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Actividad antagónica de bacterias
biocontroladoras y filtrados de
Trichoderma spp. contra Ralstonia
solanacearum en plátano
Germán Ceballos I.A. CIAT
Elizabeth Álvarez, Ph.D CIAT
Germán Llano, M.Sc. CIAT
XXIX Congreso ASCOLFI
Medellín, junio 2009
trichoderma
INTRODUCCIÓN
El Moko, enfermedad vascular causada por Ralstonia solanacearum,
afecta seriamente la producción de plátano en Colombia, generando
pérdidas del 100% en áreas afectadas.
Shen et al. (2004) demostraron que una cepa de Trichoderma koningii
tuvo actividad antagónica contra R. solanacearum debido a sus
metabolitos termostáticos de efecto antibiótico.
Asmaja (2005) reportó actividad antibacterial de filtrados libres de células
de Trichoderma viride contra R. solanacearum in vitro, encontrando
diferencias entre cepas.
Bacterias antagonistas colonizan el suelo, producen sustancias
metabólicas que tienen efecto sobre patógenos y estimulan desarrollo
radical.
OBJETIVO
 Seleccionar una cepa de Trichoderma spp. con
efecto antagónico a Ralstonia solanacearum in vitro e
invernadero.
FNFH
Mejoramiento de la sanidad y
competitividad del cultivo de plátano,
mediante el desarrollo de nuevas
estrategias de manejo del suelo y la
nutrición.
Materiales y métodos
Localización
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Patología de yuca
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Diseño experimental
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In vitro
Cepas de Trichoderma spp. cultivadas en medio PD durante 18 días
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• Agroguard® (cepa comercial de T. harzianum), LST.
• Trichoplant® (mezcla de cepas de T. harzianum, T. viride, T. koningii
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Ralstonia solanacearum (Rs cepas 7 y 78, aisladas de raquis de
plátano).
Se empleó el filtrado (al 40%) libre de estructuras por cada cepa de
Trichoderma spp. mezclado con PDA estéril.
Siembra de dilución de Rs (1x10-4
, partiendo de suspensión de 0,2 de
absorbancia).
Invernadero
Plantas de Dominico Hartón de 2 meses de edad:
Inoculación de antagonistas:
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conidias/mL
de Trichoderma harzianum (Agroguard®) y T. viride
Ecoterra® (Azotobacter chroococcum, Pseudomonas
aeureofaciens, Bacillus licheniformis, B. megaterium y B. subtilis)
(2,0x108
UFC/g) LST.
Inoculación de Rs al suelo:
Mediante herida radical y con 30 mL/planta de
una suspensión bacteriana de 0,1 de absorbancia
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UFC/mL
Variables analizadas
In vitro
• Conteo diario del numero de UFC de Rs
En plantas
• Severidad por Rs (mediante
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bacteria, comparados con el testigo que presentó 6.820 UFC/mL
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Tratamientos efectivos
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Esterilizados por
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concentraciones
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Cepas 47-PDA-3A y 19-TSM-3A
no presentan ningún efecto de
inhibición de R. solanacearum,
ya que igualaron y superaron al
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Testigo R. solanacearum 47-PDA-3A
Día 5 a 8 (p< 0,0001)
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menores niveles de severidad por Rs en plantas (0,6 y 1,9, respectivamente),
comparados con los testigos de Rs (2,1 y 2,9).
Invernadero
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se nota en la nutrición
Ecoterra® no se presentaron diferencias para P
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desarrollo radical.
Conclusiones
Se comprobó la efectividad y termoestabilidad de los filtrados de las cepas 41-
TSM-1, T. virirde, y el producto Trichoplant®, ya que inhibieron
completamente las dos cepas de R. solanacearum, conservando dichas
propiedades, aún después de ser sometidos a esterilización por autoclavado.
En plantas se encontró efectividad de T. viride y Ecoterra® para reducir el
desarrollo de la enfermedad ocasionada por R. solanacearum.
La cepa que demostró actividad antagónica a R. solanacearum tanto in vitro
como en invernadero, fue Trichoderma viride
T. harzianum (Agroguard®) y T. viride mostraron altos contenidos foliares de K
Ecoterra® favoreció la absorción de Ca y Mn. También incentivó desarrollo
radical.
Hace falta continuar investigando sobre los posibles antibióticos producidos
por Trichoderma spp.
Agradecimientos
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Antagonismo de trichoderma vs r. solanacearum

  • 1. Actividad antagónica de bacterias biocontroladoras y filtrados de Trichoderma spp. contra Ralstonia solanacearum en plátano Germán Ceballos I.A. CIAT Elizabeth Álvarez, Ph.D CIAT Germán Llano, M.Sc. CIAT XXIX Congreso ASCOLFI Medellín, junio 2009 trichoderma
  • 2. INTRODUCCIÓN El Moko, enfermedad vascular causada por Ralstonia solanacearum, afecta seriamente la producción de plátano en Colombia, generando pérdidas del 100% en áreas afectadas. Shen et al. (2004) demostraron que una cepa de Trichoderma koningii tuvo actividad antagónica contra R. solanacearum debido a sus metabolitos termostáticos de efecto antibiótico. Asmaja (2005) reportó actividad antibacterial de filtrados libres de células de Trichoderma viride contra R. solanacearum in vitro, encontrando diferencias entre cepas. Bacterias antagonistas colonizan el suelo, producen sustancias metabólicas que tienen efecto sobre patógenos y estimulan desarrollo radical.
  • 3. OBJETIVO  Seleccionar una cepa de Trichoderma spp. con efecto antagónico a Ralstonia solanacearum in vitro e invernadero. FNFH Mejoramiento de la sanidad y competitividad del cultivo de plátano, mediante el desarrollo de nuevas estrategias de manejo del suelo y la nutrición.
  • 4. Materiales y métodos Localización Laboratorio e invernadero Patología de yuca Centro Internacional de Agricultura Tropical CIAT Diseño experimental Bloques completos al azar (BCA) Análisis estadístico Statistix 8.0
  • 5. In vitro Cepas de Trichoderma spp. cultivadas en medio PD durante 18 días • 41-TSM-1, 19-TSM-3A, 47-PDA-3A y CIAT-14PDA-4 (T. viride) • Agroguard® (cepa comercial de T. harzianum), LST. • Trichoplant® (mezcla de cepas de T. harzianum, T. viride, T. koningii y T. lignorum), Sanoplant. Ralstonia solanacearum (Rs cepas 7 y 78, aisladas de raquis de plátano). Se empleó el filtrado (al 40%) libre de estructuras por cada cepa de Trichoderma spp. mezclado con PDA estéril. Siembra de dilución de Rs (1x10-4 , partiendo de suspensión de 0,2 de absorbancia).
  • 6. Invernadero Plantas de Dominico Hartón de 2 meses de edad: Inoculación de antagonistas: Con 50 mL de suspensiones 1,0x106 conidias/mL de Trichoderma harzianum (Agroguard®) y T. viride Ecoterra® (Azotobacter chroococcum, Pseudomonas aeureofaciens, Bacillus licheniformis, B. megaterium y B. subtilis) (2,0x108 UFC/g) LST. Inoculación de Rs al suelo: Mediante herida radical y con 30 mL/planta de una suspensión bacteriana de 0,1 de absorbancia (600nm), equivalente a 1x105 UFC/mL
  • 7. Variables analizadas In vitro • Conteo diario del numero de UFC de Rs En plantas • Severidad por Rs (mediante escala 0 a 6) • Contenido foliar de nutrientes • Materia seca (en proceso) Grados de severidad de Ralstonia solanacearum en plantas de plátano (Mesa y Triviño, 2007)
  • 9. Día 5 a 8 (p< 0,0001) Cepas 41-TSM-1, T. viride y Trichoplant® inhibieron completamente el crecimiento de la bacteria, comparados con el testigo que presentó 6.820 UFC/mL In vitro Tratamientos efectivos 41-TSM-1 T. viride Trichoplant ® Esterilizados por filtración o autoclavado En las mismas concentraciones Testigo R. solanacearum 41-TSM-1 T. viride Trichoplant ®
  • 10. Cepas 47-PDA-3A y 19-TSM-3A no presentan ningún efecto de inhibición de R. solanacearum, ya que igualaron y superaron al testigo (2.920 UFC/mL). Tratamientos efectivos T. viride 41-TSM-1 Agroguard ® Trichoplant ® Testigo R. solanacearum 47-PDA-3A Día 5 a 8 (p< 0,0001)
  • 11. La actividad antagónica de T. viride y Ecoterra® se corroboró al encontrar menores niveles de severidad por Rs en plantas (0,6 y 1,9, respectivamente), comparados con los testigos de Rs (2,1 y 2,9). Invernadero LSD 5% día 43: 2,09 Haz vascular necrosado
  • 12. Contenido foliar de nutrientes Agroguard® : K T. viride: K, P Ecoterra® : Ca Patogenicidad de cepa Rs 78, se nota en la nutrición
  • 13. Ecoterra® no se presentaron diferencias para P Mostró mayores contenidos de Mn y estimuló el desarrollo radical.
  • 14. Conclusiones Se comprobó la efectividad y termoestabilidad de los filtrados de las cepas 41- TSM-1, T. virirde, y el producto Trichoplant®, ya que inhibieron completamente las dos cepas de R. solanacearum, conservando dichas propiedades, aún después de ser sometidos a esterilización por autoclavado. En plantas se encontró efectividad de T. viride y Ecoterra® para reducir el desarrollo de la enfermedad ocasionada por R. solanacearum. La cepa que demostró actividad antagónica a R. solanacearum tanto in vitro como en invernadero, fue Trichoderma viride T. harzianum (Agroguard®) y T. viride mostraron altos contenidos foliares de K Ecoterra® favoreció la absorción de Ca y Mn. También incentivó desarrollo radical. Hace falta continuar investigando sobre los posibles antibióticos producidos por Trichoderma spp.
  • 15. Agradecimientos  Live Systems Technology LST  Sanoplant