El documento describe los principales pasos de la técnica histológica para preparar muestras para su examen microscópico, incluyendo la obtención del material, fijación, inclusión, obtención del corte, coloración y montaje final. Explica conceptos como fijadores químicos, tipos de micrótomos, clasificaciones de colorantes e implicancias de cada paso para preservar la estructura de los tejidos.

1. Facultad de Ciencias Agrarias y
Veterinarias
Universidad Católica de Salta.

2. MODULO I°
METODOS DE ESTUDIO
METODOS HISTOLOGICOS:
1-Examen inmediato o in vivo:
a) En fresco:
b) Coloración vital:
2- Examen mediato o post-morten:
Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie de
pasos, la Técnica Histológica
TECNICAS HISTOLOGICAS
DEFINICION: Es el conjunto de operaciones que se somete un
material organizado para hacer posible su estudio por medio del
microscopio, posibilitando la observación de las estructuras no
visibles al ojo humano.

3. Técnica histológica
Pasos de la técnica:
1- Obtención del material.
2- Fijación.
3- Inclusión.
4- Obtención del corte.
5- Coloración.
6- Montaje final.

4. 1- Obtención del material

5. 2 Fijación
Cualidades de un buen fijador:
1) Actuar con rapidez y detener los procesos autolíticos.
2) Buen poder de penetración.
4) Conservar lo mas fielmente la estructura del tejido.
4) No interferir y facilitar los procesos posteriores.
5) Endurecer el tejido y darle mayor consistencia.
6) Insolubilizar los componentes de los tejidos.
7) No producir estructuras artificiales.
Clasificación de los fijadores
1- Fijadores químicos: son los más empleados y pueden ser:
a) Simples: constituido por una sola sustancia.
b) Compuestos o mezclas fijadoras: constituidas por
varias sustancias.

6. 10 cc

7. 3

8. 4- Obtención del corte:
Para obtener cortes finos se utilizan aparatos
denominados micrótomos, hay varios tipos.
Tipo Minot tiene dos partes fundamentales:
1- El carril de la cuchilla, que es una pieza fija,
2- La platina, que es una pieza de metal excavado, en
donde se fija la pieza. La platina se desliza
verticalmente sobre el filo de la cuchilla, y se obtiene
un corte de un espesor previamente elegido.

9. El Minot dispone de 4 posiciones de ajuste,
según el corte sea de 1-10 µm, 11-20 µm,
21-30 µm o 31-40 µm así como ajuste del
ángulo de la cuchilla graduado,
inmovilización de la rueda y mecanismo de
avance de gran precisión.

10. Montaje del corte:

11. Los colorantes se pueden clasificar de diferente manera:
1-Colorantes naturales:
a) animales: carmín.
b) vegetales: hematoxilina, orceina.
2-Colorantes artificiales o sintéticos: (colorantes de
anilina).
a) ácidos: Son colorantes citoplasmáticos.
b) básicos: Son colorantes nucleares.
c) neutros: Tiñen citoplasma y núcleo de diferente color
3-Colorantes indiferentes: no forman sales. Sudan III, rojo
escarlata, etc.
Sustancias basofilas se tiñen con los colorantes básicos
Sustancias acidofilas se tiñen con los colorantes ácidos
Sustancias neutrofilas se tiñen con los colorantes neutros.

12. Los pasos de la coloración son:
b) Desparafinización:
Se elimina la parafina con solventes como el
benzol, xilol o toluol
b) Hidratación:
El agregado de agua se realiza mediante un
pasaje por alcoholes decrecientes, alcohol de
100°, 96°, 80° ,70° y agua destilada.
c) Coloración propiamente dicha:
Se comienza con la hematoxilina, virando con
agua corriente que es débilmente alcalina (sales
alcalinotérreas). Y luego la Eosina con la cual se
sobre colorea y luego se elimina el exceso.

13. C o l o r a c ió n :

14. 6) Montaje final
Las fases del montaje final son:
• Deshidratación:
b) Homogenización o aclaración:
c) Colocación del cubreobjeto: con el objeto de
proteger el preparado, se la recubre con una
laminilla de vidrio de 0,2 mm de espesor, o
cubreobjeto. Para adherir el cubreobjeto al
portaobjeto, se emplea una resina, el Bálsamo
de Canadá.