metodos enzimaticos bioquimica

1. Métodos enzimáticos
GRUPO N° 03
CARLA HUANCI CHANCAFE
CESAR TORRES PANDURO
CECILIA SIALER CARHUATTOCTO
MIGUEL ROJAS ÑIQUE.
CANDIDA MAMANI OCHOCHOQUE.
FIDEL MAMANI QUIÑONEZ
ALBERTO MORA GUTIERREZ

2. Enzimas
Son proteínas especiales capaces de
catalizar reacciones químicas.
La cinética enzimática se basa en
encontrar una relación entre la velocidad
de una reacción catalizada por una enzima
y la concentración del sustrato
participante.

3. Factores que influyen en la reacción
enzima-sustrato
Fuerza osmótica: La mayoría de las enzimas no pueden
tolerar concentraciones de sal extremadamente altas.
Temperatura: Todas las enzimas trabajan en un rango
de temperaturas específicas del organismo al que
pertenecen.
pH. La mayoría de las enzimas son sensibles al pH y tiene
un rango específico en el que se detecta actividad; todas
tienen un pH óptimo.
Saturación del sustrato. Aumentando la concentración de
sustrato aumenta la velocidad de la reacción o actividad
enzimática.

4. Clasificación de las enzimas

5. TECNICAS ENZIMATICAS
La propiedad más característica de una enzima es su poder
para catalizar una reacción química definida
La presencia de una enzima se detecta por las reacciones que
ellas catalizan
La cantidad de una enzima se estima a partir de la velocidad
de reacción.

6. Principio del método
La utilización de la medida de la actividad
enzimática para estudiar las propias
enzimas abre la posibilidad de desarrollar
métodos que utilizan las enzimas como
reactivos y que permiten utilizar
determinadas enzimas para el estudio
indirecto de otras biomoléculas

7. METODOS DE MEDICIÓN
PUNTO FINAL (tiempo determinado)
Se ponen en contacto los reactivos (que
aportan el sustrato) y la muestra
biológica (que aporta las enzimas) y tras un
periodo de incubación que supere el periodo
de retardo se mide la absorbancia.
CINETICO (análisis continuo)
Consisten en medir la absorbancia varias veces
con intervalo de minutos. Permite comprobar
que realmente estas en la zona lineal de la
curva. Zona ideal para la determinación.

8. Las enzimas son específicas de reacción y sustrato, y los elementos que intervienen en
la reacción pueden determinarse, bien porque presentan una característica que puede
medirse o bien porque pueden determinarse por métodos químicos.
Así pues, la aparición del producto de la reacción catalizada por la enzima, o la
desaparición de sustrato, permiten medir la velocidad de transformación, que es
directamente proporcional a la cantidad de enzima presente en el medio.
La actividad máxima de la enzima es función de su poder catalítico y de la cantidad de
enzima presente. Por lo tanto, si se estudia la función en condiciones saturantes de
sustrato, se puede inferir la cantidad de enzima presente en la reacción.
Medida de la velocidad de reacción

9. Medida de la velocidad de reacción
Si el producto o sustrato tiene la característica mensurable
Desaparición de sustrato Aparición de producto

10. Medida de la velocidad de reacción
Si el producto o sustrato no tiene la característica mensurable se acopla una segunda reacción, con la
formación de un producto o cosustrato con característica mensurable
Reacción indicadora

11. Requerimientos y preparación de la
muestra
La condición de ayuno depende la prueba a realizar
Utilizar de preferencia suero libre de hemólisis obtenido por centrifugación. La hemólisis puede elevar
falsamente la concentración o interferir en la determinación de los analitos. En lo posible desechar el
uso de plasma debido a la interferencia de los anticoagulantes, de otra forma, utilizar solamente plasma
heparinizado.
Los analitos pueden ser estables por 7 días entre 2° y 8°C.
El proceso de congelación destruir algunas enzimas, por lo que se recomienda revisar el inserto de
cada prueba.
Los tubos destinados al estudio no deben ser lavados con detergentes que puedan alterar la estructura
de enzimas.

12. Enzimas como reactivos
Aún más, las enzimas también podían utilizarse como reactivos, ya que los reactivos químicos
únicamente reconocen un grupo funcional, mientras que las enzimas no sólo reconocen el
grupo funcional, sino un sustrato concreto; así pues, la utilización de las mismas como
alternativa a los métodos químicos aumenta la especificidad de muchas determinaciones
bioquímicas.
El diseño de los métodos enzimáticos se basa en establecer un medio de reacción que
contenga todos los componentes necesarios para que ésta tenga lugar: tampón, temperatura,
iones, cosustratos adecuados, etc. Normalmente, en estos casos, lo último que se añade es la
enzima.
◦ Sustratos
◦ Iones necesarios
◦ Coenzimas
◦ Enzimas

13. Instrumental

14. Especificidad y sensibilidad
Las enzimas son específicas de sustrato y
reacción, de forma que la utilización de
enzimas evita la falta de especificidad de las
técnicas de las técnicas químicas (basadas en
las reacciones con grupos funcionales
determinados)
Se evitan interferencias de compuestos
diferentes a los de interés y que posean el
mismo grupo funcional.
La sensibilidad de estos métodos en general
difiere entre analitos en estudio. Los kits de
reactivo indican los valores mínimos
detectables, así como datos de linealidad,
límite de detección.

15. Interferentes en la muestra
Hemólisis
Lipemia
Ayuno
Consumo de alcohol
Ejercicio intenso
Consumo de medicamentos
Embarazo
Anticoagulantes (EDTA, Citrato)

16. Analitos bioquímicos de
importancia clínica
Determinación de metabolitos
• Glucosa, colesterol, triglicéridos,
ácido úrico....
Determinación de actividades
enzimáticas
• Marcadores hepáticos:
Transaminasas, fosfatasa alcalina.
• Marcadores cardiacos: LDH, CK

18. Bibliografía
Roca, P., Oliver, J., & Rodríguez, A. M. (2004). Bioquímica:
técnicas y métodos. Editorial Hélice.
Mathews CK y Van Holde KE. Herramientas de la Bioquímica:
Cómo medir las velocidades de las reacciones catalizadas por
enzimas. Madrid. Editorial MacGraw-Hill- Interamericana.
1999.
María José Noriega Borge. Principios de Bioquímica. Capítulo
5: Enzimas. 1ª Edición. Barcelona. Editorial Masson. 2000.

19. Gracias!