1) La purificación y separación de enzimas involucra homogenizar las células para liberar las enzimas y luego usar métodos como centrifugación y cromatografía para separar las enzimas de otros componentes celulares.
2) La cromatografía de afinidad separa proteínas basado en su afinidad por ligandos específicos, mientras que la cromatografía de exclusión molecular separa proteínas por su tamaño.
3) La electroforesis separa proteínas basado en su carga neta cuando se aplica un campo el
El documento presenta los resultados de una titulación potenciométrica de un ácido poliprótico (H3PO4) con una base fuerte (NaOH). Se utilizaron los métodos de la primera y segunda derivada y el método de Gran para determinar los puntos de equivalencia. Los resultados muestran que los métodos permitieron identificar claramente los puntos de equivalencia y calcular las concentraciones originales del ácido y sus constantes de acididad (pKa).
Determinación de la curva de crecimiento por modelo de Gompertz yuricomartinez
Este documento describe un estudio para determinar la curva de crecimiento de la levadura Sacharomyces cerevisae aplicando el modelo de Gompertz. El objetivo es confeccionar la gráfica de crecimiento de la levadura mediante este modelo y calcular el tiempo de generación. Se explican conceptos clave como la formulación de medios de fermentación, el crecimiento celular y los modelos matemáticos para representar la cinética de crecimiento microbiano.
Este documento describe diferentes métodos argentométricos para determinar cloruros en muestras, incluyendo los métodos de Fajans, Mohr y Volhard. Se realizaron estandarizaciones de AgNO3 y KSCN, y luego se aplicaron los métodos para determinar la concentración de cloruros en muestras de agua, sal de cocina y una mezcla de halogenuros. Los resultados incluyeron las concentraciones de cloruros encontradas en cada muestra estudiada.
La vía de Entner-Doudoroff es una ruta metabólica alternativa a la glucolisis y la ruta de las pentosas fosfato que cataliza la degradación de la glucosa a piruvato usando enzimas diferentes. Algunas bacterias usan esta ruta en lugar de la glucolisis. La glucosa se convierte en dos moléculas de piruvato con la formación de ATP, NADH y NADPH.
Este documento presenta información sobre la técnica analítica de permanganometría. Explica que las soluciones de permanganato de potasio son altamente oxidantes y se utilizan para titular analitos reductores. Describe los puntos finales comunes y los patrones primarios utilizados para estandarizar las soluciones de permanganato, como el oxalato de sodio y el óxido arsenioso. También incluye detalles sobre la preparación y estabilidad de las soluciones patrón de permanganato, y presenta un ejemplo de cur
1) El documento describe diferentes pares redox y cómo varía su potencial con respecto a la fracción del reactivo en forma oxidada. 2) Explica que las curvas de titulación redox dependen del valor de n y que la curva del hierro (II)-hierro(III) es más empinada que la del estaño(II)-estaño(IV). 3) Detalla diferentes tipos de indicadores redox como sustancias coloreadas, indicadores específicos y el uso del potencial redox.
El documento trata sobre la estandarización de soluciones ácido-base. Explica que la estandarización permite determinar la concentración real de una solución titulante mediante la reacción con un estándar primario o secundario. Detalla los materiales, equipos, reactivos e indicadores necesarios, así como los pasos para estandarizar una solución de ácido clorhídrico usando carbonato de sodio como estándar primario y posteriormente realizar una estandarización secundaria.
- El documento describe el modelo cinético de Michaelis-Menten para la cinética enzimática. Según este modelo, las enzimas catalizan reacciones a través de la formación de un complejo enzima-sustrato de manera temporal.
- La velocidad de la reacción está dada por la ecuación de Michaelis-Menten, la cual depende de dos parámetros: la velocidad máxima (Vmax) y la constante de Michaelis (KM).
- La Vmax representa la velocidad cuando todos los sitios activos de
El documento presenta los resultados de una titulación potenciométrica de un ácido poliprótico (H3PO4) con una base fuerte (NaOH). Se utilizaron los métodos de la primera y segunda derivada y el método de Gran para determinar los puntos de equivalencia. Los resultados muestran que los métodos permitieron identificar claramente los puntos de equivalencia y calcular las concentraciones originales del ácido y sus constantes de acididad (pKa).
Determinación de la curva de crecimiento por modelo de Gompertz yuricomartinez
Este documento describe un estudio para determinar la curva de crecimiento de la levadura Sacharomyces cerevisae aplicando el modelo de Gompertz. El objetivo es confeccionar la gráfica de crecimiento de la levadura mediante este modelo y calcular el tiempo de generación. Se explican conceptos clave como la formulación de medios de fermentación, el crecimiento celular y los modelos matemáticos para representar la cinética de crecimiento microbiano.
Este documento describe diferentes métodos argentométricos para determinar cloruros en muestras, incluyendo los métodos de Fajans, Mohr y Volhard. Se realizaron estandarizaciones de AgNO3 y KSCN, y luego se aplicaron los métodos para determinar la concentración de cloruros en muestras de agua, sal de cocina y una mezcla de halogenuros. Los resultados incluyeron las concentraciones de cloruros encontradas en cada muestra estudiada.
La vía de Entner-Doudoroff es una ruta metabólica alternativa a la glucolisis y la ruta de las pentosas fosfato que cataliza la degradación de la glucosa a piruvato usando enzimas diferentes. Algunas bacterias usan esta ruta en lugar de la glucolisis. La glucosa se convierte en dos moléculas de piruvato con la formación de ATP, NADH y NADPH.
Este documento presenta información sobre la técnica analítica de permanganometría. Explica que las soluciones de permanganato de potasio son altamente oxidantes y se utilizan para titular analitos reductores. Describe los puntos finales comunes y los patrones primarios utilizados para estandarizar las soluciones de permanganato, como el oxalato de sodio y el óxido arsenioso. También incluye detalles sobre la preparación y estabilidad de las soluciones patrón de permanganato, y presenta un ejemplo de cur
1) El documento describe diferentes pares redox y cómo varía su potencial con respecto a la fracción del reactivo en forma oxidada. 2) Explica que las curvas de titulación redox dependen del valor de n y que la curva del hierro (II)-hierro(III) es más empinada que la del estaño(II)-estaño(IV). 3) Detalla diferentes tipos de indicadores redox como sustancias coloreadas, indicadores específicos y el uso del potencial redox.
El documento trata sobre la estandarización de soluciones ácido-base. Explica que la estandarización permite determinar la concentración real de una solución titulante mediante la reacción con un estándar primario o secundario. Detalla los materiales, equipos, reactivos e indicadores necesarios, así como los pasos para estandarizar una solución de ácido clorhídrico usando carbonato de sodio como estándar primario y posteriormente realizar una estandarización secundaria.
- El documento describe el modelo cinético de Michaelis-Menten para la cinética enzimática. Según este modelo, las enzimas catalizan reacciones a través de la formación de un complejo enzima-sustrato de manera temporal.
- La velocidad de la reacción está dada por la ecuación de Michaelis-Menten, la cual depende de dos parámetros: la velocidad máxima (Vmax) y la constante de Michaelis (KM).
- La Vmax representa la velocidad cuando todos los sitios activos de
El documento describe una práctica de laboratorio en la que se determinaron los puntos de equivalencia de tres muestras (ácido clorhídrico fuerte, ácido acético débil y una mezcla de ambos) mediante titulaciones conductimétricas con hidróxido de sodio. Se midió la conductancia de cada muestra al adicionar volúmenes de NaOH y se graficaron los resultados, identificando los puntos de equivalencia. Adicionalmente, se calcularon las concentraciones de HCl y CH3COOH en las muestras
Este documento presenta los procedimientos para realizar una práctica de argentometría. Describe la preparación de soluciones estándar de nitrato de plata y su estandarización utilizando cloruro de sodio. Explica los métodos de Volhard, Mohr y Fajans para la valoración de cloruros y presenta los cálculos necesarios para determinar la normalidad de las soluciones. El objetivo es que los estudiantes comprendan los fundamentos y aplicaciones del análisis por precipitación.
En términos generales biotecnología se puede definir como el uso de organismos vivos o de compuestos obtenidos de organismos vivos para obtener productos de valor para el hombre.
Este documento describe el procedimiento para estandarizar soluciones ácido-base mediante titulación. Se realizan dos titulaciones, una para estandarizar un ácido fuerte usando una base débil como patrón y otra para estandarizar una base fuerte usando el ácido estandarizado anteriormente. El objetivo es determinar las concentraciones reales de las soluciones mediante cálculos que involucran las reacciones químicas, los volúmenes consumidos y los equivalentes.
separacion de fosfolipidos por cromatografia de capa finaIPN
Este documento describe dos técnicas para analizar lípidos en la yema de huevo. La primera es la cromatografía en capa fina para separar fosfolípidos, mostrando sus ventajas sobre la cromatografía en papel. La segunda es el método de Lieberman-Burchard para determinar la concentración de colesterol, basado en la reacción del colesterol con anhídrido acético y ácido sulfúrico para formar un complejo de color verde cuantificable. Se aplicaron ambos métodos para
Este documento presenta los resultados de pruebas bioquímicas realizadas para evaluar el metabolismo de aminoácidos en diferentes microorganismos. Se explican las pruebas SIM, caldo triptona y LIA y sus resultados para Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Bacillus subtilis y otras bacterias. Las pruebas miden la producción de ácido sulfhídrico, indol, amoniaco y la descarboxilación de lisina. Aunque hubo algunas discrepancias, la mayoría de los resultados coincidieron con la teoría.
El documento describe un estudio en el que se construyeron curvas de calibración relacionando la concentración de permanganato de potasio con la absorbancia medida por espectrofotometría. Cuatro analistas realizaron las mediciones obteniendo coeficientes de correlación entre 0.976-0.9878, indicando alta linealidad del método. El estudio concluyó que el método empleado mostró linealidad y exactitud al haber coeficientes de correlación cercanos a cero.
El documento describe un experimento para determinar el punto de equivalencia en la titulación potenciométrica de una solución de ácido acético débil con hidróxido de sodio fuerte. Se utilizaron varios métodos como la primera y segunda derivada y el método de Gran para determinar el punto de equivalencia. También se observó el efecto de los indicadores rojo de metilo y fenolftaleína en el punto de viraje.
Este documento describe una serie de experimentos sobre las propiedades de las proteínas. En el primer experimento, se determinó que las proteínas en suero sanguíneo actúan como un buen amortiguador de pH. En el segundo, se encontró que el punto isoeléctrico de la caseína es de aproximadamente pH 4.7. Finalmente, se evaluó cómo diferentes iones pueden hacer precipitar a las proteínas dependiendo del pH de la solución.
Este documento describe un experimento para determinar la concentración de cafeína en una bebida energizante utilizando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Se realizó una curva de calibración inyectando muestras de cafeína de concentraciones conocidas en el HPLC. Luego se inyectó la muestra de bebida energizante y se cuantificó la cafeína presente basándose en el área del pico cromatográfico y la curva de calibración. El resultado indicó que la concentración de
Reporte de práctica 5. Curva de crecimiento.Alan Hernandez
Durante la práctica, el equipo analizó muestras de carne de pollo y puerco de burritos de la cafetería de la escuela para identificar bacterias. Descubrieron la presencia de Proteus, una bacteria patógena, en la carne de puerco. También observaron el crecimiento bacteriano en placas de cultivo a las 24 y 72 horas. Esto les permitió evaluar los estándares de salubridad de los alimentos servidos y aprender sobre el desarrollo de bacterias.
Determinacion cuantitativa de la actividad enzimatica del preparadoyuricomartinez
Este documento describe un laboratorio sobre la determinación cuantitativa de la actividad enzimática de un preparado enzimático puro. El objetivo es desarrollar una curva de calibración patrón y determinar la actividad enzimática en unidades. Explica conceptos clave como la cinética de reacciones químicas, el efecto de la temperatura en la velocidad de reacción, catalizadores como las enzimas, y la cinética de reacciones enzimáticas siguiendo el modelo de Michaelis-Menten.
El documento presenta los resultados de un experimento de cinética química realizado por estudiantes de química para determinar el orden parcial y la constante de velocidad de la reacción entre yoduro de potasio y persulfato de potasio mediante espectrofotometría. Los estudiantes midieron la absorbancia de la solución en intervalos de tiempo y determinaron que la reacción es de orden cero, con una constante de velocidad de 5.33x10-3.
Este documento describe una práctica de laboratorio sobre la determinación del pH y la preparación de soluciones amortiguadoras. En la práctica, se midió el pH de dos bebidas, café y jugo, usando un pH metro. Luego, se preparó una solución amortiguadora de acetato de sodio a pH 5 agregando gotas de ácido acético hasta estabilizar el pH. El documento concluye que medir el pH es importante en diversas áreas y que las soluciones amortiguadoras son útiles para estabilizar el pH y tratar mal
El análisis gravimétrico es una técnica analítica que mide la masa para determinar la cantidad de un componente químico. Implica formar, separar y pesar un precipitado (pp) a partir de una reacción química. El pp debe ser lo suficientemente insoluble para minimizar pérdidas y debe formar cristales grandes que se puedan filtrar fácilmente. El proceso de precipitación, lavado, filtración e incineración permite separar el componente químico de interés y medir su masa con
2. unidad ii. sintesis y reacciones de alcoholes y fenolesjuan_pena
Este documento describe las propiedades de los alcoholes. Explica que los alcoholes son compuestos orgánicos que contienen el grupo funcional hidroxilo (-OH). También describe algunas de sus propiedades físicas como su punto de ebullición y solubilidad en agua, así como sus propiedades químicas como su acidez y métodos de preparación como la sustitución nucleófila y la reducción de compuestos carbonílicos.
Este documento describe varias pruebas bioquímicas utilizadas para identificar bacterias, incluyendo pruebas para determinar la capacidad de las bacterias para utilizar diferentes azúcares, producir enzimas como la catalasa y coagulasa, y hidrolizar compuestos como la esculina, ADN, arginina y hipurato. Explica los fundamentos, técnicas e interpretación de los resultados de cada prueba.
Reporte de práctica 3. Pruebas bioquímicasAlan Hernandez
El documento describe un experimento de identificación de bacterias mediante pruebas bioquímicas. Se prepararon medios de cultivo como McConkey, Nutritivo y VBB en placas de Petri e inocularon con muestras. Tras incubar, se aplicó tinción de Gram a las colonias y se identificaron colonias Gram negativas. Posteriormente, se realizaron pruebas bioquímicas en tubos de ensayo inoculados con las colonias Gram negativas. Los resultados de las pruebas bioquímicas permitieron identificar las bacterias presentes
El documento trata sobre diversos temas relacionados con las proteínas. Describe las enfermedades moleculares causadas por anormalidades en proteínas. Explica los métodos para purificar proteínas, incluyendo precipitación selectiva, cromatografía y electroforesis. También cubre la degradación y envejecimiento de proteínas mediado por enzimas como las calpaínas y la ubiquitina.
El documento proporciona información sobre enzimas, vitaminas y coenzimas. Explica que las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas específicas en el cuerpo, y pueden clasificarse como simples o complejas dependiendo de si requieren cofactores. También describe las vitaminas y coenzimas, que participan en procesos metabólicos importantes. El objetivo es explicar el papel fundamental de estas sustancias en el metabolismo y la comprensión de los procesos biológicos.
El documento describe una práctica de laboratorio en la que se determinaron los puntos de equivalencia de tres muestras (ácido clorhídrico fuerte, ácido acético débil y una mezcla de ambos) mediante titulaciones conductimétricas con hidróxido de sodio. Se midió la conductancia de cada muestra al adicionar volúmenes de NaOH y se graficaron los resultados, identificando los puntos de equivalencia. Adicionalmente, se calcularon las concentraciones de HCl y CH3COOH en las muestras
Este documento presenta los procedimientos para realizar una práctica de argentometría. Describe la preparación de soluciones estándar de nitrato de plata y su estandarización utilizando cloruro de sodio. Explica los métodos de Volhard, Mohr y Fajans para la valoración de cloruros y presenta los cálculos necesarios para determinar la normalidad de las soluciones. El objetivo es que los estudiantes comprendan los fundamentos y aplicaciones del análisis por precipitación.
En términos generales biotecnología se puede definir como el uso de organismos vivos o de compuestos obtenidos de organismos vivos para obtener productos de valor para el hombre.
Este documento describe el procedimiento para estandarizar soluciones ácido-base mediante titulación. Se realizan dos titulaciones, una para estandarizar un ácido fuerte usando una base débil como patrón y otra para estandarizar una base fuerte usando el ácido estandarizado anteriormente. El objetivo es determinar las concentraciones reales de las soluciones mediante cálculos que involucran las reacciones químicas, los volúmenes consumidos y los equivalentes.
separacion de fosfolipidos por cromatografia de capa finaIPN
Este documento describe dos técnicas para analizar lípidos en la yema de huevo. La primera es la cromatografía en capa fina para separar fosfolípidos, mostrando sus ventajas sobre la cromatografía en papel. La segunda es el método de Lieberman-Burchard para determinar la concentración de colesterol, basado en la reacción del colesterol con anhídrido acético y ácido sulfúrico para formar un complejo de color verde cuantificable. Se aplicaron ambos métodos para
Este documento presenta los resultados de pruebas bioquímicas realizadas para evaluar el metabolismo de aminoácidos en diferentes microorganismos. Se explican las pruebas SIM, caldo triptona y LIA y sus resultados para Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Bacillus subtilis y otras bacterias. Las pruebas miden la producción de ácido sulfhídrico, indol, amoniaco y la descarboxilación de lisina. Aunque hubo algunas discrepancias, la mayoría de los resultados coincidieron con la teoría.
El documento describe un estudio en el que se construyeron curvas de calibración relacionando la concentración de permanganato de potasio con la absorbancia medida por espectrofotometría. Cuatro analistas realizaron las mediciones obteniendo coeficientes de correlación entre 0.976-0.9878, indicando alta linealidad del método. El estudio concluyó que el método empleado mostró linealidad y exactitud al haber coeficientes de correlación cercanos a cero.
El documento describe un experimento para determinar el punto de equivalencia en la titulación potenciométrica de una solución de ácido acético débil con hidróxido de sodio fuerte. Se utilizaron varios métodos como la primera y segunda derivada y el método de Gran para determinar el punto de equivalencia. También se observó el efecto de los indicadores rojo de metilo y fenolftaleína en el punto de viraje.
Este documento describe una serie de experimentos sobre las propiedades de las proteínas. En el primer experimento, se determinó que las proteínas en suero sanguíneo actúan como un buen amortiguador de pH. En el segundo, se encontró que el punto isoeléctrico de la caseína es de aproximadamente pH 4.7. Finalmente, se evaluó cómo diferentes iones pueden hacer precipitar a las proteínas dependiendo del pH de la solución.
Este documento describe un experimento para determinar la concentración de cafeína en una bebida energizante utilizando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Se realizó una curva de calibración inyectando muestras de cafeína de concentraciones conocidas en el HPLC. Luego se inyectó la muestra de bebida energizante y se cuantificó la cafeína presente basándose en el área del pico cromatográfico y la curva de calibración. El resultado indicó que la concentración de
Reporte de práctica 5. Curva de crecimiento.Alan Hernandez
Durante la práctica, el equipo analizó muestras de carne de pollo y puerco de burritos de la cafetería de la escuela para identificar bacterias. Descubrieron la presencia de Proteus, una bacteria patógena, en la carne de puerco. También observaron el crecimiento bacteriano en placas de cultivo a las 24 y 72 horas. Esto les permitió evaluar los estándares de salubridad de los alimentos servidos y aprender sobre el desarrollo de bacterias.
Determinacion cuantitativa de la actividad enzimatica del preparadoyuricomartinez
Este documento describe un laboratorio sobre la determinación cuantitativa de la actividad enzimática de un preparado enzimático puro. El objetivo es desarrollar una curva de calibración patrón y determinar la actividad enzimática en unidades. Explica conceptos clave como la cinética de reacciones químicas, el efecto de la temperatura en la velocidad de reacción, catalizadores como las enzimas, y la cinética de reacciones enzimáticas siguiendo el modelo de Michaelis-Menten.
El documento presenta los resultados de un experimento de cinética química realizado por estudiantes de química para determinar el orden parcial y la constante de velocidad de la reacción entre yoduro de potasio y persulfato de potasio mediante espectrofotometría. Los estudiantes midieron la absorbancia de la solución en intervalos de tiempo y determinaron que la reacción es de orden cero, con una constante de velocidad de 5.33x10-3.
Este documento describe una práctica de laboratorio sobre la determinación del pH y la preparación de soluciones amortiguadoras. En la práctica, se midió el pH de dos bebidas, café y jugo, usando un pH metro. Luego, se preparó una solución amortiguadora de acetato de sodio a pH 5 agregando gotas de ácido acético hasta estabilizar el pH. El documento concluye que medir el pH es importante en diversas áreas y que las soluciones amortiguadoras son útiles para estabilizar el pH y tratar mal
El análisis gravimétrico es una técnica analítica que mide la masa para determinar la cantidad de un componente químico. Implica formar, separar y pesar un precipitado (pp) a partir de una reacción química. El pp debe ser lo suficientemente insoluble para minimizar pérdidas y debe formar cristales grandes que se puedan filtrar fácilmente. El proceso de precipitación, lavado, filtración e incineración permite separar el componente químico de interés y medir su masa con
2. unidad ii. sintesis y reacciones de alcoholes y fenolesjuan_pena
Este documento describe las propiedades de los alcoholes. Explica que los alcoholes son compuestos orgánicos que contienen el grupo funcional hidroxilo (-OH). También describe algunas de sus propiedades físicas como su punto de ebullición y solubilidad en agua, así como sus propiedades químicas como su acidez y métodos de preparación como la sustitución nucleófila y la reducción de compuestos carbonílicos.
Este documento describe varias pruebas bioquímicas utilizadas para identificar bacterias, incluyendo pruebas para determinar la capacidad de las bacterias para utilizar diferentes azúcares, producir enzimas como la catalasa y coagulasa, y hidrolizar compuestos como la esculina, ADN, arginina y hipurato. Explica los fundamentos, técnicas e interpretación de los resultados de cada prueba.
Reporte de práctica 3. Pruebas bioquímicasAlan Hernandez
El documento describe un experimento de identificación de bacterias mediante pruebas bioquímicas. Se prepararon medios de cultivo como McConkey, Nutritivo y VBB en placas de Petri e inocularon con muestras. Tras incubar, se aplicó tinción de Gram a las colonias y se identificaron colonias Gram negativas. Posteriormente, se realizaron pruebas bioquímicas en tubos de ensayo inoculados con las colonias Gram negativas. Los resultados de las pruebas bioquímicas permitieron identificar las bacterias presentes
El documento trata sobre diversos temas relacionados con las proteínas. Describe las enfermedades moleculares causadas por anormalidades en proteínas. Explica los métodos para purificar proteínas, incluyendo precipitación selectiva, cromatografía y electroforesis. También cubre la degradación y envejecimiento de proteínas mediado por enzimas como las calpaínas y la ubiquitina.
El documento proporciona información sobre enzimas, vitaminas y coenzimas. Explica que las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas específicas en el cuerpo, y pueden clasificarse como simples o complejas dependiendo de si requieren cofactores. También describe las vitaminas y coenzimas, que participan en procesos metabólicos importantes. El objetivo es explicar el papel fundamental de estas sustancias en el metabolismo y la comprensión de los procesos biológicos.
Este documento describe los objetivos y metodología de una práctica de laboratorio sobre la extracción y determinación de la actividad biológica de lectinas vegetales. Los estudiantes extraerán lectinas de semillas vegetales, determinarán su actividad hemoaglutinante, cuantificarán la cantidad de lectinas mediante el método de Bradford y confirmarán sus pesos moleculares a través de electroforesis SDS-PAGE.
La enzima succinato deshidrogenasa cataliza una reacción en el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria mitocondrial. La catalasa descompone el peróxido de hidrógeno generado en el metabolismo celular en agua y oxígeno. Diferentes factores como el pH y la temperatura afectan la actividad enzimática al desnaturalizar las proteínas.
- Los métodos de purificación enzimática consisten en una serie de pasos que aprovechan las diferentes propiedades físicas y químicas de las proteínas para separarlas gradualmente de otras sustancias. Métodos como la precipitación, cromatografía, electroforesis y ultrafiltración separan las proteínas basados en su solubilidad, carga, tamaño y otras propiedades.
- La purificación enzimática es importante para obtener enzimas puras sin contaminantes, lo que es necesario en la industria, especialmente en la biotec
El documento describe un protocolo para la extracción y purificación de ADN de tejidos vegetales. Explica que el método implica la lisis celular mediante agentes mecánicos y químicos como el CTAB al 2%, el cual rompe la membrana celular y nuclear. Luego, el ADN se purifica usando cloroformo y se precipita con isopropanol frío para su purificación. El protocolo completo implica etapas como la maceración del tejido, extracción con CTAB, adición de cloroformo y centrifugación, transferencia
Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas en las células, acelerándolas hasta millones de veces sin ser consumidas. Casi todos los procesos celulares requieren enzimas. Las enzimas se clasifican por la reacción que catalizan, como oxidorreductasas, transferasas e hidrolasas.
Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas en las células, acelerándolas hasta millones de veces sin ser consumidas. Casi todos los procesos celulares requieren enzimas. Las enzimas se clasifican por la reacción que catalizan, como oxidorreductasas, transferasas e hidrolasas.
El documento describe los métodos para analizar y secuenciar proteínas y ADN. Explica técnicas como cromatografía, electroforesis, espectrometría de masas y cómo se han utilizado para aislar, purificar, identificar y determinar las secuencias de aminoácidos y nucleótidos de biomoléculas. También discute el potencial de la proteómica para comprender mejor las funciones de las proteínas.
Este documento presenta una guía sobre las prácticas de laboratorio para analizar cómo factores como la temperatura, el pH y los activadores/inhibidores afectan la actividad enzimática de la amilasa salival. Explica que las enzimas son proteínas que actúan como catalizadores biológicos, siendo específicas y funcionando mejor bajo condiciones definidas. La actividad enzimática depende del pH óptimo y la temperatura, y puede ser regulada positiva o negativamente por sustancias que se unen a los sitios a
Este documento trata sobre enzimas. Explica que las enzimas son moléculas proteicas que catalizan reacciones químicas y se componen de cadenas de aminoácidos plegadas en una estructura tridimensional. También describe la historia, características, clasificación, cinética, factores que afectan la actividad, regulación, inhibición y aplicaciones de las enzimas.
Este documento describe las enzimas, incluyendo su estructura, clasificación, características y mecanismos de acción. Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas y se componen de cadenas de aminoácidos plegadas en una estructura tridimensional. Se clasifican de acuerdo al tipo de reacción que catalizan y están sujetas a regulación por factores como la temperatura, el pH y la concentración iónica. Su actividad puede verse afectada por inhibidores o modificada a través de
Este documento proporciona una introducción general sobre las enzimas. En 3 oraciones: Las enzimas son proteínas producidas por organismos vivos que aceleran reacciones químicas específicas. Algunas enzimas requieren cofactores como iones o vitaminas para funcionar correctamente. Las propiedades de las enzimas, como su actividad y estabilidad, dependen de factores como la temperatura, pH y radiación.
Este documento trata sobre el metabolismo celular y del ser vivo. Explica que las células y los organismos son sistemas abiertos que intercambian materia y energía con su entorno, manteniéndose en equilibrio dinámico. También habla sobre las enzimas, cómo catalizan reacciones bioquímicas de forma específica y cómo factores como la temperatura, el pH, los cofactores y la concentración de sustrato afectan su actividad. Por último, explica conceptos como la energía celular, las vitaminas y consideraciones
Las enzimas son proteínas producidas por organismos vivos que actúan como catalizadores de reacciones químicas en los seres vivos. Cada enzima cataliza un tipo específico de reacción y está diseñada para un sustrato en particular. La actividad de las enzimas puede verse afectada por factores como el pH, la temperatura y la concentración de solventes.
Este documento describe los métodos para la extracción y purificación de proteínas, incluyendo la ruptura celular, separación de organelos mediante centrifugación diferencial, y purificación de proteínas usando técnicas como cromatografía de exclusión molecular, electroforesis en gel, y cromatografía de intercambio iónico. El objetivo final es obtener fracciones proteicas puras mediante la separación basada en características como tamaño, solubilidad, carga y afinidad.
Este documento describe los métodos enzimáticos utilizados por un grupo de estudiantes. Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas y su actividad depende de factores como la temperatura, el pH y la concentración de sustrato. Los métodos enzimáticos miden la velocidad de reacciones catalizadas por enzimas para determinar la cantidad de enzimas presentes o analizar otras biomoléculas. Estos métodos son específicos y sensibles y se usan para medir metabolitos y marcadores clínic
Este documento presenta un temario sobre enzimas y cinética enzimática. Se define una enzima y sus propiedades, y se explican términos relacionados como cofactor, coenzima y grupo prostético. Se describen el mecanismo de acción enzimática, los factores que afectan las reacciones enzimáticas y los métodos para medir la actividad enzimática. El objetivo es que los estudiantes comprendan qué son las enzimas, su función en los procesos biológicos y cómo catalizan las reacciones bioquímic
El documento describe los objetivos y métodos para aislar y purificar una proteína. Primero se realiza la extracción y aislamiento de la proteína mediante ruptura celular y fraccionamiento. Luego, la purificación incluye precipitación por salado para eliminar proteínas no deseadas, cromatografía en columna y filtración en gel para separar la proteína objetivo basándose en sus propiedades como tamaño y carga iónica. Finalmente, se utilizan métodos adicionales como cromatografía de intercambio ión
Ofrecemos herramientas y metodologías para que las personas con ideas de negocio desarrollen un prototipo que pueda ser probado en un entorno real.
Cada miembro puede crear su perfil de acuerdo a sus intereses, habilidades y así montar sus proyectos de ideas de negocio, para recibir mentorías .
La Unidad Eudista de Espiritualidad se complace en poner a su disposición el siguiente Triduo Eudista, que tiene como propósito ofrecer tres breves meditaciones sobre Jesucristo Sumo y Eterno Sacerdote, el Sagrado Corazón de Jesús y el Inmaculado Corazón de María. En cada día encuentran una oración inicial, una meditación y una oración final.
Triduo Eudista: Jesucristo, Sumo y Eterno Sacerdote; El Corazón de Jesús y el...
Actividad de enzimas
1. PURIFICACIÓN Y SEPARACIÓN DE ENZIMAS
INTRODUCCIÓN
Las enzimas se encuentran formando parte de mezclas complejas, usualmente en el interior de
células que además poseen otras enzimas. Pueden formar parte de agregados moleculares,
complejos con otras enzimas, proteínas inertes, ácidos nucleicos, polisacáridos o lípidos. Para
estudiar una enzima en particular, es necesario realizar un proceso de purificación.
Al purificar una enzima o una proteína se debe tener claramente definida la actividad biológica que
la caracteriza y sus condiciones óptimas de ensayo, tales como pH y temperatura.
Entre las generalidades sobre purificación de proteínas se tiene:
El método de purificación debe diseñarse desde un principio teniendo en cuenta la
cantidad de proteína que se requiere.
Hay etapas de purificación que se pueden aumentar de escala fácilmente y otras en que no
es posible hacerlo.
El grado de pureza necesario dependerá del uso que se va a dar a la proteína. Para usos en
investigación, la escala es reducida y es más importante la pureza que el rendimiento. Para
usos terapéuticos la escala es mayor y la pureza requerida es máxima. Para usos
industriales, frecuentemente se requiere gran cantidad, bajo costo y pureza menor.
Si el interés está en la proteína y no importa el organismo de origen, conviene buscar una
fuente fácil de obtener, barata, que contenga esa proteína en abundancia. Si existe la
posibilidad de partir de organismos enteros o de células en cultivo, esto último es en
general preferible. Lo óptimo es producir la proteína por métodos de DNA recombinante.
Dependiendo de la finalidad, la proteína debe ser obtenida en estado nativo o puede estar
desnaturalizada. Para actividad biológica, debe estar nativa; para determinar estructura
primaria, puede estar desnaturalizada.
El estudio completo de una enzima involucra la investigación de sus propiedades características,
como:
Propiedades fisicoquímicas: coeficientes de sedimentación y difusión; peso molecular;
forma; punto isoeléctrico; estabilidad frente al calor, pH y oxidación; reversibilidad de la
reacción y constante de equilibrio; calor, energía libre y entropía de la combinación
enzima-sustrato y de su conversión en productos; medida de las constantes de velocidad de
la reacción, efecto de activadores e inhibidores.
Estructura: composición en aminoácidos, secuencia, presencia de grupos prostéticos,
grupos sulfhidrilos, etc.
2. Propiedades enzimáticas: naturaleza de la reacción, coenzimas, especificidad.
Propiedades biológicas: significado en el metabolismo, acoplamiento con otras enzimas,
localización, genética, efectos de su deficiencia, inmunología.
Entre los aspectos técnicos del trabajo con enzimas depende del cuidado con que se eviten las
condiciones en las cuales son inestables.
Deben evitarse altas temperaturas y acidez o alcalinidad extremas. Durante el aislamiento y
la purificación conviene, trabajar entre 0 y 4 o
C y evitar pH mayor que 9 o menor que 5.
Debe evitarse la formación de espuma, ya que la misma es indicador de desnaturalización
proteica.
Los solventes orgánicos inactivan muchas enzimas a temperatura ambiente; de modo que
los fraccionamientos con los mismos deben llevarse a cabo a baja temperatura y ésta no
debe elevarse hasta que el solvente se haya eliminado o diluido a concentraciones inocuas.
Debe tomarse precauciones en lo que se refiere a las condiciones de la reacción:
Elegir pH y temperatura en las zonas de mayor estabilidad de la enzima.
Llevar a cabo la reacción a temperatura constante.
Elegir un buffer adecuado para evitar cambios de pH.
Evitar la introducción de trazas de otras enzimas (por ejemplo saliva).
Elegir una cantidad de enzima adecuada para obtener variaciones apropiadas de la
magnitud a medir.
Para distinguir la individualidad de la enzima y su grado de purificación se recurre a los siguientes
parámetros:
Cuantificación de la proteína en mg/ml. Consiste en emplear un método colorimétrico por
el que se determina la cantidad de proteína, de tal manera que se conozca el total de mg e
proteína en la preparación y en cada una de las etapas de purificación.
Definición de la Unidad Enzimática, como la cantidad de enzima que catalizará la
transformación de una cantidad de sustrato específico en producto bajo ciertas condiciones
definidas de temperatura y pH. Por lo tanto 1 U = 1 micromol de substrato consumido/ mg
de proteína de la preparación enzimática.
Definición de la Actividad Específica, como los micromoles de sustrato consumido en un
minuto por un miligramo de enzima (1 micromol de substrato consumido por min.) X ml o
bien se puede expresar como la Unidad de enzima X mg de proteína (1 Unidad = 1
micromol substrato consumido/min).
Actividad Total de la enzima expresada como los micromoles de sustrato consumido/min
en los mg totales de proteína.
El Rendimiento se conoce como la relación entre la actividad enzimática obtenida por cada
uno de los pasos de purificación y la actividad total obtenida en la primera etapa. Se
3. obtiene al comparar porcentualmente las Actividades Totales del inicio hasta el final de la
purificación.
El número de veces que la enzima se ha purificado es la relación entre la actividad
específica de la primera etapa de purificación con cada uno de los pasos sucesivos.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Conocer los métodos de purificación de enzimas.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Conocer las reglas básicas de un proceso de purificación de enzimas
Describir lo métodos de homogenización y separación de éstas.
Describir la obtención y purificación de la enzima monóxido de carbono deshidrogenasa a
partir de la cepa bacterianaOligotrophacarboxidovorans (cepa OM 5)
DESARROLLO
Las enzimas pueden localizarse dentro de los siguientes grupos:
I. Enzimas en solución verdadera en el citoplasma. Permanecen en el sobrenadante luego
de la eliminación de los componentes particulados. La ruptura de las células en un buffer
adecuado libera tales enzimas al medio.
II. Enzimas asociadas a estructuras celulares (membranas, mitocondrias, etc.). Pueden
encontrarse:
En “solución” dentro de una membrana y pueden ser extraídas después de la
destrucción de la misma
Asociadas a material lipoproteico insoluble. Para pasarlas a solución debe disociarse
el complejo.
HOMOGENIZACIÓN
Proceso donde las células y los tejidos son lisados o rotos en fragmentos lo suficientemente
pequeños para dar lugar a una suspensión uniforme y estable llamada homogeneizado o extracto
crudo.
Formas físicas
4. Homogenización mecánica: Puede utilizarse un homogeneizador de vidrio, mortero, a
veces con ayuda de abrasivos como alúmina, arena o bolitas de vidrio. Para ello, las células
son suspendidas en un solvente isotónico (sacarosa 0,25 M, NaCl 0,9%, KCl 0,15 M) o
ligeramente hipertónico junto con un buffer para mantener controlado el pH.
Homogeneización sónica: El choque de ondas sónicas o ultrasónicas provoca cambios de
presión de miles de atmósferas, que rompen la pared celular. Se usa generalmente para
bacterias y levaduras y a veces, para determinados tejidos animales (bazo, riñón o
eritrocitos). La sonicación puede alterar la estabilidad enzimática cuando las células se
rompen por este método, dicho cambio varía dependiendo de factores asociados como el
pH, temperatura, tipo de Buffer, tiempo, entre otros.
Desintegracióntérmica: El congelamiento y descongelamiento rápidos y repetidos suelen
usarse para desintegrar bacterias y eritrocitos. Por congelación se forman cristales de hielo
intracelulares, destruyendo la estructura. Al descongelarse, las células se destruyen
osmóticamente debido a la presencia de agua pura y se libera su contenido.
Formas químicas
Se utilizan agentes que atacan la pared celular como el etanol, éter de petróleo, isopentanol, entre
otros.
Homogeneización por deshidratación: se basa en la precipitación de proteínas por
solventes orgánicos.
Formas enzimáticas
Se utilizan enzimas capaces de hidrolizar las paredes bacterianas permitiendo la salida del
contenido intracelular; la enzima más utilizada es la lisozima , que cataliza de forma específica la
hidrólisis de enlaces β (1-4) del ácido N-acetilmuránico presentes en los mucopéptidos de las
paredes celulares bacterianas; de estas, las Gram-positivas son las que presentan mayor
sensibilidad a la lisozima, mientras que las Gram-negativas se consigue con la adición de EDTA
(ácido etilendiaminotetraacético) como agente quelante, lo que facilita su ruptura.
La elección del método de ruptura depende de:
Naturaleza de la fuente de la enzima
Velocidad del método de extracción
Estabilidad del enzima
Pureza requerida
Costo del proceso
5. Por otro lado, es importante elegir la solución de homogeneización, puesto que será el medio al
que estará expuesta la proteína y en el que se pueden adicionar componentes para ajustar el pH, la
fuerza iónica, inhibidores de proteasas o algún estabilizador de la proteína.
MÉTODOS DE SEPARACIÓN
Para eliminar los contaminantes o clarificar la muestra se puede recurrir al proceso de
centrifugación.
Centrifugación
La centrifugación utiliza la fuerza de gravedad para separar los diferentes componentes del
homogeneizado (restos de tejido u organelos), basándose en su tamaño, forma y densidad. Después
de la centrifugación, algunas de las partículas más pesadas, que normalmente permanecían en
suspensión, sedimentan.
Cromatografía de intercambio iónico
Permite la separación de proteínas en función de su carga. Las resinas de intercambio iónico se
separan a partir de materiales insolubles que contienen grupos cargados negativamente o
positivamente que se empaquetan en columnas de cristal. Las resinas cargadas negativamente fijan
fuertemente cationes y se denominan resinas de intercambio catiónico; por el contrario, las resinas
policatiónicas unen aniones y se denominan resinas de intercambio aniónico. La elución de una
proteína dependerá de la magnitud de su carga al pH del disolvente empleado. Para facilitar la
elución cuando las interacciones entre la fase estacionaria y la muestra son muy fuertes se emplean
fases móviles de diferente pH o fuerza iónica que debiliten dichas interacciones.
Cromatografía de afinidad
La cromatografía de afinidad separa las proteínas en función de su afinidad de unión a ligandos
específicos. Así, las proteínas tienen una gran afinidad por sus sustratos, grupos prostéticos,
receptores de membrana o anticuerpos desarrollados frente a ellas. Uno de estos compuestos puede
unirse covalentemente a una resina insoluble para constituir la fase estacionaria de una
cromatografía en columna. Cuando se aplica en la columna una mezcla de proteínas, sólo aquella o
aquellas susceptibles de unirse a los grupos específicos de la resina quedarán ancladas en la fase
estacionaria, mientras que las demás proteínas de la mezcla se lavan a través de la columna.
Posteriormente se aplica un tampón adecuado que, generalmente, incluye el ligando libre y que
hace factible la elución de la proteína anclada
Cromatografía de exclusión molecular o gel-filtración
6. Permite separar las proteínas en función de su tamaño. Esta técnica se realiza en una columna que
está rellena con un gel poroso insoluble en forma de esferas, cuyos tamaños de poro son conocidos.
Las moléculas proteicas de menor tamaño penetran por los poros, por lo que el recorrido que han
de realizar a través de la disolución es mayor que el de las moléculas de gran tamaño, que no
penetran por los poros por impedimento estérico; esto hace que las moléculas de gran tamaño
eluyan antes que las de pequeño tamaño. Por lo tanto, una mezcla de proteínas se separará en
función del tamaño, primero eluirán las de mayor tamaño y en último lugar las de menor tamaño,
las proteínas de tamaños intermedios eluirán entre ambos extremos en función de su masa. Para
poder saber la masa molecular de una proteína, previamente se debe hacer un calibrado de la
columna con proteínas cuya masa molecular sea conocida, y cuyo volumen de elución se
determina experimentalmente.
Electroforesis
7. Es un método que permite separar las proteínas en función de su carga neta al someterla a un
campo eléctrico. No se utiliza como método de purificación de proteínas, ya que hay que teñirlas
para visualizarlas, y en este proceso generalmente se inactivan.
Para realizar este método se emplea: un soporte (papel, acetato de celulosa o geles de
poliacrilamida), el cual está inmerso en una solución tampón que controla el pH del medio, ambos
contenidos en una cubeta que tiene dos electrodos. Sobre el soporte se colocan las muestras de
proteínas que se desea separar, y se aplica la corriente eléctrica. Posteriormente las proteínas se
visualizan mediante tinción con un colorante. Las manchas se identifican comparándolas con una
serie de patrones que han corrido al mismo tiempo en el mismo soporte.
En condiciones normales, la migración diferencial de las proteínas dependerá tanto de la carga
como del tamaño y estructura de la proteína, pero cuando se trata de un gel en el que se ha incluido
un agente desnaturalizante como el dodecil-sulfato de sodio (SDS), se pierde la estructura terciaria
y cuaternaria de las proteínas y se uniforman sus cargas, por lo que la migración sólo depende de
su peso molecular.
En un gel de poliacrilamida-SDS, las proteínas pequeñas viajan más rápido que las de mayor
tamaño, porque el tamaño del poro del gel entorpece el paso de las proteínas de mayor peso
molecular.
OBTENCIÓN Y PURIFICACIÓN DE LA ENZIMA MONÓXIDO DE CARBONO
DESHIDROGENASA A PARTIR DE LA CEPA BACTERIANAOligotrophacarboxidovorans
(cepa OM 5)
El monóxido de carbono (CO) es un gas contaminante, venenoso, producido durante la
combustión incompleta de materiales petróleo, gasolina, carbón y materiales vegetales. El
monóxido de carbono inhibe la capacidad de la sangre para transportar oxígeno, siendo
responsable de síntomas respiratorios.
8. A nivel mundial hay una conciencia cada vez mayor entre lasautoridades competentes de la
necesidad de controlar los niveles de monóxido de carbono presentes enla atmósfera. Es por esto,
que hay un gran interés porel desarrollo de biosensores, es decir, sensores basados en principios de
reconocimiento molecular inherentes a muchas reacciones bioquímicas en la que participan
enzimas y anticuerpos capaces de detectar concentraciones pequeñas del gas.
Un sensor electroquímico enzimático es un electrodo metálico cuya superficie contiene una enzima
redox inmovilizada. Las enzimas pueden aislarse de sus fuentes (microorganismos,
tejidosvegetales o animales) y purificarse.
La bacteria gram (-) Oligotrophacarboxidovorans (cepa OM 5), pertenece al grupo de
bacteriascarboxidótrofas, que pueden usar el monóxido de carbono como única fuente de energía
mediante la inducción del plásmido responsable de la expresión de la enzima monóxido de carbono
deshidrogenasa (CODH), ligada a membrana, y que posee la capacidad de oxidar el CO en
solución acuosa.
Cultivo
Para el crecimiento autotrófico de O. carboxidovorans se utilizó el medio mineral ATCC 1789(pH
final fue de 6,8), en el que la única fuente de carbono disponible provenía del monóxido de
carbono.
Al recipiente con el medio de cultivo (medio mineral ATCC 1789) previamente inoculado con la
cepa, se colocó en un desecador saturado con monóxido de carbono, con agitación constante a 30
ºC durante 96 horas, tiempo necesario para que las células alcanzaran la fase de crecimiento
exponencial.
Obtención y purificación de los extractos enzimáticos
La preparación de los extractos enzimáticos se realizó a partir del cultivo bacteriano al cual se le
agregó lisozima. Las bacterias con lisozima se colocaron en un baño María durante12 horas a 40
ºC. Posteriormente, la suspensión celular tratada conlisozima se sometió a sonicación por 10
minutos. La muestra se puso en hielo mientras se sometía a sonicación, con el objetivo de evitar su
calentamiento.
Purificación
Solubilización con el detergente (Triton X-100):Para separar la enzima de los restos de la
membrana, al extracto celular después de la sonicación, se añadió Tritón X-100, se homogenizó la
solución y el detergente se dejó actuar por una hora.
9. Posteriormente se realizó una centrifugación a 10.000 rpm durante 45 minutos a 4 °C y se tomó el
sobrenadante.La muestra solubilizada se pasó por una columna de exclusión molecular (filtración
por gel). Se tomaron las muestras que fueron luegoeluídascon buffer fosfato de sodio 0.2M, pH 7.
Posteriormente, se recolectaron las fracciones entubos de 1.5 mL y se les realizaron las pruebas de
actividad enzimáticay concentración proteica.La actividad enzimática se determinó
electrofotométricamente mediante la reducción del azul de metileno en presencia de monóxido de
carbono a 30ºC y 664 nm.
Posteriormente el resultado del proceso de purificación de los extractos crudos se verificó mediante
electroforesis en gel de poliacrilamida, en condiciones no desnaturalizantes.
CONCLUSIONES
Para el estudio de una enzima se deben conocer su estructura, propiedades fisicoquímicas,
enzimáticas y biológicas. Dentro de un proceso de purificación de enzimas es importante el
cuidado en los aspectos técnicos de trabajo para evitar condiciones que sean inestables en dicho
proceso o que interfieran en las condiciones de reacción.
Los métodos de homogenización se realizan mediante formas físicas, químicas y enzimáticas que
dará lugar a una suspensión uniforme y estable llamada homogeneizado o extracto crudo. Los
métodos de separación pueden realizarse mediante centrifugación, métodos cramatográficos y
métodos electrofóreticos.
La obtención y purificación de la enzima monóxido de carbono deshidrogenasa a partir de cultivos
de la cepa bacteriana Oligotrophacarboxidovorans, cultivada en un medio mineral saturado de
monóxido de carbono. Los extractos crudos se obtuvieron por sonicación y se purificaron por
centrifugación y cromatografía de exclusión molecular (filtración por gel); estos esultados del
proceso de purificaciónfueronverificados mediante electroforesis en gel de poliacrilamidaen
condiciones no desnaturalizantes.
BIBLIOGRAFÍA
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/211619/Contenido_en_linea_eXe/leccin_20_extraccin_puri
ficacin_y_caracterizacin_de_proteinas.html
Sobeida Sánchez.Material de apoyo para los estudiantes del curso
Bioquímica experimental. 2013.
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MATERIALAPOYOANTECEDENTES_22427.pdf
10. Unidad de enzima (U): cantidad de enzima que cataliza la conversión de 1 mol de sustrato en
producto(s) en 1 minuto de reacción, bajo condiciones previamente determinadas.
Actividad enzimática o concentración de enzima: unidades de enzima por ml de solución. (U/ml)
Actividad específica (U/mg): actividad enzimática (U/ml)/concentración de proteínas (mg/ml) de
la solución. Es el número de unidades de enzima por mg de proteína
Actividad total: Actividad enzimática x volumen total.
ANÁLISIS DE LOS DATOS
Para juzgar si un método de purificación es adecuado, deben calcularse:
recuperación
Grado de purificación alcanzados.
Las unidades enzimáticas totales de la etapa inicial (100%) puede calcularse el
rendimiento de cada etapa refiriendo las unidades totales de cada paso a las iniciales.
Grado de purificación, debe obtenerse primero el valor de Ae alcanzado en cada paso.
Si se considera la Ae inicial como unidad de purificación, el grado de purificación de cada
etapa se calcula haciendo el cociente entre la Ae de dicha etapa y la del primer paso.
AE
Unidades totales en la fracción i
Total de proteínas en la fracción i
Rendimiento
Unidades totales en la fracción i
Unidades totales en la fracción original
11. Porcentaje de purificación
AE en la fracción i
AE en la fracción original
se obtuvieron extractos crudos y purificados de la enzima monóxido de carbono deshidrogenasa capaces de oxidar
monóxido de carbono a CO2, a partir de cultivos de la bacteria carboxidotrofaOligotrophacarboxidovorans (cepa
OM5)cultivadas aeróbicamente en un medio mineral saturado con CO. Los extractos crudos se obtuvieron mediante la
ruptura delas células por sonicación y se purificaron por cromatografía de exclusión molecular y cromatografía de
intercambio iónico. La actividad enzimática de los extractos se midió utilizando azul de metileno como aceptor
electrónico artificial en la oxidación del CO a CO2. Se obtuvieron extractos crudos y purificados con actividad
enzimática detectable por medio de espectrofotometría. El grado máximo de purificación obtenido fue de 200veces y se
lograron actividades enzimáticas específicas en el rango de 0.01 a 2.0 mU/mg de proteína. Ensayos electroquímicos
usando un microelectrododeplatino y azul de metileno como mediador electrónico, mostraron un aumento de la
corrienteanódica cuando se adicionó el sustrato monóxido de carbono a la celda que contenía el extracto enzimático.
Estos resultados permiten alentar la construcción de un biosensor electroquímico para la detección de monóxido de
carbono, utilizando extractos enzimáticos obtenidos a partir de bacterias carboxidotrofas.