Assisted Human Reproduction

M. Carme Pons
Assisted Human
Reproduction
Scientific comunications
in poster format
Scientific comunications
in poster format

ICSI A DIA +1 PER FALLADA COMPLETA DE LA INSEMINACIÓ
Taula I: resultats de FIV-INSEMINACIÓ
Període març-setembre de 2000
total de puncions ecogràfiques: 83
total de puncions amb recuperació d’oòcits: 80
FIV-INS FIV-DO-INS*
núm. de cicles 22 4
fallada total fecundació 1 1
transferències 20** 3
bhCG+ 8 3
percentatge bhCG+/TE 40% 100%
mitjana d’oòcits madurs 7,7 [1-22] 10,75 [8-14]
mitjana de zigots 2PN 6,5 [0-16] 7,0 [0-13]
taxa de fecundació 84% 65%
*S’inclouen només els cicles de donació d’oòcits (DO) sincrònica
**1 cicle sense transferència per desenvolupament embrionari anòmal
M. Carme Pons1
Mark Grossmann1
Manel Masramon1
Josep Miquel Viladoms1
Alfonso Vergés1 i
Javier Nadal1,2
INTRODUCCIÓ: En els cicles de Fecundació In Vitro (FIV) la inseminació convencional dels oòcits és el mètode d’elecció, a la
nostra Unitat, quan no hi ha una causa masculina aparent en l’esterilitat de la parella. En aquesta estratègia les fallades totals de
fecundació (hom no detecta fecundació en cap dels oòcits inseminats) són imprevisibles i porten al fracàs del cicle de FIV.
Les estadístiques indiquen que entre un 10% i un 27% dels casos de FIV fracassen per no-fecundació (Chen et al., 1995). Atesos
els pobres resultats obtinguts amb la reinseminació, l’única alternativa a abandonar el cicle consisteix en efectuar ICSI als oòcits
prèviament inseminats (Nagy et al.,1993; Tsirigotis et al., 1994). L’ús de la ICSI a dia+1 es considera una excel·lent eina
diagnòstica però no hi ha consens sobre la seva eficàcia terapèutica atesos el risc d’anomalies cromosòmiques i el rendiment
obtingut: només tres centres han comunicat gestacions a termini (Lundin et al., 1996; Bussen et al., 1997; Morton et al., 1997).
Presentem els dos casos de fallada total de fecundació ocorreguts en el primer trimestre de funcionament de URA. La taula I
mostra les xifres referides als casos de FIV amb inseminació convencional.
MATERIAL I MÈTODES: Estimulació ovàrica amb Gonal-F®
(Serono). Punció fol·licular ecogràfica, amb sedació, 36 h
després de l’administració de 10.000 IU de hCG (Profasi®,
Serono). Inseminació overnight en gota de 100 ml de medi
IVF® (Scandinavian) amb 15-18.000 espermatozoides. Cultiu
dels embrions en medi IVF. Eclosió assistida amb solució
àcida de Tyrode immediatament abans de la transferència
ecoguiada.
Els espermatozoides per a la ICSI corresponen a la mostra
preparada el dia anterior, mantinguda a Ta fins escalfar-la a
37ºC, 30 minuts abans de la microinjecció.
CONCLUSIONS: El fet d’aconseguir implantació embrionària
reforça el protocol d’ICSI a dia+1. En la nostra opinió,
millorar-ne l’efectivitat depèn d’una rigurosa avaluació dels
oòcits no-fecundats, de la immediatesa en microinjectar-los i
d’una estricta selecció dels embrions aptes per a transferir.
BIBLIOGRAFIA: Bussen et al. (1997) HumReprod 12:2560-62.
Chen et al. (1995) Fertil&Steril 63:1337-40. Lundin et al. (1996)
Fertil&Steril 66:118-21. Morton et al. (1997) Fertil&Steril 68:488-91.
Nagy et al. (1993) HumReprod 8:2180-84. Tsirigotis et al. (1994)
HumReprod 9:1359.
Descripció cas 1: S’obtingueren dos oòcits madurs de la punció
fol·licular d’una dona de 33 anys. A les 18h postinseminació cap
d’aquests oòcits presentà signes de fecundació (ni pronuclis ni
2n corpuscle polar), de manera que s’efectuà ICSI
immediatament després. En ambdós oòcits s’observà l’extrusió
del 2n CP a les 5 h de la ICSI i 2PN a partir de 7 h postICSI. Els
dos zigots es dividiren en dues cèl·lules a les 30 h de la
microinjecció i en 4-cèl·lules a les 45 h, moment en el que
s’efectuà la transferència. Dotze dies després el nivell de bhCG
en sang era de 34 IU, que no es mantingué al següent control
hormonal. Les tres fotografies de la dreta mostren l’evolució
d’un d’aquests dos embrions a les 7, 30 i 45 h postICSI.
Descripció del cas 2: S’assignaren nou oòcits madurs a la
parella receptora (edat de la donant 20 anys). 18 h
postinseminació, en cap d’aquests oòcits no es detectà
fecundació. S’efectuà ICSI immediatament després, i en aquest
cas, 4 h postICSI ja es detectà el 2n CP en cinc dels oòcits
microinjectats i, a les 7 h, s’observaren 2PN en sis d’ells. Tots
sis embrions assoliren l’estadi de 2-cèl·lules a les 30 h i el de 4-
cèl·lules a les 45 hores postICSI, moment en què 3 embrions
foren seleccionats per a ser transferits. Als 12 dies hom
determinà un nivell de bhCG de 144 IU (838 IU el dia 18è),
malgrat que no fou una gestació evolutiva.
CENTRO MEDICO TEKNON
1Unitat de Reproducció Assistida
ura@cmteknon.com
2Programa Dona-Dona. FIV-Barcelona
XVIè Congrés de Metges i Biòlegs de Llengua Catalana. Barcelona, 28-31 d’octubre de 2000

El programa de criopreservación: una potente herramientaEl programa de criopreservación: una potente herramienta
dentro de los protocolos de Reproducción Asistidadentro de los protocolos de Reproducción Asistida
Introducción: Desde su creación en marzo del 2000, la Unidad de Reproducción Asistida ha mantenido como
estrategia de criopreservación la estricta selección de los embriones tanto en estadio pronuclear como en
estadio de blastocisto. Programamos criopreservación cuando se obtienen más de 9 zigotos de buena
morfología de un mismo ciclo de FIV y/o cuando los embriones no transferidos alcanzan el estadio de
blastocisto con excelente morfología (tanto de trofectodermo como de MCI). Además, en los ciclos de
transferencia asincrónica, se criopreserva la totalidad de los zigotos 2PN.
Todos los embriones criopreservados están documentados y se dispone de las autorizaciones para la propia
criopreservación y para su hipotética donación en los casos previstos en la legislación vigente.
M. Grossmann, MC. Pons, M. Masramon, JM. Viladoms, A. Vergés y J. NadalM. Grossmann, MC. Pons, M. Masramon, JM. Viladoms, A. Vergés y J. Nadal
Resultados: En los 106 ciclos de criopreservación realizados hasta el
31/08/01 se han almacenado un total de 570 embriones.
De las 67 transferencias de embriones criopreservados se detectó bhCG+
en el 40%. La siguiente tabla resume los resultados de esas
transferencias.
Conclusiones: La rigurosa selección (según criterios morfológicos) de los embriones sometidos a
criopreservación permite obtener tasas de gestación notablemente altas, lo que convierte dicho programa en
una potente herramienta más allá de la mera obligación legal de conservar los embriones viables sobrantes.
Unitat de Reproducció Assistida
ura@cmteknon.com
Material y Métodos: El protocolo de criopreservación de zigotos 2PN fue descrito por Lassalle, Testart y
Renard (Fert&Steril. 44:645, 1985) usando propilenglicol (1,5M) y sacarosa (0,1M). Para la criopreservación
de blastocistos se siguió el protocolo descrito por Cohen y col. (J. IVF/ET 2:59, 1985) basado en la
incorporación lenta de glicerol hasta una concentración final del 8%. En todos los ciclos se realizó seeding
manual a la temperatura de -7ºC. Todos los medios de cultivo in vitro y de criopreservación son de Vitrolife®.
2PN 2PN blastocistos
propios donación
núm de ciclos descongelación 9 53 5
núm embriones descongelados 35 194 13
núm embriones que sobreviven (%) 31 (88,6) 179 (92,3) 10 (76,9)
núm transferencias 9 51 5
núm embriones transferidos 26 130 10
media embriones transferidos 2,8 2,5 2
núm bhCG+/ciclo descongelación (%) 3 (33,3) 19 (35,8) 3 (60)
porcentage bhCG+/ciclo transferencia 33,3% 37,2% 60%
I Congreso ASEBIR. Murcia, 2001

Material y métodos:
•• Estudio retrospectivo (enero - junio 2001) de 744 embriones procedentes de 118 ciclos de FIV y 30 casos de donación de
ovocitos. Análisis estadístico: Chi cuadrado.
•• Cultivo in vitro individualizado en gotas de medio IVF (Vitrolife) hasta día+3. Selección de los embriones a transferir según
criterio morfológico (Steer, 1992). Transferencia ecoguiada. Eclosión asistida selectiva.
•• Valoración morfológica del zigoto a las 16 - 18 h postinseminación (pi) y de los primeros signos de división a las 22 - 26 h pi. En
día+2 y día+3 evaluación de la morfología embrionaria en cuanto al número de blastómeros, simetría, fragmentación, presencia
de multinucleación y aspecto citoplasmático. Se excluyeron del estudio aquellos zigotos con alguna anomalía citoplasmática
(vesículas, vacuolas, citoplasma granular…).
•• Valoración de la tasa de implantación en 46 transferencias homólogas (todos los embriones transferidos en un mismo ciclo
presentan el mismo patrón pronucleolar).
Introducción: Basándose en el tamaño y la posición de los pronúcleos así como en el
número y distribución de los nucleolos, Tesarik y Greco (1999) y Scott et al. (2000) han
propuesto sendos modelos para la selección precoz de zigotos. La aplicación conjunta de
este criterio y el morfológico en día+3 puede ayudar a reducir las tasas de gestación
múltiple.
VALOR PRONÓSTICO DE LA MORFOLOGÍA PRONUCLEAR PARAVALOR PRONÓSTICO DE LA MORFOLOGÍA PRONUCLEAR PARA
EL DESARROLLO EMBRIONARIO Y LA IMPLANTACIÓNEL DESARROLLO EMBRIONARIO Y LA IMPLANTACIÓN
VALOR PRONÓSTICO DE LA MORFOLOGÍA PRONUCLEAR PARAVALOR PRONÓSTICO DE LA MORFOLOGÍA PRONUCLEAR PARA
EL DESARROLLO EMBRIONARIO Y LA IMPLANTACIÓNEL DESARROLLO EMBRIONARIO Y LA IMPLANTACIÓN
Resultados:
Bibliografía: Scott et al. (2000) Hum. Reprod. 15:2394-2403. Steer et al. (1992) Hum. Reprod. 7:117-9. Tesarik, J. and Greco, E. (1999) Hum.
Reprod. 14:1318-23.
Conclusiones:
 La morfología pronuclear no está directamente relacionada
con el desarrollo del embrión preimplantatorio, a excepción del
patrón Z4, del cual derivan embriones de inferior calidad.
 La notable tasa de implantación de los embriones Z1 indica el
importante valor pronóstico de este patrón para la implantación.
 No obstante, como los zigotos del grupo Z1 son poco
frecuentes sería necesaria la caracterización de un subgrupo con
mayor potencial dentro de las categorías Z2 y Z3. Así, la
aplicación de este criterio, en combinación con el de morfología
en día+3, podría ser de gran utilidad para la selección de los
embriones a transferir y criopreservar.
Vanrell, I., Pons, MC., Grossmann, M., Masramon, M., Esteve, E.,
Nadal, J., Coloma, E., Verdú, N., Vergés, A. y Viladoms, JM.
Objetivo: Determinar la relación entre los patrones de morfología pronuclear definidos
por Scott et al. (2000) y el desarrollo preimplantatorio del embrión y su eventual valor
pronóstico para la implantación.
Z1 Z2 Z3 Z4
núm. embriones totales estudio 157 125 473 49
(%) (21,1) (16,8) (55,5) (6,6)
núm. transferencias homólogas 12 5 27 2
núm. embriones transferidos 25 11 61 3
núm. gestaciones clínicas 7 2 10 0
núm. sacos 10 3 12
porcentaje gestaciones 58,3 40 37
porcentaje implantación 40 27,3 19,7
Unitat de Reproducció Assistida
ura@cmteknon.com
Z1 Z2
Z3 Z3
Z4 Z4
Modelo de Scott
70,8
55,6
66,5
43,3
10,2
7
9,7
4,4
Divididos Buena morfología
Z1
Z2
Z3
Z4
Porcentajes de embriones divididos a las 22-26 horas pi y de
embriones de buena morfología en día +3
12,7
23,7
14,5
30,6
10,9
12,3
13,2
20
Bloqueados MNB
Z1
Z2
Z3
Z4
Porcentaje de embriones bloqueados y de embriones
multinucleados (MNB) durante el cultivo in vitro
**
**
**
**
**
*Estadísticamente diferentes. P < 0,05
*Estadísticamente diferentes. P < 0,05
XXVIII Symposium Internacional FERTILIDAD. Barcelona, 17-19 d’octubre de 2001

Twenty-nine normal loci and the 31 most frequent mutations
in southern Europe of the CFTR gene detection at the same
time. Its application in PGD analysing 1PB.
Twenty-nine normal loci and the 31 most frequent mutations
in southern Europe of the CFTR gene detection at the same
time. Its application in PGD analysing 1PB.
RESULTS AND DISCUSSION
In our preliminary results of the PGD-1PB twenty-nine normal loci and up to the 31
most frequent mutations in Southern Europe (including the 24 most common
world-wide) of the CFTR gene can be detected at the same time in preamplified
single buccal cells, metaphase II and its correspondent 1PB .
The normal and/or mutant loci can be identified, although the peak sizes are
heterogeneous probably due to a different efficiency of each primer set. Since the
mutations carried by the parents are known, the rest of the peaks of the normal
loci can be used as a control of the analysis. Our method directly detects the
mutation in contrast to the use of linked markers [8] moreover, they need to be
genetically informative. ADO (allele drop-out) has been reported to affect 0%-33.3
% of the single cell amplifications [6, 7]. During the setting up of the procedure,
we have obtained about a 75% rate of success. The remaining 25% can be
attributed to ADO, failures of preamplification and the efficiency of the different
couples of primers.
RESULTS AND DISCUSSION
In our preliminary results of the PGD-1PB twenty-nine normal loci and up to the 31
most frequent mutations in Southern Europe (including the 24 most common
world-wide) of the CFTR gene can be detected at the same time in preamplified
single buccal cells, metaphase II and its correspondent 1PB .
The normal and/or mutant loci can be identified, although the peak sizes are
heterogeneous probably due to a different efficiency of each primer set. Since the
mutations carried by the parents are known, the rest of the peaks of the normal
loci can be used as a control of the analysis. Our method directly detects the
mutation in contrast to the use of linked markers [8] moreover, they need to be
genetically informative. ADO (allele drop-out) has been reported to affect 0%-33.3
% of the single cell amplifications [6, 7]. During the setting up of the procedure,
we have obtained about a 75% rate of success. The remaining 25% can be
attributed to ADO, failures of preamplification and the efficiency of the different
couples of primers.
REFERENCES:
1.- Cutting GR. Cystic Fibrosis. Emery and Rimoin’s. Principles and practice of Medical Genetics. Vol. 2, 3rd
edition.
2.- Handyside AH, et.al. (1992). N Engl J Med. 327. 905-909.
3.- Wells D & Sherlock J. Prenat Diagn 18: 1389-1401 (1998).
4.- Findlay I, et.al. Hum Reprod (1995) vol. 10 (6) 1609-1618.
5.- Zhang L, et.al. Proc Nat Acad Sci. 89. 5847-5851. 1992.
6.- Sherlock J, et.al. Ann Hum Genet (1998), 62, 9-23.
7.- Rechitsky S, et.al. J Assist Reprod Genet. 1998, 15 (5) 253-257.
8.- Durban M, et.al. Hum Reprod Up. Vol.7. No.6. 591-602 (2001).
10. Dreesen JCFM, Jacobs LJAM, Bras M, et.al.. Mol Hum Reprod. 2000. 6 (5) 391-396.
11. Eftedal I, Schwatz M, Bendtsen H, et.al. Mol Hum Reprod. 2001. 7 (3). 307-312.
Acknowledgements: This work received financial support by the Fundació La Marató
de TV3, Project 98/1510, and 2001-SGR 00201.
Acknowledgements: This work received financial support by the Fundació La Marató
de TV3, Project 98/1510, and 2001-SGR 00201.
JF Sánchez-García1, J Benet1, C Gutiérrez-Mateo1, E Monrós2, JL Séculi2 , MC Pons3, M
Grossmann3, JM Calafell4, MD Company5, C Márquez6 , M Carrera7, J Egozcue1, J Navarro1
e-mail: jsanchezg@servet.uab.es; joaquima.navarro@uab.es
1Unitat de Biologia, Facultat de Medicina, Universitat Autònoma de Barcelona & 2 Hospital St. Joan de Déu, 3Centro Mé dico
Teknon, 4Hospital Clínic i Provincial, 5Institut Mèdic de Reproducció, 6Hospital Vall d’Hebrón, 7Centro de Patología Celular.
Barcelona, Spain.
JF Sánchez-García1, J Benet1, C Gutiérrez-Mateo1, E Monrós2, JL Séculi2 , MC Pons3, M
Grossmann3, JM Calafell4, MD Company5, C Márquez6 , M Carrera7, J Egozcue1, J Navarro1
e-mail: jsanchezg@servet.uab.es; joaquima.navarro@uab.es
1Unitat de Biologia, Facultat de Medicina, Universitat Autònoma de Barcelona & 2 Hospital St. Joan de Déu, 3Centro Mé dico
Teknon, 4Hospital Clínic i Provincial, 5Institut Mèdic de Reproducció, 6Hospital Vall d’Hebrón, 7Centro de Patología Celular.
Barcelona, Spain.
This kind of analysis would be
recommended to couples in which
both partners are carriers of at least
one mutation, selecting embryos
from oocytes with normal alleles to
obtain healthy offspring.
INTRODUCTION
Cystic fibrosis is the most common autosomal-recessive disease. Its
main features are obstruction and infections of the respiratory tract
and pancreatic failure. The most frequent mutation of the CFTR gene
(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator is F508.
About 1 in 25-30 Caucasians are carriers of cystic fibrosis, at risk for
having children with this single gene disorder [1]. The combination of
the in vitro fertilisation techniques with the polymerase chain reaction
technology allows for the detection of genetic abnormalities for the
Preimplantation Genetic Diagnosis by First Polar Body analysis (PGD-
1PB). The absence or the presence of the mutation is detected in the
first polar body in order to fertilise and transfer genetically normal
oocytes to the mother and reject the mutant gametes .
The F508 deletion was the first single gene defect for which PGD
was successfully applied [2]. PGD-1PB has been applied in several
monogenic diseases [3]. Recent studies in isolated fibroblasts, buccal
cells and blastomeres are based on microsatellite markers linked to
the mutation [10, 11].
To overcome the difficulty of a single cell analysis we have applied a
modified primer extension preamplification polymerase chain reaction
(PEP-PCR) procedure [5]. The products obtained are used in a
multiplex PCR and a fluorescent oligonucleotide ligation assay (OLA)
for the identification of normal and mutant loci.
MATERIAL AND METHODS
MII
1PB
ACCEPTEDACCEPTEDACCEPTEDACCEPTED
CFTR normal allele
MII
1PB
REJECTEDREJECTED
CFTR mutant allele
Meiotic segregation of a woman carrier of a Cystic Fibrosis mutation. Each square
represents the genetic constitution of the oocyte and its complementary 1PB, indicating the
decision of accepting or rejecting the oocyte, in case the father is also carrier.
Meiotic segregation of a woman carrier of a Cystic Fibrosis mutation. Each square
represents the genetic constitution of the oocyte and its complementary 1PB, indicating the
decision of accepting or rejecting the oocyte, in case the father is also carrier.
SINGLE
CELL
MultiplexMultiplexMultiplexMultiplex
PCRPCR
MultiplexMultiplexMultiplexMultiplex
OLAOLA
AnalysisAnalysis
electrophoresiselectrophoresis
and fluorescence
detection
ABI Prism 377ABI Prism 377
Genescan
Genotyper
Cystic FibrosisCystic Fibrosis
AssayAssay
LYSIS:
Proteinase
K + SDS
LYSIS:
Proteinase
K + SDS
Primer 15 N:
NNNNNNNNNNNNNNN
Primer 15 N:
NNNNNNNNNNNNNNN
Whole
Genome
Amplification
{1}
PEP-PCR
(c)
(b)(a)
The entire process (lysis, PEP-PCR, multiplex PCR, OLA, electrophoresis and
analysis) takes 24-26 hours. As embryo transfer can be done the third or
fourth day after oocyte recovery [8], preimplantation genetic diagnosis using
first polar body is very adequate.
Electropherograms obtained from (a) 200 pg of DNA, (b) two preamplified normal buccal cells and (c and d) a
preamplified DNA from Metaphase II and 1PB.
(d)
1st MEDITERRANEAN CONGRESS ON REPRODUCTION MEDICINE. Taormina, 2002

APROXIMACIÓN A LAS CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DEAPROXIMACIÓN A LAS CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE
LOS EMBRIONES QUE HAN IMPLANTADOLOS EMBRIONES QUE HAN IMPLANTADO
MC. Pons, I. Vanrell, M. Grossmann, E. Coloma, N. Verdú, M. Masramon, A. Vergés, J. NadalMC. Pons, I. Vanrell, M. Grossmann, E. Coloma, N. Verdú, M. Masramon, A. Vergés, J. Nadal
Unidad de Reproducción Asistida. CENTRO MÉDICO TEKNON. Barcelona. ura@cmteknon.comUnidad de Reproducción Asistida. CENTRO MÉDICO TEKNON. Barcelona. ura@cmteknon.com
IntroducciónIntroducción::
ParaPara reducirreducir elel númeronúmero dede embrionesembriones aa transferirtransferir eses absolutamenteabsolutamente indispensableindispensable disponerdisponer dede criterioscriterios dede
evaluaciónevaluación queque correlacionencorrelacionen eficazmenteeficazmente lala calidadcalidad deldel embriónembrión yy susu capacidadcapacidad dede generargenerar unauna gestacióngestación..
ElEl objetivoobjetivo dede esteeste estudioestudio eses lala caracterizacióncaracterización dede todostodos aquellosaquellos embrionesembriones queque hanhan sidosido capacescapaces dede
implantarimplantar dede formaforma exitosaexitosa (saco(saco embrionarioembrionario concon latidolatido cardíaco)cardíaco)..
MaterialMaterial yy métodométodo::
SeSe analizaronanalizaron retrospectivamenteretrospectivamente 103103 embrionesembriones transferidostransferidos enen loslos 5151 ciclosciclos dede FIVFIV yy DODO sincrónicasincrónica enen
loslos queque hubohubo 100100%% dede implantaciónimplantación..
TécnicaTécnica dede fecundaciónfecundación segúnsegún calidadcalidad seminalseminal..
EdadEdad mediamedia dede 3030,,22 añosaños (rango(rango 1818--4343))..
TransferenciaTransferencia aa díadía ++33 ecoguiadaecoguiada..
EnEn 1919 dede laslas 5151 transferenciastransferencias sese seleccionaronseleccionaron
loslos embrionesembriones dede mejormejor calidadcalidad dede entreentre loslos dede lala
mismamisma cohortecohorte..
39,2
6,9
48
5,9
0
20
40
60
80
100
patrón pronuclear
Z1 Z2 Z3 Z4
46,6 53,4
0
20
40
60
80
100
primera división entre 24-27
hpi
división precoz no división precoz
1 2 3 4 5 6 7
1
2
3 1
4 7 1 1
5 1 1
6 2 8
7 1 1 23 1
8 2 2 42 3
9 1 3 1
M 1
72,8
21,4 5,8
0
20
40
60
80
100
grado de fragmentación
A (0-10%) B (10-20%) C (20-50%)
ConclusionesConclusiones::
LaLa mayoríamayoría dede loslos embrionesembriones descritosdescritos presentanpresentan unasunas característicascaracterísticas queque biénbién podríanpodrían serser laslas definitoriasdefinitorias dede
embriónembrión concon altoalto potencialpotencial dede implantaciónimplantación:: 44 blastómerosblastómeros aa Día+Día+22 yy 77--88 blastómerosblastómeros aa Día+Día+33;; gradogrado dede
fragmentaciónfragmentación nono superiorsuperior alal 2020%%,, ausenciaausencia dede blastómerosblastómeros multinucleadosmultinucleados yy patrónpatrón pronuclearpronuclear distintodistinto alal
ZZ44..
96
4 0
0
20
40
60
80
100
multinucleación
ausencia algún blastómero todos los blastómeros
34
66
0
20
40
60
80
100
simetria entre blastómeros
simétricos asimétricos
Resultados:Resultados:
CaracterísticasCaracterísticas analizadasanalizadas::
••PatrónPatrón dede pronúcleospronúcleos basadobasado enen elel modelomodelo dede LL.. ScottScott ((HumHum ReprodReprod.. 20002000,, 1515::23942394--24032403),),
••PrimeraPrimera divisióndivisión embrionariaembrionaria detectadadetectada entreentre laslas 2424 yy laslas 2727 horashoras postpost--inseminacióninseminación (hpi),(hpi),
••NúmeroNúmero dede blastómerosblastómeros enen díadía ++22 yy enen díadía ++33,,
••GradoGrado dede fragmentaciónfragmentación definidodefinido comocomo:: AA (≤(≤1010%%),), BB (>(>1010%% yy ≤≤2020%%)) yy CC (>(>2020%% yy <<5050%%),),
••SimetríaSimetría entreentre blastómeros,blastómeros, yy
••MultinucleaciónMultinucleación..
TablaTabla 11:: totaltotal dede casoscasos realizadosrealizados (Marzo(Marzo 20002000 -- JunioJunio 20032003))
Núm. blastómeros en D+2Núm. blastómeros en D+2
Núm.blastómerosenD+3Núm.blastómerosenD+3
número de blastómeros/dia
Embriones
por transfer
Ciclos (n) Gestaciones
(%)
Ciclos 100%
implantación
(%)
1 79 13 (16,4) 13
2 474 198 (42) 24 12
3 308 161 (52) 14 8,7
4 20 5 (25)
II Congreso ASEBIR. Granada, 11-12 de desembre de 2003

INCIDENCIA DE GESTACIONES TRIPLES AL DISMINUIR ELINCIDENCIA DE GESTACIONES TRIPLES AL DISMINUIR EL
NÚMERO DE TRANSFERENCIAS DE RIESGONÚMERO DE TRANSFERENCIAS DE RIESGO
Objetivo: Valorar el efecto de la disminución del número de transferencias de riesgo (>2 embriones) en las tasas
de gestación y en la tasa de embarazo múltiple.
Diseño: Estudio retrospectivo de las transferencias embrionarias realizadas entre enero de 2000 y julio de 2004
y agrupadas en tres tratamientos distintos: ciclos propios de la paciente (FIV), ciclos de donación de ovocitos
(DO), y ciclos de transferencia de embriones criopreservados (TEC)
Material y métodos: Ciclos de inseminación ó ICSI. Transferencia embrionaria en día +3, bajo control
ecográfico, y con eclosión asistida selectiva mediante solución ácida de Tyrode. Cultivo in vitro en medios
Vitrolife®. Criopreservación de zigotos según el protocolo Lassalle, Testart y Renard (1985). Sólo se realizaron
transferencias de cuatro embriones durante el año 2000.
M. Grossmann, MC. Pons, I. Vanrell, E. Castellanos, E. Coloma, M. Masramon y J. Nadal.
Unitat de Reproducció Assistida. CENTRO MÉDICO TEKNON. Barcelona. ura@cmteknon.com
Conclusiones: Reducir drásticamente el número de transferencias de 3 embriones disminuye significativamente
las gestaciones triples sin afectar las tasas de gestación, por lo que parece razonable recomendar que no se
realicen transferencias de riesgo.
Resultados: De 1.694 transferencias, 622 fueron de >2 embriones y generaron 28 embarazos triples (4,5%).
Gráfica 1: Resultados globales. Gráfica 2: Resultados en FIV.
42,7
76
47,9
57,9
41,4
32,6
37,4
22,8
48,4
25,4
0
10
20
30
40
50
60
70
80
2000 2001 2002 2003 p2004
%
106 209 253 313 229
5 8 3 1 0
Año
150 311 386 500 347
6 11 5 3 3
Nº Total transferencias
Nº Total gestaciones triples
Tasa de gestación
Tasa de transferencia
> 2 embriones
42,5
75,5
49,3
54,8
39,9
21,4
37,7
8
45,8
16,6
0
10
20
30
40
50
60
70
80
2000 2001 2002 2003 p2004
Gráfica 3: Resultados en DO. Gráfica 4: Resultados en TEC.
64,3
100
53,3
68,9
63,8
28,8
41
16,6
65,8
12,2
0
10
20
30
40
50
60
70
80
2000 2001 2002 2003 p2004
%
30 57 81 127 77
1 1 0 2 3
Año
14 45 52 60 41
0 2 2 0 0
Nº Total transferencias
Nº Total gestaciones triples
Tasa de gestación
Tasa de transferencia
> 2 embriones
33,3
73,3
38,6
61,4
32,1
67,9
34,6
63,8
46,7
58,4
0
10
20
30
40
50
60
70
80
2000 2001 2002 2003 p2004Año
Año
%
%
*p2004 = resultados parciales correspondientes al período Enero-Julio
Iª Reunión Española sobre embarazo múltiple, Barcelona, 17 y 18 de Septiembre de 2004

DISMINUCIÓN DE LA INCIDENCIA DE LAS GESTACIONESDISMINUCIÓN DE LA INCIDENCIA DE LAS GESTACIONES
TRIPLES EN EL PROGRAMA DE REPRODUCCIÓN ASISTIDATRIPLES EN EL PROGRAMA DE REPRODUCCIÓN ASISTIDA
Introducción: La tasa de triples en URA ha sido y es muy inferior a la media. A pesar de ello, mantenemos el
objetivo prioritario de reducirla al mínimo por lo que progresivamente hemos ido disminuyendo el porcentaje de
transferencias de 3 embriones desde niveles del 75% (año 2000) a valores tan bajos como el 8% (año 2003).
Diseño: Estudio retrospectivo de las transferencias realizadas durante 4 años (2000-2003) agrupadas en: ciclos
propios de paciente (FIV), de donación de ovocitos (DO) y de transferencia de embriones criopreservados (TEC).
Material y métodos: Inseminación/ICSI. Transferencia embrionaria en día +3, bajo control ecográfico, y con
eclosión asistida selectiva mediante solución ácida de Tyrode. cultivo in vitro en medios Vitrolife®. Sólo se
realizaron transferencias de cuatro embriones durante el año 2000.
MC. Pons, M. Grossmann, I. Vanrell, E. Castellanos, M. Masramón, A. Vergés y J. Nadal.
Conclusiones: Evitar las gestaciones triples es posible reduciendo drásticamente el porcentaje de las
transferencias de 3 embriones (de riesgo) aunque ello comporte una tendencia, no significativa, a la
disminución en la tasa de gestación.
75,5
42,5
6,24,7
54,8
49,3
7
3,8
21,4
39,9
5,5
1,2
7,9
37,6
4
0,34
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
2000 2001 2002 2003
tasa TE de 3 tasa gestación
tasa triples/TE de 3 tasa triples/TE totales
100
61,3
0 0
69
40,9
6,4
4,4
28,8
63,8
13,3
3,8
16,6
41
0 0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
2000 2001 2002 2003
150
115
64
6
319
180
152
11
396
122
164
5
531
115
191
3
0
100
200
300
400
500
600
2000 2001 2002 2003
total de TE TE de 3 gestaciones triples
Gráfica 1: Resultados globales. 1.396 transferencias
(22 de 4 embriones y 515 de 3) y tasa global de
gestación del 41,5%. Incidencia global de gestación triple
del 1,8% que desglosada por años fue del 4%, 3,4%,
1,3% y 0,6% entre 2000 y 2003.
Resultados:
Gráfica 2: Resultados en FIV. Disminución del
porcentaje de transferencias de 3 embriones: del 75% al
8%. Disminución de la incidencia de triples: del 4,7% al
0,34%. Sin disminución significativa de la tasa de
gestación.
Gráfica 3: Resultados en DO. Disminución del
porcentaje de transferencias de 3 embriones del 100% al
16,6%. Incidencia de triples variable: del 4,4% al 0%.
Sin disminución significativa de la tasa de gestación.
Gráfica 4: Resultados en TEC. Disminución del
porcentaje de transferencias de 3 embriones del 76,6% al
50,6%. Disminución de la incidencia de triples del 3,3% al
1,3%. Tasa de gestación sin variaciones.
76,6
33,3
4,3 3,3
53
48,1
2,81,5
57,6
32,6
0 0
50,6
31,1
2,51,3
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
2000 2001 2002 2003
XXV Congreso Nacional de la Sociedad Española de Fertilidad. La Coruña, 13-15 de mayo de 2004

INDICADORES PRONÓSTICO EN LA TRANSFERENCIA DEINDICADORES PRONÓSTICO EN LA TRANSFERENCIA DE
BLASTOCISTOS CRIOPRESERVADOSBLASTOCISTOS CRIOPRESERVADOS
D+5 D+6 D+7
Ciclos de descongelación 24 30 3
Blastocistos descongelados 49 56 3
Tasa supervivencia 75,5% 73,2% 66,6%
Transferencias canceladas 2 2 1
Media blastocistos transferidos 1,5 1,3 1
Tasa de gestación clínica 50%a 7,1%b 0b
Tasa de gestación evolutiva 40,9%c 3,6%d
Tasa de implantación 41,2%e 5,1%f
OBJETIVO: Estudio retrospectivo de todas las transferencias de blastocistos criopreservados desde el año 2000 hasta fin del
2003 haciendo hincapié en: 1) El día de desarrollo in vitro en el que se criopreservaron y 2) La morfología post-descongelación.
MATERIAL Y MÉTODO:
• Los embriones de buena calidad sobrantes de la FIV se
cultivan en medios secuenciales a partir de D+3.
• Evaluación morfológica diaria, selección estricta y
criopreservación (medios Vitrolife®).
• Descongelación 4-6 horas (h) antes de la transferencia.
Los blastocistos que presentaron más de un 75% de
degeneración celular no fueron transferidos.
• Transferencia ecoguiada de uno o dos blastocistos previa
eclosión asistida (AH) mediante solución ácida de Tyrode.
• Análisis estadístico: prueba Fisher’s Exact Test.
a,bp<0,001, c,dp<0,01, e,fp<0,0001.
RESULTADOS:
I. Vanrell, I. Solvas, M. Grossmann, MC. Pons, E. Esteve, M. Twose, E. Coloma y J. Nadal.
CONCLUSIONES: Las tasas de gestación y de implantación obtenidas corroboran el gran potencial de desarrollo de
los embriones que alcanzan el estadio de blastocisto en día +5 respecto al de los de día +6 o +7. Asimismo, fue
marcador de buen pronóstico el hecho que los blastocistos criopreservados recuperasen la cavidad blastocélica en
las horas inmediatas a la descongelación.
TABLA I: Resultados globales TABLA II: Resultados según el día de criopreservación
DESCONGELACIÓN - EVALUACIÓN MORFOLÓGICA - AH - TRANSFERENCIA3
CULTIVO IN VITRO HASTA D+5, D+6 ó D+7 - CRIOPRESERVACIÓN2
1 FECUNDACIÓN (INS/ICSI) - CULTIVO IN VITRO - TRANSFERENCIA EN D+3
Valoración pronóstico de la morfología 4 h después de la descongelación:
Puntuación: 0: blastocisto contraído con más del 40% de degeneración
1: blastocisto contraído con menos del 40% de degeneración o inicio de cavitación
2: blastocisto en expansión.
En transferencias de dos blastocistos se suma la puntuación de ambos
Ciclos de descongelación 57
Blastocistos descongelados 108
Tasa de supervivencia 74%
Transferencias canceladas 5
Media blastocistos transferidos 1,5
Tasa de gestación clínica 25 %
Tasa de gestación evolutiva 17,3 %
Tasa de implantación 21,3 %
Transferencias de 2 blastocistos
Puntuación* 0 1 2 3 4
Gest. clínica
0
(0/2)
0
(0/4)
27,3%
(3/11)
80%
(4/5)
100%
(2/2)
Gest. evolutiva
18%
(2/11)
60%
(3/5)
100%
(2/2)
Implantación
18,2%
(4/22)
40%
(4/10)
100%
(4/4)
Tranferencias de 1 blastocisto
Puntuación* 0 1 2
Gest. clínica
11,1%
(1/9)
6,7%
(1/15)
50%
(2/4)
Gest. evolutiva
0
(0/9)
6,7%
(1/15)
50%
(2/4)
Implantación
11,1%
(1/9)
6,7%
(1/15)
50%
(2/4)
XXV Congreso Nacional de la Sociedad Española de Fertilidad. La Coruña, 13-15 de mayo de 2004

RESULTADOS DE CRIOPRESERVAR 3, 4 ó 5 ZIGOTOS EN UNARESULTADOS DE CRIOPRESERVAR 3, 4 ó 5 ZIGOTOS EN UNA
MISMA PAJUELAMISMA PAJUELA
M.M. GrossmannGrossmann, MC. Pons, I., MC. Pons, I. VanrellVanrell, I., I. SolvasSolvas, M., M. MasramonMasramon y J. Nadaly J. Nadal
IntroducciónIntroducción::
Nos planteamos si deberíamos criopreservar los zigotos en grupos reducidos (por ejemplo 3 zigotos y así
ofrecer mayor número de criotransferencias pero con menores posibilidades de seleccionar los embriones
de mayor calidad), o bien ampliar hasta cinco el número de zigotos agrupados en cada pajuela con el fin
de ofrecer una transferencia electiva de los mejores embriones.
MaterialMaterial yy métodométodo::
Análisis retrospectivo de 111 ciclos de transferencia de zigotos criopreservados durante el periodo Enero
03 - Junio 05. Se han incluido todos aquellos ciclos en los que se criopreservaron más de 5 embriones
(por tanto más de una pajuela por caso) y en los que se descongeló una única pajuela para cada una de
las transferencias.
La criopreservación (protocolo de Lassalle, Testart y Renard, 1985) se realizó siempre entre las 17 y las
20 horas postinseminación. Condiciones estándares de cultivo in vitro y transferencia embrionaria
ecoguiada en día+3, en ciclo no estimulado, y previa eclosión asistida mediante solución ácida de Tyrode.
Medios Vitrolife para el cultivo y la manipulación.
Se han distribuido los 111 casos en tres grupos según el número de embriones agrupados en cada pajuela
(3, 4 y 5 zigotos, grupo G3, G4 y G5 respectivamente) y se compara la supervivencia embrionaria a la
descongelación y la tasa de gestación. Fisher’s exact test, P<0,005.
DiscusiónDiscusión yy conclusionesconclusiones::
Cuando un ciclo de FIV dispone de muchos (>8) zigotos para criopreservar, el modo de agrupar dichos
embriones en las pajuelas de criopreservación parece que no afecte a los resultados, por lo que usando
grupos reducidos se puede ofrecer a la paciente más oportunidades con la misma posibilidad de éxito.
Resultados:Resultados:
Los resultados se muestran en la tabla I. No se detectaron diferencias estadísticamente significativas.
Objetivo:
Comparar, en función del número de embriones en cada pajuela, las tasas de gestación de los ciclos de
transferencia de embriones criopreservados.
Bibliografía: Lassalle B., Testart J., Renard JP. (1985) Fertil Steril., 44 (5): 645-51.
grupo G3 grupo G4 grupo G5
Núm. casos 36 57 18
Núm. pacientes 30 51 15
Supervivencia
postdecongelación
93/108
86%
204/228
89,6%
83/90
92,2%
gest. por ciclo
15/36
41,7%
20/57
35%
9/18
50%
gest. por paciente
15/30
50%
20/51
39,2%
9/16
60%
Unidad de Reproducción AsistidaUnidad de Reproducción Asistida
ura@cmteknon.comura@cmteknon.com
III Congreso ASEBIR. Zaragoza, 17-18 de noviembre de 2005

Excelente Tasa de Gestación Evolutiva enExcelente Tasa de Gestación Evolutiva en
Pacientes con Riesgo de Hiperestimulación Ovárica SeveraPacientes con Riesgo de Hiperestimulación Ovárica Severa
con el Programa de Criopreservación de Zigotoscon el Programa de Criopreservación de Zigotos
MC Pons, M Grossmann, I Vanrell, I Solvas, E Coloma, A Vergés, X Julve y J Nadal
Unitat de Reproducció Assistida. Centro Médico Teknon. Barcelona. ura@cmteknon.com
Excelente Tasa de Gestación Evolutiva enExcelente Tasa de Gestación Evolutiva en
Pacientes con Riesgo de Hiperestimulación Ovárica SeveraPacientes con Riesgo de Hiperestimulación Ovárica Severa
con el Programa de Criopreservación de Zigotoscon el Programa de Criopreservación de Zigotos
MC Pons, M Grossmann, I Vanrell, I Solvas, E Coloma, A Vergés, X Julve y J Nadal
Unitat de Reproducció Assistida. Centro Médico Teknon. Barcelona. ura@cmteknon.com
INTRODUCCIÓN: La elevada respuesta ovárica a la estimulación
hormonal conlleva un mayor riesgo de hiperestimulación ovárica
severa. Su incidencia y gravedad es superior en mujeres gestantes con
lo cual la prevención más efectiva será evitar la gestación mediante la
opción de cancelar el ciclo de FIV o bien la opción de postergar la
transferencia criopreservando todos los embriones obtenidos.
INTRODUCCIÓN: La elevada respuesta ovárica a la estimulación
hormonal conlleva un mayor riesgo de hiperestimulación ovárica
severa. Su incidencia y gravedad es superior en mujeres gestantes con
lo cual la prevención más efectiva será evitar la gestación mediante la
opción de cancelar el ciclo de FIV o bien la opción de postergar la
transferencia criopreservando todos los embriones obtenidos.
OBJETIVOS: Valorar la eficacia de la criopreservación electiva de todos
los zigotos obtenidos en ciclos estimulados de FIV y la posterior
transferencia, estrategia adoptada en nuestro centro en pacientes con
riesgo potencial de hiperestimulación ovárica severa.
OBJETIVOS: Valorar la eficacia de la criopreservación electiva de todos
los zigotos obtenidos en ciclos estimulados de FIV y la posterior
transferencia, estrategia adoptada en nuestro centro en pacientes con
riesgo potencial de hiperestimulación ovárica severa.
CONCLUSIONES: El protocolo de criopreservación de todos los embriones obtenidos en ciclos con elevada respuesta ovárica se muestra muy eficaz
ya que permite:
1) disminuir el riesgo de hiperestimulación severa tras la punción ovárica al evitar la gestación no transferiendo embriones
2) obtener, en ciclos no estimulados, excelentes tasas de gestación, embarazos que evolucionan sin riesgo alguno de hiperestimulación
3) aprovechar el ciclo de estimulación para FIV, y en lugar de cancelarlo, incluso conseguir más de una gestación a partir del mismo intento.
CONCLUSIONES: El protocolo de criopreservación de todos los embriones obtenidos en ciclos con elevada respuesta ovárica se muestra muy eficaz
ya que permite:
1) disminuir el riesgo de hiperestimulación severa tras la punción ovárica al evitar la gestación no transferiendo embriones
2) obtener, en ciclos no estimulados, excelentes tasas de gestación, embarazos que evolucionan sin riesgo alguno de hiperestimulación
3) aprovechar el ciclo de estimulación para FIV, y en lugar de cancelarlo, incluso conseguir más de una gestación a partir del mismo intento.
MATERIAL Y MÉTODOS: Se seleccionaron retrospectivamente 26
pacientes estimuladas para ciclo de FIV en el período Marzo 2000-Julio
2005 y que presentaron riesgo de hiperestimulación ovárica severa. Se
procedió a la criopreservación de todos los zigotos obtenidos (protocolo
lento según Lasalle et al, 1985) y a la posterior descongelación el 2ª
día de la administración de la progesterona en ciclo de tratamiento
sustitutivo. Los zigotos que sobrevivieron a la descongelación se
cultivaron in vitro durante 44-48 horas (condiciones estándares) y se
realizó transferencia vaginal ecoguiada de 1 a 3 embriones previa
eclosión asistida mediante solución ácida de Tyrode. Medios de cultivo
Vitrolife.
MATERIAL Y MÉTODOS: Se seleccionaron retrospectivamente 26
pacientes estimuladas para ciclo de FIV en el período Marzo 2000-Julio
2005 y que presentaron riesgo de hiperestimulación ovárica severa. Se
procedió a la criopreservación de todos los zigotos obtenidos (protocolo
lento según Lasalle et al, 1985) y a la posterior descongelación el 2ª
día de la administración de la progesterona en ciclo de tratamiento
sustitutivo. Los zigotos que sobrevivieron a la descongelación se
cultivaron in vitro durante 44-48 horas (condiciones estándares) y se
realizó transferencia vaginal ecoguiada de 1 a 3 embriones previa
eclosión asistida mediante solución ácida de Tyrode. Medios de cultivo
Vitrolife.
XXVI Congreso Nacional de la Sociedad Española de Fertilidad. Zaragoza, 31 de Mayo- 2 de Junio de 2006

Viabilidad y potencial de implantación de los embrionesViabilidad y potencial de implantación de los embriones
multinucleados con ritmo óptimo de división en losmultinucleados con ritmo óptimo de división en los
primeros estadíos del desarrollo embrionarioprimeros estadíos del desarrollo embrionario
Introducción
La multinucleación se asocia a un desarrollo embrionario deficiente correlacionado con una baja tasa de implantación. Sin
embargo, la presencia de multinucleación también se observa en embriones con un desarrollo óptimo. Según la
clasificación embrionaria de ASEBIR, la mera presencia de multinucleación en un solo blastómero se penaliza clasificando
al embrión directamente en la categoría D. El objetivo del trabajo es investigar el impacto de la multinucleación cuando se
presenta como única anomalía, a través del análisis de la viabilidad y el potencial de implantación en embriones de
excelente desarrollo embrionario aunque con blastómeros multinucleados.
Se comparan las tasas de viabilidad y de implantación entre el grupo de embriones multinucleados (d+2-MNB) y el de
embriones no multinucleados (d+2-noMNB). La tasa de implantación se calcula respecto a los embriones transferidos en
transferencias con 100% de implantación, transferencias con 0% de implantación y transferencias homogéneas, en las que
todos los embriones transferidos muestran las mismas características.
Resultados
d+2-MNB (%) d+2-noMNB (%) Fisher exact test
Núm. embriones 152 12,9 1021 87,1
Embriones viables 57 37,5 722 70,7 P<0,0001
Embriones criopreservados 7 79
Embriones transferidos 50 643
Embr. en transfers homogéneos 40 550
Embriones implantados 8/40 20 159/550 28,9 NS
Conclusiones
1/. La sola presencia de algún blastómero multinucleado en embriones con características óptimas de
desarrollo determina una marcada disminución en la viabilidad de dichos embriones.
2/. Los embriones multinucleados viables que son transferidos poseen un potencial de implantación equivalente
al de los embriones no multinucleados, debido probablemente a la baja proporción de blastómeros
multinucleados.
3/. Deberíamos revisar la inclusión en la categoría D de los embriones con características óptimas de desarrollo
cuya única anomalía es la multinucleación en algún blastómero.
D+2-MNB : Embriones multinucleados en día+2
D+2-noMNB : Embriones no multinucleados en día+2
V Congreso ASEBIR. Valencia, 25-27 de noviembre de 2009
Pons MC.; Grossmann M.; Solvas I.; Noblom R.; Julve, X. y Nadal J.Pons MC.; Grossmann M.; Solvas I.; Noblom R.; Julve, X. y Nadal J.
Unitat de Reproducció Assistida. CENTRO MEDICO TEKNON. Barcelona.Unitat de Reproducció Assistida. CENTRO MEDICO TEKNON. Barcelona. ura@ura@cmteknon.comcmteknon.com
Material y métodos
Estudio retrospectivo. Período 2005-2008
515 ciclos de FIV. Edad de la mujer: 34,4 [20-47]
Observación división temprana: 26,6 hpi
1173 embriones estudiados: 323 proceden de FIV
convencional (27,5%) mientras que 805 (72,5%)
proceden de FIV-ICSI, en 533 debido a calidad seminal
baja (CSBaja) y en los 317 embriones debido a diversas
indicaciones (baja respuesta folicular, edad materna
avanzada, fallo de inseminación previo...) aunque con
calidad seminal normal (CSNormal)
43-4523-2917-20hpi
día+2día+1
Criterio de inclusión: Embriones con óptimo desarrollo embrionarioCriterio de inclusión: Embriones con óptimo desarrollo embrionario
división temprana y estadío de 4división temprana y estadío de 4-- ó 5ó 5--células en día +2células en día +2

La incidencia de multinucleación en embriones conLa incidencia de multinucleación en embriones con
óptimo desarrollo embrionario es superior tras FIVóptimo desarrollo embrionario es superior tras FIV--ICSIICSI
Material y métodos
Estudio retrospectivo. Período 2005-2008
515 ciclos de FIV. Edad de la mujer: 34,4 [20-47]
Observación división temprana: 26,6 hpi
1173 embriones estudiados: 323 proceden de FIV
convencional (27,5%) mientras que 805 (72,5%)
proceden de FIV-ICSI, en 533 debido a calidad seminal
baja (CSBaja) y en los 317 embriones debido a diversas
indicaciones (baja respuesta folicular, edad materna
avanzada, fallo de inseminación previo...) aunque
con calidad seminal normal (CSNormal)
Conclusiones
En esta población seleccionada de embriones:
1/. El aumento en la incidencia de multinucleación se atribuye a la técnica de ICSI per se
2/. La incidencia de multinucleación no se ve afectada por la calidad seminal
Pons MC.;Pons MC.; SolvasSolvas I.; Grossmann M.;I.; Grossmann M.; NoblomNoblom R.;R.; JulveJulve, X. y, X. y NadalNadal J.J.
UnitatUnitat dede ReproduccióReproducció AssistidaAssistida. CENTRO MEDICO TEKNON. Barcelona.. CENTRO MEDICO TEKNON. Barcelona. ura@cmteknon.comura@cmteknon.com
Núm. embriones
Núm. Embriones
con Blastómeros multinucleados
en día+2
%
11731173 152152 12,912,9
FIV convFIV conv 323323 2525 7,77,7 aa cc dd
FIVFIV -- ICSIICSI 850850 127127 14,914,9 aa
FIVFIV--ICSIICSI–– CSBajaCSBaja 533533 7373 13,713,7 bb cc
FIVFIV--ICSIICSI--CSNormalCSNormal 317317 5454 1717 bb dd
La nucleación se ha valorado en día+2 para garantizar la correcta evaluación de la nucleación en cada uno de los
blastómeros a pesar que las transferencias se realizaron en día+3.
Se analiza la incidencia de multinucleación en día+2 según la técnica de fecundación y según la calidad seminal. Análisis
estadístico: Fisher exact test, P<0,001 .
día+1 día+2
hpi 17-20 23-29 43-45
Criterio de inclusión: Embriones con óptimo desarrollo embrionarioCriterio de inclusión: Embriones con óptimo desarrollo embrionario
división temprana y estadío de 4división temprana y estadío de 4-- ó 5ó 5--células en día +2células en día +2
Resultados
De los 1173 embriones analizados, 152 presentan algún blastómero multinucleado en día+2 (12,9%). En la tabla se
muestra que la incidencia de multinucleación en embriones procedentes de FIV-ICSI es significativamente superior
(14,9%) a la observada en embriones procedentes de FIV convencional (7,7%). Por otro lado, al analizar la incidencia de
multinucleación en los 2 subgrupos de FIV-ICSI no se observan diferencias entre ambos (13,7% en CSBaja y 17% en
CSNormal). Sin embargo al comparar la incidencia entre el grupo de FIV convencional y cada subgrupo de FIV-ICSI sí se
encuentran diferencias significativas.
a: P=0,0009 b: ns c: P=0,0078 d: P=0,0004
Introducción
Ante el incremento de ciclos de FIV-ICSI sin causa masculina evidente y de la importancia que tiene la multinucleación en
la viabilidad embrionaria, el objetivo del trabajo es investigar, en embriones con óptimo desarrollo embrionario, la
incidencia de multinucleación en función de la técnica de fecundación utilizada y la calidad seminal.

TÉCNICA DE RESCATE DE ICSI EN DÍA +1 POR FALLOTÉCNICA DE RESCATE DE ICSI EN DÍA +1 POR FALLO
TOTAL DE LA FECUNDACIÓN MEDIANTE INSEMINACIÓNTOTAL DE LA FECUNDACIÓN MEDIANTE INSEMINACIÓN
INTRODUCCIÓN
Definimos “fallo total de fecundación” como aquella situación en la que ninguno de los ovocitos maduros muestra
signos de fecundación normal (2CP 2PN) entre las 17 y las 20h post-inseminación.
MATERIAL y MÉTODOS
Cuando detectamos fallo total de fecundación y la morfología ovocitaria lo permite, programamos ICSI de rescate
usando espermatozoides de la misma muestra con la que se inseminó el día anterior. En los dos primeros años (años
2000 y 2001) la microinjección espermática se realizaba lo antes posible (p.ej. 20 horas post-inseminación) aunque
después modificamos este esquema y realizamos ICSI unas 24 horas post-inseminación.
Los embriones con 2CP-2PN después de ICSI en día+1 se cultivaron 24h en medio G1 (Vitrolife), se seleccionaron los
de mejor desarrollo, a los que se practicó eclosión asistida mediante solución ácida de Tyrode inmediatamente antes
de la transferencia ecoguiada.
Se revisan, retrospectivamente, todos los ciclos de FIV convencional con espermatozoides propios y con fallo total de
fecundación entre el año 2000 y la actualidad. Excluimos aquellos casos que presentan fecundaciones anómalas (1PN,
3PN o >3PN) o sólo indicio de fecundación (2CP).
CONCLUSIONES
1/. Aunque las tasas de implantación y gestación evolutiva son significativamente inferiores a las globales en nuestro
centro, el protocolo de ICSI en día+1 se demuestra como una buena herramienta de rescate.
2/. El éxito de esta técnica depende de la rigurosa selección de los ovocitos no fecundados que serán micrinyectados
en día+1 y es un indicador pronóstico para ciclos posteriores.
3/. A pesar de que en la literatura científica existe cierta preocupación por el riego de esta técnica de rescate sobre las
anomalías cromosómicas, todos los nacimientos comunicados hasta la fecha son normales.
RESULTADOS
Los ciclos con fallo total de fecundación por inseminación fueron 20 (un 1,9% de los 1071 ciclos de FIV convencional
iniciados) repartidos equilibradamente a lo largo de los años. Los resultados de los 18 casos en los que se realizó ICSI
en día +1 se muestran a continuación:
núm. casos ICSI d+1 18
núm. ovocitos microinyectados 121
núm. Zigotos 2PN 90
tasa fecundación 74,3 %
núm. transferencias 17
núm. embriones transferidos 40
media embriones transferidos 2,3
núm. b-hCG+ 6
núm. embarazos bioquímicos 2
núm. embarazos ectópicos 1
núm. abortos (1r trimestre) 1
núm. gestaciones evolutivas 2
tasa gestación/transferencia 11,8 %
tasa implantación 10 %
núm. niños nacidos 2
Unitat de Reproducció Assistida. CENTRO MEDICO TEKNON. Barcelona.
URA@cmteknon.com
Grossmann M; Pons MC; Solvas I; Noblom R; Castellanos E; Unzueta J y Nadal J.

Efecto de la multinucleación en división temprana
en el potencial de implantación de embriones con
ritmo óptimo de división
Pons MC.; Grossmann M.; Solvas I.; Noblom R.; Julve, X. y Nadal J.
Unitat de Reproducció Assistida. CENTRO MEDICO TEKNON. Barcelona. ura@cmteknon.com
INTRODUCCIÓN
Tanto la clasificación ASEBIR 2007 como el reciente trabajo del grupo de consenso en clasificación embrionaria (Alpha-
ESHRE) penalizan fuertemente aquellos embriones que presenten algún blastómero multinucleado.
En un trabajo previo habíamos estudiado la incidencia de multinucleación en división temprana (DT) y observamos que la
multinucleación detectada en este estadio es un fenómeno temporal que en día+2 desaparecía en el 75% de los
embriones, aunque desconocíamos su significado clínico-biológico.
El objetivo del presente trabajo será valorar el efecto de la multinucleación en DT en el potencial de implantación de estos
embriones (no multinucleados en día+2) comparando, los que presentaban multinucleación en DT frente a los que no la
presentaban.
MATERIAL Y MÉTODOS
RESULTADOS
De los 1490 embriones analizados, la incidencia de multinucleación en DT es del 17%, se observa en 256 embriones.
DT-no MNB DT- MNB n
1234 256 1490
Día+2-no MNB 1121 175 1296
Día+2- MNB 113 81 194
Corroborando nuestro estudio previo, en día+2 detectamos el fenómeno de reversión: no se observa presencia de
multinucleación en 175 (68,3 %) de los 256 embriones que sí la presentaban en DT y, lo que es más sorprendente, en 123
de ellos podemos constatar la presencia de un único núcleo en cada blastómero (48%).
Comparando la tasa de implantación cuando se estudian transferencias homogéneas no se observan diferencias
significativas entre los dos grupos estudiados (DT-no MNB vs DT- MNB).
Periodo: 2005-2010. 675 ciclos de FIV.
Observación DT: 26,2 hpi [rango: 23-29]
Edad de la mujer: 34,6 años [rango: 20-47]
DT-no MNB DT- MNB
Día+2-no MNB 1121 175
Embriones descartados 230 (20%) 49 (28%) ns
Embriones en transferencias homogéneas 554 47
Implantación evolutiva 165 (29,8%)% 9 (19,1%) ns
CONCLUSIONES
1/ Se confirma que la multinucleación detectada en DT es un fenómeno temporal y reversible.
2/ La multinucleación en DT no afecta negativamente a la tasa de implantación de los embriones con ritmo optimo de
división (embriones en los que no observamos multinucleación en día+2).
Análisis retrospectivo de la nucleación de 1490 embriones que presentaron división temprana y ritmo óptimo de división,
es decir 4- ó 5-células en día+2.
43-4523-2917-20hpi
día+2día+1
Evaluamos la tasa de implantación a partir de transferencias con
0% y 100% implantación.
Análisis estadístico: χ2test, P<0,01.
VI Congreso ASEBIR. Girona, 5-7 de octubre de 2011

VII Congreso ASEBIR. Sevilla, 20-22 de noviembre de 2013

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