Este documento describe un procedimiento para determinar la fragilidad osmótica de eritrocitos mediante la exposición de una muestra de sangre a una serie de soluciones salinas hipotónicas de diferentes concentraciones. Los eritrocitos se suspenden en cada solución y se observa su hemolisis después de centrifugación para determinar la concentración más baja que provoca la ruptura de las células, lo que indica mayor fragilidad osmótica. El procedimiento proporciona información sobre posibles anemias causadas por una mayor susceptibilidad de los eritro

1. Universidad Autónoma de Chiapas
Facultad de Ciencias Químicas C-IV
Extensión Ocozocoautla de Espinosa
Licenciatura de Químico Farmacobiólogo
Hematología Diagnóstica; 7º Semestre
M en C. Martín Velázquez Gómez, profesor de Asignatura
Práctica 4: Fragilidad osmótica
Fundamento
En ciertos estados patológicos los eritrocitos se destruyen continua y
aceleradamente ocasionando anemia. En estos casos interesa averiguar si la
hemólisis excesiva depende de una mayor fragilidad de los eritrocitos
(Esferocitosis hereditaria). Se comprueba la resistencia de los eritrocitos
sometiéndolos a la acción de varios agentes nocivos. En las técnicas clínicas se
emplean casi siempre soluciones hipotónicas. Los hematíes suspendidos en
solución hipotónica de cloruro de sodio absorben agua, se hinchan, adquieren
forma esférica, se hacen más frágiles, reventando.
El incremento de la fragilidad conduce a lisis del hematíe, estado determinado por
2 factores:
a) es inversamente proporcional a la concentración de cloruro de sodio y
b) es directamente proporcional al grosor de la membrana de los hematíes.
La célula que más se aproxima a la forma esférica (Esferocito), tiene un volumen
muy pequeño para su contenido estando su capacidad de expansión, limitada. Por
lo tanto a concentraciones relativamente bajas de sales (hipotónicas), estalla al
absorber pequeñas cantidades de agua (fragilidad osmótica aumentada).
Objetivo
Determinar la fragilidad osmótica de una muestra problema en EDTA mediante
una serie de diluciones de solución salina isotónica (SSI).
Materiales
15 tubos de ensayo de 12 x 75 mm
Gradilla de unisel o metálica
Pipeta volumétrica de 5 mL
Micropipeta de volumen variable de 100 a 1000 uL
Centrifuga clínica
Puntillas amarillas y azules
Soluciones hipotónicas con las siguientes concentraciones: 0.10%, 0.20%,
0.30%, 0.35%, 0.40%, 0.45%, 0.50%, 0.55%, 0.60%, 0.65%, 0.70%, 0.75%,
0.80%, 0.85%. (a partir de SSI)

2. Universidad Autónoma de Chiapas
Facultad de Ciencias Químicas C-IV
Extensión Ocozocoautla de Espinosa
Licenciatura de Químico Farmacobiólogo
Hematología Diagnóstica; 7º Semestre
M en C. Martín Velázquez Gómez, profesor de Asignatura
Muestra de sangre total con EDTA
Método
1. Extraer sangre del paciente con anticoagulante EDTA
2. Centrifugar la muestra a 2500 RPM por 5 minutos y extraer el concentrado
de glóbulos rojos en un tubo limpio.
3. Realizar diluciones de SSI (0.85%) con volumen final de 5 mL, obteniendo
las concentraciones finales siguientes: 0.10%, 0.20%, 0.30%, 0.35%,
0.40%, 0.45%, 0.50%, 0.55%, 0.60%, 0.65%, 0.70%, 0.75%, 0.80%, 0.85%.
apoyarse con la fórmula V1C1=V2C2 (Ver figura 1)
4. Colocar 0.05 mL (50 uL) de sangre centrifugada (solo glóbulos rojos) a cada
tubo, mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente por 30 minutos.
5. Centrifugar a 2500 RPM por 5 minutos y observar resultados (Ver figura 2)
Figura 1. Serie de diluciones en tubo de solución salina
partiendo de la concentración de 0.85%

3. Universidad Autónoma de Chiapas
Facultad de Ciencias Químicas C-IV
Extensión Ocozocoautla de Espinosa
Licenciatura de Químico Farmacobiólogo
Hematología Diagnóstica; 7º Semestre
M en C. Martín Velázquez Gómez, profesor de Asignatura
Figura 2. Observación de hemólisis inicial y total de GR en SS hipotónicas
Interprete sus resultados a partir de la siguiente tabla de valores: