Este documento explica cómo realizar un recuento de plaquetas en un frotis sanguíneo. Describe los pasos para realizar un frotis sanguíneo, incluida la tinción de Wright, y cómo contar plaquetas bajo el microscopio para calcular el recuento de plaquetas por mm3 de sangre. El propósito es enseñar a los estudiantes a identificar células sanguíneas en un frotis y determinar el recuento de plaquetas.

1. “Recuento de plaquetas en cámara”
Introducción.
Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemostático
del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 μ, de bordes irregulares,
pero pueden tener forma esférica u ovalada, carecen de núcleo y son muy frágiles.
Provienen de una célula gigante que mide de entre 50-100 μ de diámetro llamada
megacariocito.
Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los mecanismos de la
hemostasia (Hemos=sangre, stasis=detención) adhiriéndose entre ellas y a las paredes de
los vasos sanguíneos lesionados, para formar así el trombo plaquetario o tapón
hemostático.
Fundamento.
Frotis o extensión sanguínea.
Una extensión o frotis sanguíneo consiste en recubrir parcialmente un porta con una gota
de sangre, de tal manera que las células de ésta se dispongan formando una sola capa de
ellas. Esto puede hacerse manual o automáticamente. Lo último se realiza mediante un
aparato (spinner) que centrifuga rápidamente el porta con la sangre depositada en su
centro. Con este aparato se obtienen unos frotis que presentan una distribución celular
muy homogénea.
1. PARTES DE UNA EXTENSIÓN.
1.1. CABEZA.
 Es la zona inicial de la extensión.
 Es la región más gruesa.
 En ella se encuentra una mayor proporción de linfocitos, y los hematíes forman
aglomerados (pilas de monedas).
1.2. CUERPO.
 Es la zona media del frotis.
 Su espesor es el apropiado.
 En ella existe una adecuada proporción entre los distintos tipos de leucocitos.

2.  Contiene la "zona ideal" de observación, que corresponde a la porción que limita
con la cola.
1.3. COLA.
 Es la zona final de la extensión.
 Suele tener un aspecto redondeado.
 Es la región más fina.
 En ella se encuentra una mayor proporción de leucocitos grandes (granulocitos y
monocitos), y además. los hematíes están deformados y presentan una tonalidad
uniforme.
 En su porción terminal suelen ser más abundantes las plaquetas, sobre todo si son
grandes.
1.4. BORDES.
 Contienen una mayor proporción de leucocitos grandes.
Si están deshilachados, en ellos las células son difíciles de reconocer por estar deformadas
o destruidas
2. CARACTERÍSTICAS DE UNA BUENA EXTENSIÓN.
 La cabeza ha de estar cerca de uno de los extremos del porta.
 La cola debe estar cercana al otro extremo del porta, pero sin llegar a él.
 El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado. Ese fino
deshilachamiento recibe el nombre de "barbas".
 Toda la extensión ha de ser fina y homogénea.
 Los bordes laterales de la extensión deben estar separados de los bordes del porta
por 1 mm aproximadamente.
 Una extensión normal ha de tener una longitud de las ¾ partes del portaobjetos.
 El uso de teñidores automáticos exige la realización de extensiones más cortas que
las consideradas normalmente como correctas (con una longitud de la mitad del
portaobjetos).

3. Tinción de Wright.
La tinción de Wright es un tipo de tinción usada en histología para facilitar la
diferenciación de los tipos de células de la sangre. Se usa principalmente para
teñir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio.
En citogenética se usa para teñir cromosomas, para facilitar el diagnóstico
de síndromes y enfermedades.
Lleva el nombre de James Homer Wright, su descubridor, que la obtuvo modificando
la tinción de Romanowsky, en 1902.
Debido a que ayuda a distinguir fácilmente las células de la sangre se convirtió en una
técnica muy usada para el conteo de los glóbulos, una técnica rutinaria usada cuando hay
sospecha de infecciones.
La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky.
Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación,
así como eosina Y o eosina B.
La acción combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky que da una
coloración púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos y da color
rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto son el azul B y la eosina Y.
Las propiedades de tinción de Romanowsky dependen del enlace de los colorantes a las
estructuras químicas y de las interacciones del azul B y la eosina Y. Los agrupamientos
de ácidos nucleicos, las proteínas de los núcleos celulares y el citoplasma inmaduro
reactivo, fijan el azul B, colorante básico.

4. La eosina Y, colorante ácido, se fija a los agrupamientos básicos de
las moléculas de hemoglobina y a las proteínas básicas.
Propósito.
Que le alumno a través de esta práctica sepa realizar o desarrollar un frotis sanguíneo con
su técnica especifica; y sobre todo que sepa identificar las células sanguíneas, de dicho
frotis.
Material.
Equipo vacutainer
VIDRIO:
Portaobjetos
SUSTANCIAS:
Solución buffer
Colorante Wright
Sangre en tubo EDTA
EQUIPO:
Microscopio
DESARROLLO:
Frotis sanguíneo.
Es importante usar portaobjetos limpios y libres de grasa
1. Poner una gota de sangre a 1 o 2 mm del borde del portaobjetos
2. El portaobjeto se deja sobre la mesa con la gota hacia arriba
3. Se escoge para extender la sangre, otro portaobjetos con un borde liso y regular, cuyas
esquinas se rompen para que la anchura del borde que extiende la sangre sea de unos
4mm menor que la anchura total del portaobjetos
4. El borde de extensión se pone sobre el portaobjetos que tiene la gota de sangre
formando un ángulo de 30º
5. El borde del portaobjetos que sirve para extender la sangre se pone delante de la gota
de sangre y se hace retroceder hasta que toque la gota y esta se extienda respetando los
límites mencionados

5. 6. Se hace deslizar en sentido contrario, rápido, cuidadoso y uniformemente7.Mientras
más rápido es el movimiento más espeso resulta el frotis8.Dejar secar al aire y teñir con
Wright
Técnica Wright:
1. Una vez realizado y seco el frotis se pone sobre una varilla de tinción
2. La extensión se cubre con el colorante y se deja actuar 1 min. El alcohol metálico fija la
sangre
3. Agregar agua destilada hasta que aparezca una escarcha metálica y dejarlo actuar por
2min.
4. Se lava con agua destilada y se deja secar, observar al microscopio con aceite de
inmersión.
Hematocrito:
- Llenar el tubo de micro hematocrito mediante acción capilar, ya sea por una punción que
hace que la sangre fluya libremente o por sangre venosa bien mezclada. Los tubos
capilares deben estar llenos en dos terceras partes.
-El extremo opuesto y exento de sangre se llena con plastilina para sellarlo.
- Colocar el capilar sellado en una centrífuga para el micro hematocrito, con el extremo
abierto hacia el centro de la micro centrífuga.
- Centrifugar a velocidades de 10,000 a 13,000 rpm por 5 minutos.
- Después de centrifugado leer en la tabla para hematocrito haciendo coincidir el menisco
del plasma con el de la marca de la tabla y el fondo del empacado de eritrocitos que
coincidan con el inicio de la marca de la tabla.- Leer siempre en la dirección de la
numeración ascendente cuantos mL de empacados de eritrocitos tiene la muestra

6. Resultados
Cálculos: primero debes contar un mínimo de 10 campos con objetivo 100x en la cola del
frotis, en el cual más o menos hay unos 200 glóbulos. Conocer el hematocrito del
paciente, así obtienes el recuento de glóbulos rojos. Después sacas una relación por
ejemplo: total de plaquetas en los 10 cpos: 250 recuento de glóbulos rojos: 5200000 x
MM3 250 plaq en 2000 glóbulos x 5200000 glóbulos es igual a 650000 plaquetas x mm3
Conclusiones.

7. Bibliografía.
http://www.slideshare.net/edwin1211/frotis
http://leucocitosaltos.blogspot.mx/2013/01/frotis-de-sangre-periferica.html
http://www.buenastareas.com/ensayos/Recuento-De-Plaquetas-En-Frotis-
Sanguieno/5603563.html
http://www.facultadcienciasquimicas.buap.mx/ligas/acredita/QFB/data/4_2%20Curriculum/4.2.1
0%20%20Actas%20de%20%C3%A1reas%20Programas%20de%20asig%20y%20Manuales%20Lab/
Manuales%20de%20Laboratorio/An%C3%A1lisisCl%C3%ADnicosLab-pdf/
LABORATORIO%20DE%20HEMATOLOGIA%20II.pdf