portaobjeto gelatinado o pretratado con albúmina en el baño y, con ayuda de
un pincel, se ubica la sección sobre la superficie del porta objeto mientras se eleva éste
 Los portaobjetos con las secciones se dejan secar a temperatura ambiente o sobre una platina a 40
°C para que las secciones se adhieran a la superficie del vidrio
 La finalidad del pretratamiento con gelatina o albúmina es lograr que las secciones se fijen al
portaobjeto y no se despeguen durante los procedimientos posteriores

18. 4.5 Desparafinación e hidratación
• Quitar la parafina
Proceso:
• Sumerge los portaobjetos con las secciones en xilol
dentro de un recipiente denominado Coplin.
• Este solvente orgánico (xilol) remueve la parafina.
• Luego, las secciones se hidratan sumergiéndolas en
soluciones con alcoholes de graduación decreciente
(100°, 96°, 70° y 50°) y, finalmente, se hace un
pasaje en agua destilada

19. 4.6 Coloración
• Las secciones se tiñen de rutina con hematoxilina y eosina
• Hematoxilina tiñe los núcleos, citoplasma de color rojo con eosina

20. 4.7 Deshidratación
• Dado que las secciones están en un medio acuoso durante la coloración, es necesario deshidratarlas mediante
pasajes en alcoholes de graduación creciente (50°, 70°, 96° y 100°)
• Luego sumergirlas en xilol, el cual desplaza al alcohol y permite la penetración del medio de montaje

21. 4.8 Montaje
• Se añade una gota de bálsamo de Canadá o de un medio de montaje sintético
• Se deposita una delgada lámina de vidrio (cubreobjeto)
• Una vez que el medio de montaje se solidifica, el preparado está listo para su observación al microscopio sin
riesgos de que se mueva el cubreobjeto

22. Los preparados así montados duran décadas y pueden volver a
observarse cuantas veces sean necesarias

23. • Corte histológico
• -Insertar la muestra en el fijador (formaldehido)
• -Deshidratación (insertar la muestra con alcohol a diferentes grados 50°, 70°, 96° y 100°)
• - insertar la muestra en Xilol o tolueno (quitar el alcohol) (aclaramiento)
• -Inclusión insertar la muestra en un recipiente con Parafina líquida/xilol (mezcla 1:1)
• - meter a la estufa de inclusión (60°)
• - en el molde se coloca el tejido embebido en parafina y se llena con parafina liquida
• - Corte microtomo
• - Baño maría (portaobjetos)
• - Desparafinación sumergir en xilol
• - Hidratación sumergir en alcohol y agua destilada (100°, 96°, 70°, 50°)
• - Coloración (hematoxilina, agua, eosina, agua)
• - Deshidratación (insertar la muestra con alcohol a diferentes grados) (50°, 70°, 96° y 100°)
• - insertar en xilol
• - Montaje bálsamo de Canadá en el portaobjetos
• - poner cubreobjetos
• - esperar la solidificación
Elabora un video de menos de 2 minutos de duración, en el cual simules y describas los pasos a seguir para la realización de la
preparación de un tejido, con los recursos que tengas a la mano, insertar el link del video en el documento de Word.
Material mínimo necesario
- Plastilina (muestra de
tejido)
- Vasos desechables
indicando que es lo que
contiene
- Material para simular el
resto de pasos
- Opcionales:
plumones/pluma,
colorantes