Este documento describe un protocolo para la propagación in vitro de la variedad Calcutta Single de la planta Polianthes tuberosa a través de la inducción de brotes y raíces. El mejor medio para la formación de brotes fue MS con 0.2 mg/L de BAP y kinetina, mientras que para la enraización fue MS con 0.5 mg/L de IAA y BAP. Las plántulas enraizadas se aclimataron exitosamente en el invernadero y campo.

1. Construyendo la excelencia
Programa Ingeniería Agronómica
Extensión Facatativá

2. Docente:
Jennifer Gutiérrez
Estudiantes :
Karen Franco
Biología molecular
Quinto semestre
Universidad De Cundinamarca
Facatativá
2015

3. PROPAGACIÓN IN VITRO DE POLIANTHES TUBEROSA L.
CULTIVARS DE VARIEDAD (CALCUTTA SINGLE)
PUBLICADO: SEPTIEMBRE DEL
AÑO 2013
PUBLICADO POR: Jitendriya
Panigrahi, Mohammad Shahid L.
Saiyad
SE REALIZO EN: Department of
Biotechnology, Shri A. N. Patel
P.G. Institute
PAGINA: INTERNATIONAL
JOURNAL OF PLANTS, ANIMAL
AND ENVIROMENTAL SCIENS
LINK: http://pakacademicsearch.com/pdf-files/env/78/76-
79%20Volume-3,%20Issue-3,%20July-Sep-2013.pdf

4. RESUMEN
 Esta tuberosa Tiene un gran potencial económico para corte de la flor de
comercio e industria de aceite esencial, debido a su gran demanda, se ha
cultivado en la mayor parte del los países tropicales y subtropicales.
 El principal objetivo de la presente investigación fue desarrollar un
protocolo fiable de gran escala para multiplicación de la tuberosa
Polianthes variedad Calcuta Bajo condiciones in vitro mediante el uso de
diferentes combinaciones y concentraciones de hormonas de crecimiento
en Medio MS.
 Entre las diversas hormonas utilizadas para la formación de brotes
múltiples la mejor respuesta fue producido con medio MS que contenía
0,2 mg / l de BAP y kinetina con un promedio de 3,5 ± 0,2 brotes de
Calcuta individual.
 Brotes extirpados de las culturas de los brotes proliferantes fueron
arraigados en medio MS de fuerza que tiene medio 0,5 mg / l de IAA y
BAP. En brotes in vitro de plántulas enraizadas crecer exuberantemente
bajo campo condiciones y llegaron a la floración después de 1 mes del
trasplante.

5. INTRODUCCIÓN
 El nombre común de la planta utilizada, se deriva de la tuberosa latín
Los principales constituyentes de nardo
 El aceite esencial que se produce es alcohol bencílico, ácido butírico,
eugenol, farnesol, benzoato de mentilo, geraniol y nerol utilizado como
compuestos químicos (Benschop M. 1993)
 Debido a su gran demanda, se cultiva actualmente en la mayoría de las
zonas tropicales y subtropicales países del mundo Tuberosa
generalmente se siembra en febrero y marzo. (Edwards., Michael. 2006)
 La plantación de bulbos en el mes de Abril ha demostrado para registrar
el rendimiento más alto de los picos y flores en el cv. single.
 Fecha de siembra juega un papel importante en la regulación del
crecimiento y la calidad de nardo.(Jowkar, M.M. and H. Salehi. 2006)
 Nueve de las especies tienen flores blancas uno era blanco y rojo, y
dos son de color rojo. L
 El método convencional de propagación a través de las bombillas es
bastante lento para satisfacer la creciente demanda. Por lo tanto, el
objetivo principal de este estudio es desarrollar un protocolo fiable de
gran escala de clonación de Polianthes tuberosa variedad Calcuta
single.

6. MATERIALES Y METODOS
PREPARACIÓN DEL EXPLANTE Y ESTERILIZACIÓN
Las plantas se recogen por la Universidad Agrícola Navsari. Las plantas
recolectadas se lavaron a fondo en agua corriente durante 15 minutos para
eliminar las partículas del suelo. Los bulbos se cortaron de la parte de rizoma por
la ayuda de un cuchillo.

7.  Fue seguido por lavado en agua corriente
del grifo para eliminar el detergente seguido
por D / W de 2-3 veces. Ellos se
transfirieron a continuación a otro vaso que
contiene Bavistin con 2-3 gotas de 14-20
soluciones para 20 min.
 En el paso 1, los explantes preparados
se lavaron a fondo con agua del grifo
corriente durante 2-3 veces para
minimizar la pérdida de cultura debido a
la contaminación microbiana y se
empaparon con detergente durante 10
min.
LOS EXPLANTES FUERON ESTERILIZADOS EN DOS PASOS:
PASO 1

8. PASO 2
 En el paso 2, realizadas bajo la
unidad de LAF, los explantes se
lavaron a fondo con D / W estéril para
3-4 veces en una condiciones
asépticas.
 Para la esterilización de la superficie,
los explantes se lavaron en solución
de cloruro de mercurio 0,1% (HgCl2)
durante 2 min.
 Ellos fueron lavadas
adecuadamente con D / W
estéril para 3-4 veces dentro
de la mesa de trabajo limpia
para eliminar todo rastro de
HgCl2 porque tiene naturaleza
carcinógena
 Ellos fueron lavadas adecuadamente con D / W estéril para 3-
4 veces dentro de la mesa de trabajo limpia para eliminar todo
rastro de HgCl2 porque tiene naturaleza carcinógena

9.  Los explantes fueron inoculados en el medio MS suplementado con
diferente niveles de auxinas y citoquininas concentración.
 Explantes esterilizados (bombillas) fueron extirpados de los dos extremos,
con una multa 1forceps y bisturí estériles
 Todas las culturas se mantuvieron
en una sala de cultivo con aire
acondicionado a una temperatura
de 25 ± 40 C con una intensidad
de luz de 2500-3000 luz
(aproximadamente) proporciona
luz fría.
 El fotoperiodo mantener tenía 16
horas de luz y 8 horas de
oscuridad y relativa humedad del
45-50%.

10. INDUCCIÓN DE BROTES Y MULTIPLICACIÓN
 En esta primera serie de experimentos, los bulbos de rizoma de Calcutta
Single se cultivaron en el medio MS suplementado con combinación de mg
dos hormonas diferentes, a saber BAP y kinetina de la concentración (0,2 a
2,5) /l.
 Los disparos que proliferan se
subcultivaron en medio fresco como una
sola sesión o en un grupo de cinco y diez
brotes para estudiar el efecto de inóculo
inicial sobre la tasa de multiplicación de
brotes.

11. ACLIMATACIÓN DE IN-VITRO CRIADO
PLÁNTULAS
 los brotes de las plántulas fueron sacados, Las raíces de los tubos de
cultivo, su sistema radicular se lavo debajo del grifo con agua para eliminar
los rastros
 fueron trasplantados en una mezcla para
macetas que comprende la tierra del jardín
y el moho de la hoja (3: 1) en macetas de
barro de 10 cm
 se mantuvo durante 30 días en la sala de
endurecimiento donde fueron aclimatados
cultivándolas por primera vez
 en alta humedad (99% RH) y poco a poco la
humedad se redujo a 70% durante un
período de 30 días.
 El endurecido plantas en macetas se
mantuvieron en invernadero durante
aproximadamente 2 meses y finalmente
transferidos al campo.

12. RESULTADOS
EFECTO DE BAP Y KINETINA
Como comparación con el control, entre las diversas hormonas utilizadas para
la formación de brotes múltiples, la mejor respuesta fue producida con medio
MS que contenía 0,2 mg / l de BAP y kinetina con un promedio de 3,5 ± 0,2
brotes de Calcutta Single mientras que 2,0 mg / l de BAP y kinetina con una
longitud del tallo de 6,2 ± 0,3 cm. (Tabla 1-y Figura 1).

13. EFECTO DE IAA Y BAP
La mejor enraizamiento apareció en combinación de 0,5 mg / l de IAA y 05
mg / l de BAP se cultivaron con el medio MS; mientras que el control no
mostró ningún resultado aparente. Estos resultados se muestran en la (Tabla
2).

14. CONCLUSIONES
 Como la preocupación de crecimiento, el nivel de hormona endógena
es mayor en la variedad individual CalcuTta, ya que requiere solamente
una pequeña concentración de hormona exógena que es 0,2 mg / l de
BAP y 0,2 mg / l de Kinetina por su inducción de brotes y multiplicación
y simultáneamente para la inducción de la raíz
 Los niveles de IAA se mantuvieron bajas durante las primeras etapas
de la bombilla de la brotación en P.tuberosa L. pero aumentaron
rápidamente después de eso. La drástica reducción en el contenido
de AAB libre en los tejidos se correlacionan con flores la iniciación y el
desarrollo de la flor en P. tuberosa.
 De acuerdo con investigaciones anteriores, que reveló que un
específico la biosíntesis de metabolitos secundarios y la acumulación
en una planta está en función de las hormonas que implican en la
planta diferenciaciones de crecimiento en diferentes etapas de
desarrollo. Por lo tanto, la incorporación de los reguladores del
crecimiento de plantas específicas como IAA, kinetina y BAP en un
medio de crecimiento (MS) puede apoyar la síntesis de compuestos
químicos de la intereses, especialmente compuestos relacionados con
perfumes y aromas en P. tuberosa L.

15. El presente estudio es el primero en describir un protocolo de regeneración
directa de Calcuta individuales que emplean los brotes. Los sistema de micro
propagación ha asegurado establecimiento efectivo, multiplicación rizo génesis
y aclimatación de esta variedad y podría ser explotada para multiplicar
genotipos elite y desarrollar estrategias in vitro para la explotación de este
hierba ornamental y medicinal.
REFERENCIAS
 Benschop M. 1993. Polianthes. In: The physiology of flower bulbs
(De Hertogh A., Le Nard M., Eds). Elsevier Publ, Amsterdam, the
Netherlands.
 pp. 589-601. [2] Edwards., Michael. 2006. Fragrances of the world.
Crescent House Publishing.
 [3] Huang K. L., I. Miyajima, H, Okubo, T.M. Shen and T.S. Huang.
2001. Breeding of colour tuberose (Polianthes) and cultural
experiments in Taiwan. Acta Horticulturae 570, 367 -371.
 Nhut, T., Van, B., Silva, J. 2002. Changes of shoot regeneration
potential of oriental hybrid lily. Adv Horti Sci, 9: 79–82.