Este documento describe el proceso de transferencia de embriones, incluyendo la superovulación de las vacas donantes, la recolección y selección de embriones, y la transferencia a vacas receptoras. Explica los protocolos de sincronización usados en donantes y receptoras, así como los requisitos para seleccionar ambos tipos de vacas. Finalmente, resume los posibles resultados finales de obtener terneros nacidos de este proceso.
2. TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
La transferencia comercial de embriones en Norteamérica se desarrolló a principios de los
años setenta con la introducción de razas continentales. En los últimos 30 años la
aplicación de esta tecnología ha ido en aumento (especialmente en el ganado lechero)
En el mundo, más de 121.000 donantes son superovuladas y más de 670.000 embriones
transferidos.
En 1890 Heape realizó la primera transferencia embrionaria en conejo. Berry y Warwick
1949 transferencia embrionaria en borregos y cabras. Kvansnickii 1951 en cerdos. Willet et
al., 1951 primera transferencia en bovinos
3. CONCEPTO
Técnica que consiste en recoger los embriones de una hembra donante y transferirlos al
útero de las hembras receptoras (donde se realizará la gestación).
Se inicia con una estimulación hormonal de la función ovárica en la hembra donante,
para producir una ovulación múltiple.
La hembra es inseminada en el momento apropiado y luego se deja a los embriones
desarrollarse en el oviducto y útero de la hembra donante
Hasta que se recogen mediante lavado uterino a los siete días
4. OBJETIVOS
El principal objetivo de esta técnica es la conservación de genes maternos de animales
de gran valor genético
Además de la producción de más de una cría al año de una sola madre
Facilita al mejoramiento genético con el consecuente incremento de la producción de
materias primas como son leche y carne.
5. REQUISITOS
Realizar el registro de los animales.
Seleccionar a las hembras donantes, a las receptoras y al macho reproductor.
Sincronización de donadoras y receptoras.
Superovulación de donadoras.
Detección de celo en donadoras y receptoras
Monta o inseminación artificial a donadoras
Lavado embrionario de donadoras
Transferencia embrionaria a receptoras
Cuidados postoperatorios
Diagnóstico de gestación
Cuidados durante la gestación
Cuidados durante el parto
6. VENTAJAS Y DESVENTAJAS
MAYOR NÚMERO DE DESCENDIENTES POR
HEMBRA
INVERSIÓN EN EQUIPOS, MATERIALES,
PRODUCTOS VETERINARIOS, CONTRATACIÓN
DE PERSONAL
DISMINUYE EL INTERVALO GENERACIONAL CONTRATACIÓN DE PERSONAL ESPECIALIZADO
RECUPERACIÓN DE HEMBRAS INFÉRTILES DE
ELEVADO VALOR GENÉTICO
MAYOR COSTO DE LOS PRODUCTOS
INTERCAMBIO MATERIAL GENÉTICO Promedio de aceptación de embriones por
parte de la hembra receptora 40-50%
AUMENTA EFICIENCIA DEL SEMEN
SE PUEDE UTILIZAR HEMBRAS RECEPTORAS DE
NO ELEVADO VALOR GENÉTICO
VENTAJAS DESVENTAJAS
7. INSTRUMENTAL
PARA RECOLECTAR LOS EMBRIONES
SE PUEDE UTILIZAR:
Sondas de recogida de 2 vías
Sondas de recogida de 3 vías
Sondas tipo Foley
Catéter extensible
Jeringas para lavado
Bolsa de lavado o PBS
Filtro para sonda Foley
PARA LA EVALUACIÓN Y
PREPARACIÓN DE LOS EMBRIONES:
Microscopio
Incubadora para ovocitos y
embriones
8. SELECCIÓN DE VACAS DONANTES
Son vacas élite y que son las donadoras de genética
• No presentar enfermedades hereditarias
• Tener excelente historial reproductivo y
salud
• Alto valor en el mercado
• Ciclos estrales regulares
• No tener enfermedades que afecten la
fertilidad
• No ser demasiado viejas
REQUISITOS QUE DEBE CUMPLIR:
9. PROTOCOLOS DE SUPEROVULACIÓN
FSH: El esquema estándar de las inyecciones para la SOV en vacas Holstein es el
siguiente: en total 36 mg de FSH, son inyectados en dosis
fraccionadas durante 4 días. La dosis óptima de FSH para la SOV es diferente según
la raza de la donadora. El intervalo entre las inyecciones AM y PM debe ser de 8 a 12
horas.
eCG: La FSH puede ser sustituida por eCG en el esquema anterior, aunque los
resultados tanto en la tasa de ovulación como en la calidad de los embriones son
menores que utilizando FSH. Usualmente 2000 a 4000 UI de eCG son administrados a la
donadora en los días 9 a 14 del ciclo estral
10. PROTOCOLOS DE SUPEROVULACIÓN
Día 0: implante intravaginal de 1,38 g de progesterona (P4; CIDR®), 2 mg de benzoato de
estradiol (BE; Gonadiol®) IM; y 100 mg de P4 (Gestavec®) IM.
Día 4: 40 mg de Folltropin® IM dos veces al día (6 am y 6 pm).
Día 5: 30 mg de FSH-p (Hormona Folículo Estimulante) IM dos veces al día (6 am y 6 pm).
Día 6: 20 mg de FSH-p y 0,5 mg de D-cloprostenol (Estrumate®) IM dos veces al día (6 am
y 6 pm); retirar el IV a las 6 pm.
Día 7: 10 mg de FSH-p/IM dos veces al día (6 am y 6 pm).
Día 8: inseminación artificial (IA) a las 6 am y 6 pm, Gonadorelina (GnRH; Fertagyl®) 500
ug/IM a las 6 am.
11. LAVADO O COLECTA DE EMBRIONES
Para realizar el lavado o colecta de embriones se utilizan sueros enriquecidos con
proteínas y nutrientes junto con medios de colecta, los cuales deben dar un confort al
embrión que es colectado.
Para realizar éste procedimiento, se utiliza una vía que es de circuito cerrado, de la
siguiente forma: Por uno de los catéteres hay que introducir el medio dentro del útero, y
por el otro se debe extraer el medio que fue preparado para colectar el líquido, que a su
vez es pasado por un filtro.
Este catéter tiene un cinto que deja pasar el medio que viene del útero, dejando
aprisionados los embriones que luego van a ser evaluados en laboratorio
12. SELECCIÓN O BÚSQUEDA DE EMBRIONES
El volumen de solución conteniendo los embriones (40-50 ml) se vuelca en 4-5 vidrios de
reloj o en 2-3 placas de Petri (de 130 mm de diámetro) con divisiones.
Para garantizar una completa observación visual de la superficie total de la placa, la
búsqueda deberá hacerse en forma de guarda griega, tanto en el sentido de las
abscisas como de las ordenadas
13. ESTADOS DE DESARROLLO EMBRIONARIO
Mórula temprana: Masa de al menos 16 blastómeras individuales difíciles de distinguir una
de la otra, la cual ocupa la mayor parte del espacio perivitelino
Mórula compacta: Blastómeras agrupadas formando una masa compacta que ocupa el
60 – 70% del espacio
14. ESTADOS DE DESARROLLO EMBRIONARIO
Blastocisto temprano: Las blastómeras organizadas se distienden formando un anillo con
una cavidad o blastocele para ocupar el 60 -70% del espacio perivitelino
Blastocisto: Dentro de la ZP se observan cambios bien diferenciados de la capa externa
del embrión o Trofoblasto y la Masa Celular Interna, más oscura y compacta. El
blastocele es más notorio y el embrión ocupa casi todo el espacio perivitelino
15. CALIDAD EMBRIONARIA
Excelente: Embrión esférico simétrico, con células de tamaño color y apariencia
uniforme, contenido embrionario fijo y ZP intacta.
Bueno: Presentan pequeñas imperfecciones como blastómeras extruidas, de menor
tamaño, forma irregular con algunas vesículas.
Regular: Los defectos son más definidos, con blastómeras extruidas, vesículas y células
degeneradas.
Malo: Las blastómeras extruidas son numerosas así como las células degeneradas de
diferentes tamaños, vesículas grandes y numerosas, aunque aparentemente se ve una
masa embrionable viable. Generalmente no son de calidad transferible
17. PREPARACIÓN DE EMBRIONES
Los embriones encontrados deberán ser transportados a una placa de Petri más
pequeña (3 mm) o a una placa de cuatro celdas Nunc, con medio enriquecido con
suero. Esta operación deberá repetirse a fin de "lavar" los embriones antes de la
transferencia o de la congelación
18. ENVASADO DE EMBRIONES
Este contenedor ha de estar muy bien cerrado, ya que si parte del nitrógeno líquido entra
en contacto con los embriones puede causar la muerte de estos por daños físicos. Estas
pajuelas son iguales que las que usamos en IA (0,25 o 0,50), a diferencia que al montarla
con el embrión, marcamos su localización en medio del líquido de congelación entre dos
burbujas de aire como lo podemos observar en el gráfico
19. CONGELACIÓN DE EMBRIONES
Debemos colocarlos en holding, una vez que ya se encuentran encapsulados en las
respectivas pajuelas, la temperatura se baja lentamente a una velocidad de 1-2ºC/min
hasta alcanzar la temperatura objetivo que ronda los -6ºC.
Luego se comienza a descender la temperatura de nuevo a una velocidad de 0,3 -
0,5ºC/min hasta alcanzar los -35ºC
Una vez aquí la pajuela con el embrión congelado está lista para ser sumergida en
nitrógeno líquido y ser conservada.
20. CONSERVACIÓN Y ALMACENAJE
Para minimizar los daños producidos por los embriones durante el enfriamiento de estos,
es importante que no se formen cristales de hielo, para lo cual deben ser deshidratados
parcialmente
Por lo que se ha desarrollado el empleo de los crioprotectores, sustancias que permiten la
deshidratación parcial de las células durante el proceso de criopreservación
21. SELECCIÓN DE VACAS RECEPTORAS
Son las encargadas de mantener al embrión transferido hasta el nacimiento
La receptora ideal es una vaca joven, libre de enfermedades, de probada fertilidad y
habilidad materna.
Además, debe tener un tamaño adecuado para no presentar problemas al parto.
Aunque la raza no es un factor importante, generalmente se acepta que las vacas
cruzadas tienen mayor fertilidad
22. PROTOCOLOS DE SINCRONIZACIÓN
(RECEPTORA)
Día cero. Se coloca un implante CDR + una dosis de 0.44cc. de Benzoato de Estradiol
(grafoleon IM) + 2 cc. Progesterona (Gestavec IM).
Dia 7. Retiramos el implante y administramos una dosis de 2cc PGF2α (Estrumate IM), +
2cc eCG (Folligon IM)
48 horas una dosis de 2.5cc GnRH
23. RESULTADO FINAL
Tal vez los resultados finales de una transferencia de embriones se vean recién una vez
que nacen los terneros, y luego cuando les llegue la edad de expresar su potencial
productivo, como por ejemplo al quedar preñadas, empezar a parir y obtener buenos
ejemplares