El documento describe el proceso para realizar un recuento diferencial de leucocitos mediante un frotis y tinción de Wright. Se detallan los materiales, el procedimiento de tinción y los resultados esperados, así como los valores normales de los diferentes tipos de leucocitos. Además, se resalta la importancia de la fijación y el adecuado manejo de las muestras para asegurar resultados precisos.

1. RECUENTO DIFERENCIAL DE
LEUCOCITOS.
Requiere realizar un frotis, tinción Wright y
conteo.
Su finalidad es diferenciar los leucocitos, así
como reportar la presencia de células en la
sangre que deberían estar en la médula ósea.

2. EXTENDIDOS DE
SANGRE.
• Cabeza con margen
de 1.5 a 1.9 cm.
• Borde de la cola
finamente
deshilachado
(barbas).
• Extensión fina y
homogénea.
• ¾ partes del
portaobjetos.

3. ERRORES EN LOS
FROTIS.

4. FROTIS IDEAL.
Se visualizan dos neutrófilos
y un monocito, rodeados de
eritrocitos.

5. TINCIÓN DE WRIGHT.
 El colorante está compuesto de azul de metileno en un 50-75% (que tiñe de azul
las partes ácidas de las células) y eosina (tiñe partes alcalinas), disueltos en
metanol (permite fijación de células).
 Tiñe el núcleo de púrpura, dejando el citoplasma ligeramente azulado.
 Dada la presencia de metanol, no requiere fijación antes de la coloración.
 En caso de no teñir el mismo día el extendido, fijar para evitar deterioro del frotis.
 La sangre cambiará de rojo a café claro si se fija con alcohol metílico.

6. MATERIALES PARA REALIZAR
TINCIÓN.
 Frotis sanguíneo.
 Puente de tinción.
 Colorante de Wright.
 Solución buffer pH 7,2.
 Piseta.
 Cristalizador o vertedero.
 Pipeta Pasteur.
 Tubo de ensayo.
 Cubre objetos.

7. PROCEDIMIENTO.
1. Se coloca el puente de tinción en el cristalizador o en un vertedero con el frotis encima.
2. Se cubre de colorante Wright utilizando una pipeta Pasteur. Esperar un minuto, escurrir y
enjuagar con solución buffer.
3. Dejar secar verticalmente.
4. Mezclar en un tubo de ensayo 0.5 ml de Wright y 0.5 ml de solución buffer.
5. Aplicar en la muestra y deja actuar de 3 a 5 minutos.
6. Escurrir exceso de colorante y enjuagar con agua destilada.
7. Lavar de nuevo con solución buffer.
8. Escurrir y dejar secar verticalmente de nuevo.
9. Finalmente, colocar cubre objetos una vez haya secado.

8. Colorante Wright (1
minuto).
Mezcla de Wright y solución
tampón (3-5 minutos).

9. RESULTADOS DEL FROTIS.
 Núcleos de leucocitos en azul púrpura, con cromatina y paracromatina
diferenciadas.
 Gránulos de neutrófilos en lila o violeta
 Gránulos eosinófilos en rojo-naranja.
 Gránulos basófilos, púrpura-azul oscuro.
 Citoplasma de linfocitos azul claro.
 Citoplasma de monocitos ligero azul.
 Hematíes en rosa y plaquetas lila oscuro.

10. CONTEO DIFERENCIAL EN MICROSCOPIO.
 Requiere un esquema ilustrado de los cinco tipos de leucocitos distintos.
 Colocar frotis sanguíneo sobre la platina del microscopio. Enfocar directamente con el
objetivo de 100x (inmersión).
 Contar 100 leucocitos y anotar el número correspondiente de neutrófilos, basófilos,
eosinófilos, linfocitos y monocitos.
 Para obtener las cifras absolutas, transformar la cifra porcentual de cada tipo de leucocito,
tomando como número total al cien.

11. VALORES NORMALES
 Neutrófilos 60-70%,
 Eosinófilos 2-4%,
 Basófilos 0,5-1%,
 Linfocitos 20-25%
 Monocitos 3-8%.