El documento proporciona información sobre técnicas para estudiar manchas de semen en casos de violación. Describe métodos para localizar la mancha, observar espermatozoides y detectar la presencia de fosfatasa ácida prostática, un marcador bioquímico del semen. El ensayo de orientación y confirmación con reactivos específicos puede evidenciar semen incluso cuando no haya espermatozoides visibles.
Este documento presenta un resumen de un artículo científico sobre el análisis toxicológico de cannabinoides en casos forenses. Describe los principales cannabinoides como el THC y CBD, y cómo se unen a los receptores cannabinoides en el cuerpo. Explica los métodos de detección de cannabinoides en muestras corporales como la orina y el cabello mediante cromatografía. También resume los protocolos de identificación y análisis de productos incautados que contienen cannabis.
Este documento describe diferentes métodos para identificar manchas de sangre, incluyendo reacciones catalíticas con peróxido de hidrógeno, pruebas con fenolftaleína, bencidina, verde de malaquita y piramidón, así como el uso del luminol. El objetivo es determinar si la mancha es sangre y, de ser así, su tipo, edad y origen, lo que ayuda a los investigadores a recolectar evidencia en escenas de crímenes.
Este capítulo describe los tóxicos volátiles y gaseosos más comunes que se analizan en un laboratorio de toxicología. Se clasifican los tóxicos en gaseosos, como el monóxido de carbono y cianhídrico, y volátiles, como alcoholes, cetonas y aldehídos. Se detalla el análisis de monóxido de carbono en sangre, incluyendo su mecanismo de toxicidad, métodos de detección espectroscópicos y ensayos cualitativos como la dilución
El documento trata sobre la intoxicación por plomo. El plomo es un metal pesado que se encuentra ampliamente en la corteza terrestre y forma parte de compuestos orgánicos e inorgánicos. La exposición al plomo puede ocurrir en ambientes industriales, domésticos o a través de la alimentación. La intoxicación aguda se presenta luego de una alta exposición respiratoria y puede ser mortal, mientras que la crónica o saturnismo es la forma más común y afecta principalmente el sistema nervioso y otros
Este informe proporciona los resultados del análisis de cuatro muestras de harina de plátano enviadas al Instituto de Nutrición de Centroamérica y Panamá (INCAP). Los análisis incluyeron la humedad, proteína, grasa, cenizas, carbohidratos, energía, potasio, sodio y vitamina C. Los resultados mostraron variaciones mínimas en la composición nutricional entre las muestras.
El plomo, uno de los metales pesados mas frecuentes en el entorno, afecta tanto organos variados de la economia, como sistemas enzimaticos, siendo una de las toxinas de mayor importancia en la actualidad
El documento introduce la toxicología, definiéndola como la ciencia que estudia los efectos adversos de los agentes químicos sobre los organismos vivos. Explica que la toxicología comprende el estudio de sustancias químicas tóxicas, sus mecanismos de acción, métodos de detección e identificación, evaluación de toxicidad, y formas de contrarrestar intoxicaciones. También resume la evolución histórica de la toxicología y sus orígenes en culturas antiguas, y describe sus principales ramas como la toxicología
Este documento presenta una guía de prácticas de toxicología y química legal con 20 procedimientos analíticos. Incluye la recepción de muestras, extracción de venenos fijos, determinación de sustancias volátiles, análisis de cannabinoides, fenotiacinas, barbitúricos y otros compuestos en muestras biológicas. El objetivo es proporcionar herramientas para realizar análisis toxicológicos que contribuyan al tratamiento médico y la investigación de intoxicaciones y del
Este documento presenta un resumen de un artículo científico sobre el análisis toxicológico de cannabinoides en casos forenses. Describe los principales cannabinoides como el THC y CBD, y cómo se unen a los receptores cannabinoides en el cuerpo. Explica los métodos de detección de cannabinoides en muestras corporales como la orina y el cabello mediante cromatografía. También resume los protocolos de identificación y análisis de productos incautados que contienen cannabis.
Este documento describe diferentes métodos para identificar manchas de sangre, incluyendo reacciones catalíticas con peróxido de hidrógeno, pruebas con fenolftaleína, bencidina, verde de malaquita y piramidón, así como el uso del luminol. El objetivo es determinar si la mancha es sangre y, de ser así, su tipo, edad y origen, lo que ayuda a los investigadores a recolectar evidencia en escenas de crímenes.
Este capítulo describe los tóxicos volátiles y gaseosos más comunes que se analizan en un laboratorio de toxicología. Se clasifican los tóxicos en gaseosos, como el monóxido de carbono y cianhídrico, y volátiles, como alcoholes, cetonas y aldehídos. Se detalla el análisis de monóxido de carbono en sangre, incluyendo su mecanismo de toxicidad, métodos de detección espectroscópicos y ensayos cualitativos como la dilución
El documento trata sobre la intoxicación por plomo. El plomo es un metal pesado que se encuentra ampliamente en la corteza terrestre y forma parte de compuestos orgánicos e inorgánicos. La exposición al plomo puede ocurrir en ambientes industriales, domésticos o a través de la alimentación. La intoxicación aguda se presenta luego de una alta exposición respiratoria y puede ser mortal, mientras que la crónica o saturnismo es la forma más común y afecta principalmente el sistema nervioso y otros
Este informe proporciona los resultados del análisis de cuatro muestras de harina de plátano enviadas al Instituto de Nutrición de Centroamérica y Panamá (INCAP). Los análisis incluyeron la humedad, proteína, grasa, cenizas, carbohidratos, energía, potasio, sodio y vitamina C. Los resultados mostraron variaciones mínimas en la composición nutricional entre las muestras.
El plomo, uno de los metales pesados mas frecuentes en el entorno, afecta tanto organos variados de la economia, como sistemas enzimaticos, siendo una de las toxinas de mayor importancia en la actualidad
El documento introduce la toxicología, definiéndola como la ciencia que estudia los efectos adversos de los agentes químicos sobre los organismos vivos. Explica que la toxicología comprende el estudio de sustancias químicas tóxicas, sus mecanismos de acción, métodos de detección e identificación, evaluación de toxicidad, y formas de contrarrestar intoxicaciones. También resume la evolución histórica de la toxicología y sus orígenes en culturas antiguas, y describe sus principales ramas como la toxicología
Este documento presenta una guía de prácticas de toxicología y química legal con 20 procedimientos analíticos. Incluye la recepción de muestras, extracción de venenos fijos, determinación de sustancias volátiles, análisis de cannabinoides, fenotiacinas, barbitúricos y otros compuestos en muestras biológicas. El objetivo es proporcionar herramientas para realizar análisis toxicológicos que contribuyan al tratamiento médico y la investigación de intoxicaciones y del
Este documento resume los métodos analíticos para detectar y cuantificar tóxicos volátiles como el metanol y el etanol en muestras biológicas. Describe la preparación de muestras, técnicas colorimétricas como el uso de ácido cromotrópico, y cromatografía de gases para el aislamiento y cuantificación de estas sustancias. El objetivo es detectar intoxicaciones por ingesta o exposición a estas sustancias en contextos forenses o laborales.
El documento describe varios experimentos realizados para identificar carbohidratos. Se explica que los carbohidratos incluyen azúcares, almidones y celulosas. Se clasifican los carbohidratos en monosacáridos, disacáridos, trisacáridos y polisacáridos. Se detallan pruebas como la de bencidina, anilina y reactivos de Tollens, Fehling y Benedict para identificar diferentes tipos de carbohidratos.
Este documento trata sobre los venenos volátiles como el etanol y el metanol. Explica las características, efectos y métodos de análisis de estos compuestos. Describe las vías de absorción, metabolismo y eliminación del etanol y cómo puede causar intoxicación aguda o crónica. También cubre los efectos teratogénicos del etanol y el síndrome de alcoholismo fetal. Finalmente, analiza las propiedades, intoxicación y tratamiento del metanol.
Este capítulo describe los tóxicos volátiles y gaseosos más comunes que se analizan en un laboratorio de toxicología. Se clasifican los tóxicos en gaseosos, como el monóxido de carbono y cianhídrico, y volátiles, como alcoholes, cetonas y aldehídos. Se detalla el análisis de monóxido de carbono en sangre, incluyendo su mecanismo de acción, consideraciones analíticas, toma de muestras y métodos de determinación como espectroscop
1) El documento describe los procedimientos para el estudio de manchas de sangre en un laboratorio forense, incluyendo la búsqueda, recolección y análisis de muestras. 2) Explica diversas reacciones químicas para determinar la presencia de sangre, como las reacciones de orientación y certeza, y técnicas como los cristales de Teichman y Takayama. 3) El análisis final incluye la determinación de la especie y tipificación a través de pruebas de grupo sanguíneo, iso
El documento describe la intoxicación por cloroformo, un líquido volátil e incoloro que se usa como disolvente industrial y de laboratorio. Se absorbe fácilmente a través de la piel, los pulmones o el tracto gastrointestinal y puede causar daño hepático, renal e irregularidades cardíacas. Su metabolismo produce especies reactivas de oxígeno y nitrógeno que causan estrés oxidativo y daño celular alterando los niveles de calcio. Aunque se usó como anestésico, hoy se recomienda sustituirlo
1. La cromatografía en capa fina es una técnica cromatográfica que utiliza una placa con una capa fina de fase estacionaria para separar los componentes de una mezcla. Se aplican las muestras a la placa y se sumerge en un eluyente que separa los componentes a medida que asciende por capilaridad.
2. Existen varios métodos para revelar la posición de los componentes separados en la placa, incluyendo reactivos químicos y lámparas de luz ultravioleta.
Este documento presenta información sobre el análisis de alcoholemia, incluyendo la fórmula de Widmark para calcular la concentración máxima de alcohol en la sangre, efectos progresivos del alcohol en diferentes niveles de alcoholemia, y tres casos para realizar análisis retrospectivos de alcoholemia.
Este documento proporciona instrucciones detalladas sobre cómo preparar y examinar un extendido de sangre periférica. Describe los pasos para obtener la muestra de sangre, preparar el extendido manualmente o de forma automatizada, teñirlo y examinarlo bajo el microscopio para realizar un recuento diferencial de leucocitos y plaquetas. El objetivo es producir un extendido de sangre de buena calidad para permitir un análisis hematológico preciso.
Los estudiantes realizaron una cromatografía en papel de pigmentos extraídos de espinacas y remolacha para identificar los diferentes pigmentos presentes. En las espinacas se identificaron clorofila B, clorofila A, xantofilas y caroteno. En la remolacha se identificó betanina. El proceso involucró la extracción de pigmentos con éter etílico, separación en una tira de papel de filtro mediante capilaridad y solvente, y observación de las bandas de color formadas.
separacion de fosfolipidos por cromatografia de capa finaIPN
Este documento describe dos técnicas para analizar lípidos en la yema de huevo. La primera es la cromatografía en capa fina para separar fosfolípidos, mostrando sus ventajas sobre la cromatografía en papel. La segunda es el método de Lieberman-Burchard para determinar la concentración de colesterol, basado en la reacción del colesterol con anhídrido acético y ácido sulfúrico para formar un complejo de color verde cuantificable. Se aplicaron ambos métodos para
Guia VII-VIII: Aislamiento, observación e identificación de hongos Alonso Custodio
Este documento describe las características de varios tipos de hongos, incluyendo su estructura, reproducción y factores de patogenicidad. Explica las diferencias entre hifas septadas y no septadas, y entre levaduras y hongos filamentosos. También proporciona detalles sobre medios de cultivo como el agar Sabouraud y sobre géneros específicos como Aspergillus, Sporothrix schenckii y Trichophyton.
Este documento describe los métodos analíticos para detectar drogas de cannabis y sus componentes en muestras de plantas, sangre, saliva y orina. Incluye detalles sobre análisis microscópicos de las plantas, ensayos presuntivos como las pruebas de Fast Blue y Duquenois-Levine, cromatografía en capa delgada, cromatografía gaseosa y métodos inmunológicos para detectar los canabinoides en diferentes fluidos biológicos y cuantificarlos.
Estructuras de reproducción sexual y asexual de hongos fitopatógenospublica
Este documento describe las características generales de los hongos fitopatógenos. Explica que los hongos son organismos eucariotas que no contienen clorofila y se reproducen mediante esporas producidas de forma asexual o sexual. Describe las estructuras básicas de los hongos como el micelio y las hifas, así como estructuras especializadas como los haustorios, rizomorfos, esclerocios y clamidosporas que les permiten sobrevivir en condiciones adversas. Finalmente, resume los tres
El documento describe las fuentes de exposición al plomo, su toxicocinética, fisiopatología, manifestaciones clínicas, diagnóstico y tratamiento. El plomo puede provenir de fuentes naturales como el desgaste geológico o volcánico, o fuentes humanas como baterías, gasolina y soldadura. Se absorbe por vía intestinal, respiratoria o dérmica y se distribuye principalmente en sangre, tejidos blandos y huesos, donde se acumula. Puede causar daño neuroló
El documento proporciona información sobre los tóxicos orgánicos fijos. Estos son compuestos orgánicos que no pueden ser aislados por destilación y deben extraerse usando disolventes. Se clasifican según su naturaleza ácida o alcalina e incluyen sustancias como marihuana, barbitúricos y plaguicidas de naturaleza ácida y benzenos y cumarinas de naturaleza alcalina. Su estudio es relevante para las ciencias forenses.
La historia de la toxicología se remonta a la antigüedad, cuando se utilizaron venenos en armas de caza. En papiros egipcios de 1,700 a.C. se mencionan intoxicaciones por plomo, cannabis e adormidera. Hipócrates y Teofrasto estudiaron venenos vegetales. En la Edad Media, Avicena describió la intoxicación por opio y Maimónides tratamientos para picaduras de serpiente. Paracelso fue pionero en el concepto de dosis tóxica. En la Edad Moderna
Este documento describe una práctica de laboratorio sobre la intoxicación por ácido sulfúrico utilizando vísceras de pollo. La práctica incluyó la preparación de una muestra mediante el destilado de las vísceras, y luego la realización de reacciones de reconocimiento para identificar la presencia de ácido sulfúrico. Todas las reacciones mostraron resultados positivos a través de cambios de color característicos, confirmando la presencia de ácido sulfúrico en la muestra.
Este documento describe diferentes técnicas de siembra para cultivar microorganismos en un laboratorio de microbiología. Describe métodos como la siembra en placa, que incluye técnicas de siembra en superficie y en profundidad, y métodos para contar colonias como el recuento estándar en placa. También explica técnicas de recuento celular como el recuento microscópico directo y el uso de sistemas electrónicos. Finalmente, detalla procedimientos específicos como siembras en tubos, técn
Las dioxinas y furanos son compuestos químicos que se producen por combustión incompleta y son muy persistentes en el medio ambiente. Son cancerígenos y se bioacumulan en la cadena alimentaria, representando un riesgo para la salud humana. Se controlan limitando sus emisiones a la atmósfera, agua y suelo, y monitoreando estrictamente las fuentes como la incineración de residuos.
Este documento describe los métodos para analizar manchas de semen en casos de violación. Explica cómo localizar y observar las manchas y los espermatozoides bajo microscopio usando colorantes. También describe cómo detectar la fosfatasa ácida prostática, una enzima presente en el semen, aún si no se observan espermatozoides, para confirmar la presencia de semen. El documento provee detalles sobre preparación de reactivos y procedimientos para estudiar manchas de semen de manera efectiva en un laboratorio de toxicología.
ESPERMOGRAMA FISIOLOGIA DEL LIQUIDO SEMINAL.pptxAnaLarroza3
PPT SOBRE FISIOLOGIA DEL LIQUIDO SEMINAL, ANALISIS DEL SEMEN, FASE PRE ANALITICA, ANALITICA Y POS ANALITICA INCLUYENDO PARAMETROS ESTABLECIDOS POR EL MANUAL DE LA OMS EN SU 6ta EDICION
Este documento resume los métodos analíticos para detectar y cuantificar tóxicos volátiles como el metanol y el etanol en muestras biológicas. Describe la preparación de muestras, técnicas colorimétricas como el uso de ácido cromotrópico, y cromatografía de gases para el aislamiento y cuantificación de estas sustancias. El objetivo es detectar intoxicaciones por ingesta o exposición a estas sustancias en contextos forenses o laborales.
El documento describe varios experimentos realizados para identificar carbohidratos. Se explica que los carbohidratos incluyen azúcares, almidones y celulosas. Se clasifican los carbohidratos en monosacáridos, disacáridos, trisacáridos y polisacáridos. Se detallan pruebas como la de bencidina, anilina y reactivos de Tollens, Fehling y Benedict para identificar diferentes tipos de carbohidratos.
Este documento trata sobre los venenos volátiles como el etanol y el metanol. Explica las características, efectos y métodos de análisis de estos compuestos. Describe las vías de absorción, metabolismo y eliminación del etanol y cómo puede causar intoxicación aguda o crónica. También cubre los efectos teratogénicos del etanol y el síndrome de alcoholismo fetal. Finalmente, analiza las propiedades, intoxicación y tratamiento del metanol.
Este capítulo describe los tóxicos volátiles y gaseosos más comunes que se analizan en un laboratorio de toxicología. Se clasifican los tóxicos en gaseosos, como el monóxido de carbono y cianhídrico, y volátiles, como alcoholes, cetonas y aldehídos. Se detalla el análisis de monóxido de carbono en sangre, incluyendo su mecanismo de acción, consideraciones analíticas, toma de muestras y métodos de determinación como espectroscop
1) El documento describe los procedimientos para el estudio de manchas de sangre en un laboratorio forense, incluyendo la búsqueda, recolección y análisis de muestras. 2) Explica diversas reacciones químicas para determinar la presencia de sangre, como las reacciones de orientación y certeza, y técnicas como los cristales de Teichman y Takayama. 3) El análisis final incluye la determinación de la especie y tipificación a través de pruebas de grupo sanguíneo, iso
El documento describe la intoxicación por cloroformo, un líquido volátil e incoloro que se usa como disolvente industrial y de laboratorio. Se absorbe fácilmente a través de la piel, los pulmones o el tracto gastrointestinal y puede causar daño hepático, renal e irregularidades cardíacas. Su metabolismo produce especies reactivas de oxígeno y nitrógeno que causan estrés oxidativo y daño celular alterando los niveles de calcio. Aunque se usó como anestésico, hoy se recomienda sustituirlo
1. La cromatografía en capa fina es una técnica cromatográfica que utiliza una placa con una capa fina de fase estacionaria para separar los componentes de una mezcla. Se aplican las muestras a la placa y se sumerge en un eluyente que separa los componentes a medida que asciende por capilaridad.
2. Existen varios métodos para revelar la posición de los componentes separados en la placa, incluyendo reactivos químicos y lámparas de luz ultravioleta.
Este documento presenta información sobre el análisis de alcoholemia, incluyendo la fórmula de Widmark para calcular la concentración máxima de alcohol en la sangre, efectos progresivos del alcohol en diferentes niveles de alcoholemia, y tres casos para realizar análisis retrospectivos de alcoholemia.
Este documento proporciona instrucciones detalladas sobre cómo preparar y examinar un extendido de sangre periférica. Describe los pasos para obtener la muestra de sangre, preparar el extendido manualmente o de forma automatizada, teñirlo y examinarlo bajo el microscopio para realizar un recuento diferencial de leucocitos y plaquetas. El objetivo es producir un extendido de sangre de buena calidad para permitir un análisis hematológico preciso.
Los estudiantes realizaron una cromatografía en papel de pigmentos extraídos de espinacas y remolacha para identificar los diferentes pigmentos presentes. En las espinacas se identificaron clorofila B, clorofila A, xantofilas y caroteno. En la remolacha se identificó betanina. El proceso involucró la extracción de pigmentos con éter etílico, separación en una tira de papel de filtro mediante capilaridad y solvente, y observación de las bandas de color formadas.
separacion de fosfolipidos por cromatografia de capa finaIPN
Este documento describe dos técnicas para analizar lípidos en la yema de huevo. La primera es la cromatografía en capa fina para separar fosfolípidos, mostrando sus ventajas sobre la cromatografía en papel. La segunda es el método de Lieberman-Burchard para determinar la concentración de colesterol, basado en la reacción del colesterol con anhídrido acético y ácido sulfúrico para formar un complejo de color verde cuantificable. Se aplicaron ambos métodos para
Guia VII-VIII: Aislamiento, observación e identificación de hongos Alonso Custodio
Este documento describe las características de varios tipos de hongos, incluyendo su estructura, reproducción y factores de patogenicidad. Explica las diferencias entre hifas septadas y no septadas, y entre levaduras y hongos filamentosos. También proporciona detalles sobre medios de cultivo como el agar Sabouraud y sobre géneros específicos como Aspergillus, Sporothrix schenckii y Trichophyton.
Este documento describe los métodos analíticos para detectar drogas de cannabis y sus componentes en muestras de plantas, sangre, saliva y orina. Incluye detalles sobre análisis microscópicos de las plantas, ensayos presuntivos como las pruebas de Fast Blue y Duquenois-Levine, cromatografía en capa delgada, cromatografía gaseosa y métodos inmunológicos para detectar los canabinoides en diferentes fluidos biológicos y cuantificarlos.
Estructuras de reproducción sexual y asexual de hongos fitopatógenospublica
Este documento describe las características generales de los hongos fitopatógenos. Explica que los hongos son organismos eucariotas que no contienen clorofila y se reproducen mediante esporas producidas de forma asexual o sexual. Describe las estructuras básicas de los hongos como el micelio y las hifas, así como estructuras especializadas como los haustorios, rizomorfos, esclerocios y clamidosporas que les permiten sobrevivir en condiciones adversas. Finalmente, resume los tres
El documento describe las fuentes de exposición al plomo, su toxicocinética, fisiopatología, manifestaciones clínicas, diagnóstico y tratamiento. El plomo puede provenir de fuentes naturales como el desgaste geológico o volcánico, o fuentes humanas como baterías, gasolina y soldadura. Se absorbe por vía intestinal, respiratoria o dérmica y se distribuye principalmente en sangre, tejidos blandos y huesos, donde se acumula. Puede causar daño neuroló
El documento proporciona información sobre los tóxicos orgánicos fijos. Estos son compuestos orgánicos que no pueden ser aislados por destilación y deben extraerse usando disolventes. Se clasifican según su naturaleza ácida o alcalina e incluyen sustancias como marihuana, barbitúricos y plaguicidas de naturaleza ácida y benzenos y cumarinas de naturaleza alcalina. Su estudio es relevante para las ciencias forenses.
La historia de la toxicología se remonta a la antigüedad, cuando se utilizaron venenos en armas de caza. En papiros egipcios de 1,700 a.C. se mencionan intoxicaciones por plomo, cannabis e adormidera. Hipócrates y Teofrasto estudiaron venenos vegetales. En la Edad Media, Avicena describió la intoxicación por opio y Maimónides tratamientos para picaduras de serpiente. Paracelso fue pionero en el concepto de dosis tóxica. En la Edad Moderna
Este documento describe una práctica de laboratorio sobre la intoxicación por ácido sulfúrico utilizando vísceras de pollo. La práctica incluyó la preparación de una muestra mediante el destilado de las vísceras, y luego la realización de reacciones de reconocimiento para identificar la presencia de ácido sulfúrico. Todas las reacciones mostraron resultados positivos a través de cambios de color característicos, confirmando la presencia de ácido sulfúrico en la muestra.
Este documento describe diferentes técnicas de siembra para cultivar microorganismos en un laboratorio de microbiología. Describe métodos como la siembra en placa, que incluye técnicas de siembra en superficie y en profundidad, y métodos para contar colonias como el recuento estándar en placa. También explica técnicas de recuento celular como el recuento microscópico directo y el uso de sistemas electrónicos. Finalmente, detalla procedimientos específicos como siembras en tubos, técn
Las dioxinas y furanos son compuestos químicos que se producen por combustión incompleta y son muy persistentes en el medio ambiente. Son cancerígenos y se bioacumulan en la cadena alimentaria, representando un riesgo para la salud humana. Se controlan limitando sus emisiones a la atmósfera, agua y suelo, y monitoreando estrictamente las fuentes como la incineración de residuos.
Este documento describe los métodos para analizar manchas de semen en casos de violación. Explica cómo localizar y observar las manchas y los espermatozoides bajo microscopio usando colorantes. También describe cómo detectar la fosfatasa ácida prostática, una enzima presente en el semen, aún si no se observan espermatozoides, para confirmar la presencia de semen. El documento provee detalles sobre preparación de reactivos y procedimientos para estudiar manchas de semen de manera efectiva en un laboratorio de toxicología.
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PPT SOBRE FISIOLOGIA DEL LIQUIDO SEMINAL, ANALISIS DEL SEMEN, FASE PRE ANALITICA, ANALITICA Y POS ANALITICA INCLUYENDO PARAMETROS ESTABLECIDOS POR EL MANUAL DE LA OMS EN SU 6ta EDICION
Este documento describe el procedimiento para realizar un examen coprológico utilizando la técnica de Faust. Explica los materiales necesarios, las soluciones requeridas y los pasos a seguir para preparar y analizar una muestra fecal bajo el microscopio en busca de parásitos. Aunque los estudiantes no encontraron parásitos en su muestra, describen las ventajas y desafíos de esta técnica para el diagnóstico.
El documento describe los aspectos físicos, bioquímicos y microscópicos del análisis del semen humano. Se explican los parámetros normales a evaluar como volumen, pH, concentración y morfología de los espermatozoides, así como también la movilidad y vitalidad espermática. El análisis del semen proporciona información sobre la fertilidad masculina y puede detectar cualquier anomalía.
El documento describe un experimento para identificar las enzimas citocromo C y succinato deshidrogenasa en mitocondrias. Estas enzimas son marcadoras de la mitocondria. Se preparan tubos con diferentes combinaciones de succinato de sodio, cianuro de potasio y homogenado hepático. Luego se mide la absorción a 550 nm para identificar la presencia de citocromo C reducido, indicando la actividad de estas enzimas mitocondriales.
Este documento describe un experimento para medir el consumo de oxígeno durante la respiración de semillas de frijol y lombrices utilizando un dispositivo llamado respirómetro. Se colocaron semillas de frijol germinadas y lombrices dentro de matraces con una solución de hidróxido de sodio para absorber el dióxido de carbono producido. Se midió el avance de gotas de rojo congo a lo largo de tubos de vidrio a intervalos regulares, lo que permitió calcular la tasa de consumo de
- Directo o en fresco.
1. Obtén una muestra fresca de heces en un recipiente limpio y seco.
2. Utiliza un hisopo o una espátula limpia para tomar una pequeña porción de la muestra.
3. Coloca la muestra en un portaobjetos limpio y añade una gota de solución salina o agua destilada.
4. Cubre la muestra con un portaobjetos o una cubierta protectora.
5. Observa la muestra bajo el microscopio, utilizando diferentes aumentos para detectar parásitos móviles como Giardia o Trichomonas.
Este documento presenta las instrucciones para dos prácticas de laboratorio: microscopía y destilación por arrastre de vapor. La primera parte instruye a los estudiantes sobre cómo preparar y observar muestras vegetales bajo el microscopio, mientras que la segunda parte guía a los estudiantes en el proceso de destilación para extraer aceites esenciales de las mismas muestras vegetales. El documento incluye objetivos, materiales requeridos, procedimientos detallados y preguntas para cada práctica.
Este documento describe un experimento en el que se administró plomo a una rata por vía intraperitoneal para inducir intoxicación por plomo. La rata mostró síntomas como convulsiones, náuseas y vómitos antes de morir nueve minutos después. El experimento buscó identificar la presencia de plomo en los órganos a través de reacciones químicas como la de cromato de potasio, yoduro de potasio y difenil tio carbazina. El documento concluye que la sobredosis de plo
Este documento presenta las guías para dos prácticas de análisis clínicos. La primera práctica cubre la toma de muestras de varios líquidos biológicos como sangre y orina, y el reconocimiento de elementos en sangre fresca y teñida. La segunda práctica trata sobre el recuento de glóbulos rojos y la medición de hemoglobina en la sangre. El documento proporciona detalles sobre los procedimientos, materiales, cálculos y competencias requeridas para cada práctica.
Este documento proporciona instrucciones paso a paso para realizar un examen de heces. Describe los equipos necesarios y los procedimientos para el examen macroscópico e microscópico de las muestras, incluyendo métodos de extensión directa, sedimentación y flotación para detectar parásitos. El objetivo es analizar las heces para determinar la presencia de parásitos y ayudar a diagnosticar posibles enfermedades en animales.
Este documento describe un experimento sobre intoxicación por plomo en un cobayo. Se administró nitrato de plomo por vía intraperitoneal a un cobayo y se observó su muerte en 8 minutos, mostrando síntomas como desconcierto y convulsiones. Luego de diseccionar al cobayo, se realizaron pruebas como la de cromato de potasio que confirmaron la presencia de plomo. El documento concluye que el plomo es muy tóxico y letal e incluye recomendaciones sobre el uso de equipo de protección
Este documento presenta los resultados de un experimento sobre el efecto de la ósmosis en células de papa cuando se exponen a soluciones hipotónicas, isotónicas e hipertónicas. Se observó que en la solución hipotónica (agua destilada), la papa aumentó de masa debido a la entrada de agua. En la solución isotónica (NaCl al 1%), la masa de la papa se mantuvo constante. En la solución hipertónica (NaCl al 20%), la papa perdió masa debido a
Este documento presenta el protocolo para una práctica de laboratorio sobre la observación de muestras de medios de cultivo. El objetivo es aislar y identificar microorganismos presentes en muestras de secreción faríngea utilizando medios de cultivo como agar sangre y EMB. Se detalla el procedimiento para la siembra, incubación y observación de colonias, así como pruebas como la coloración de Gram, catalasa y coagulasa para identificar bacterias como Staphylococcus, Streptococcus y otros. El documento provee información sobre los
Este documento describe un experimento en el que se intoxicó a un cobayo con nitrato de plomo para observar los síntomas y tiempo de muerte. Se administraron 10 ml de solución de nitrato de plomo por vía intraperitoneal al cobayo, que murió en 8 minutos mostrando síntomas como desconcierto, ceguera y convulsiones. Luego se realizaron pruebas como la de cromato de potasio para confirmar la presencia de plomo en las vísceras del animal. El documento concluye que el plo
Este documento describe varios métodos para realizar exámenes coproparasitoscópicos cualitativos y cuantitativos. El objetivo es conocer la importancia del diagnóstico parasitario de laboratorio e identificar formas parasitarias mediante microscopía. Se explican en detalle los pasos, reactivos y materiales necesarios para métodos como flotación, sedimentación y concentración. Finalmente, se proporcionan características morfológicas de huevos de algunos parásitos comunes.
Actividad experimental 3 - Consumo de oxígeno durante la respiración de semil...Sophie Toscano
Práctica #3 acerca del consumo de oxígeno durante la respiración en diferentes casos (semillas de frijol y lombrices).
Realizada en el curso de biología IV, CCH Sur. (2018)
El documento describe un experimento en el que se intoxica a un cobayo con nitrato de plomo para determinar los efectos del envenenamiento por plomo. Se administró el nitrato de plomo al cobayo por vía intraperitoneal y se monitorearon los síntomas hasta la muerte del animal en 8 minutos. Luego, se extrajeron las vísceras y se realizaron pruebas químicas para identificar la presencia de plomo.
Práctica III:Consumo de oxígeno durante la respiración de semillas de frijol ...Fernanda Perez
Este documento describe un experimento para medir el consumo de oxígeno durante la respiración de semillas de frijol y lombrices utilizando un dispositivo llamado respirómetro. El experimento involucra colocar las semillas y lombrices en matraces con una solución de hidróxido de sodio y medir el desplazamiento de una gota de colorante a lo largo de un tubo de vidrio en intervalos de tiempo, lo que indica el consumo de oxígeno. Los resultados muestran que las semillas consumen oxígeno
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El documento habla sobre el análisis e interpretación de manchas de sangre encontradas en la escena de un crimen. Explica que estudiar la disposición y forma de las gotas de sangre puede ayudar a identificar al culpable y reconstruir la secuencia de eventos. También describe cómo factores como el ángulo de impacto, la superficie y la velocidad de las gotas pueden proveer información sobre lo sucedido. El cuidadoso estudio de las pruebas de sangre, junto con otras evidencias, es clave para esclarecer los crímen
El documento discute la extracción forzada de muestras biológicas de un acusado y si esto viola sus derechos constitucionales. Por un lado, obtener pruebas biológicas puede ayudar a descubrir la verdad, pero también puede afectar el derecho a la integridad física y la privacidad. Los peritos médicos solo deben extraer muestras con una orden judicial y usando métodos médicos seguros y éticos. No deben usar la fuerza física directa contra un acusado.
El documento describe las técnicas para el estudio de manchas de sangre en un laboratorio de toxicología. Explica los pasos para la búsqueda, recolección y estudio de las muestras, incluyendo reacciones de orientación como el ensayo de Adler, Pierre Medinger y Kastle-Meyer para determinar la presencia de sangre. También cubre la descripción de las muestras, reacciones de certeza, determinación de la especie y tipificación a través de grupos sanguíneos, isoenzimas, HLA y
El documento habla sobre las técnicas para el estudio de manchas de sangre en un laboratorio de toxicología. Describe la búsqueda y recolección de muestras de manchas de sangre y los pasos para su estudio en el laboratorio, incluyendo reacciones de orientación para determinar la posible presencia de sangre y reacciones de certeza. También explica técnicas como el uso de luminol para localizar manchas no visibles y métodos para la tipificación de la sangre como el grupo sanguíneo e isoenzimas.
El documento resume la evolución de los sistemas de identificación humana desde la Edad Media hasta la actualidad. Comenzó con los registros parroquiales y luego se desarrollaron métodos como la antropometría, el retrato hablado y los sistemas basados en las huellas dactilares y la genética. El método más efectivo resultó ser la dactiloscopia desarrollada por Juan Vucetich, basada en la comparación de las huellas digitales únicas de cada persona.
Este documento trata sobre la importancia de los fluidos corporales como evidencia en investigaciones criminales. Explica que los fluidos como sangre, semen y saliva pueden usarse para identificar a sospechosos mediante análisis de ADN. También provee recomendaciones para la recolección y envío de muestras de fluidos corporales de manera que se preserven para análisis. Finalmente, discute la importancia de identificar patrones de sangre para obtener información sobre un crimen.
El documento describe los procedimientos para el análisis y recolección de manchas en escenas del crimen. Explica que las manchas pueden proporcionar información sobre la posición y altura de donde cayeron y que deben ser fotografiadas y recolectadas cuidadosamente para preservar la evidencia. También describe cómo analizar las características de las manchas de sangre, semen u otras sustancias y los pasos para embalar y transportar muestras de manchas al laboratorio para su análisis.
Este documento describe los procedimientos involucrados en las pericias toxicológicas de alcoholes realizadas por una sección de un laboratorio forense. Explica el proceso completo desde el ingreso de la muestra hasta la elaboración del informe pericial, incluyendo la toma de muestras, análisis por cromatografía de gases, elaboración del borrador e informe final, y salida del informe al juzgado correspondiente.
El documento describe el humor vítreo como un fluido importante para la bioquímica clínica y las ciencias forenses. El humor vítreo ocupa la cavidad posterior del ojo y mantiene su transparencia. Es una muestra indispensable en investigaciones de muertes sospechosas o violentas, ya que su ubicación estéril permite determinar la ingesta de drogas y alcohol. El humor vítreo también puede usarse para medir drogas, estimar el intervalo post mortem, y detectar diabetes u otras condiciones.
Este documento presenta un estudio sobre la variación de la concentración de alcohol etílico en cadáveres en relación al tiempo. Se tomaron muestras de sangre de 42 cadáveres en cuatro momentos diferentes para determinar la concentración de alcohol etílico mediante cromatografía de gases. Los resultados mostraron que la relación de concentración de alcohol no tiene una correlación significativa con el tiempo, por lo que no se debe usar fórmulas matemáticas para aproximar las concentraciones de alcohol en el momento de la muerte a efectos legales.
Capítulo 11- Manual de Toxicología. Leda Giannuzzi-Luis Alberto Ferrari
1. Manual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología
195
Capítulo 11
Manchas de Semen
Autor:
Dr. Rodolfo Nieto, Perito del Laboratorio de Toxicología y Química Legal de la Asesoría Pericial
dependiente del Poder Judicial de la Provincia de Buenos Aires.
Introducción
En los casos de violación es común contar con muestras de semen secas asentadas
sobre diversos soportes, o bien hisopados obtenidos de la víctima. A su vez, este tipo de delitos
sexuales, constituyen un grupo de hechos sumamente difíciles de comprobar, de allí, que el
procesamiento de los materiales citados adquiera gran importancia ya que con las técnicas
actuales podría demostrarse de manera fehaciente la intervención de un determinado individuo.
Se define el esperma como un líquido compuesto por dos fracciones, el líquido seminal y
los espermatozoides, revistiendo ambos gran importancia desde el punto de vista pericial.
En el primero encontramos bases orgánicas tales como la colina, la espermina y la
espermidina, sustancia este última a la cual debe su olor el esperma. También posee en su
composición proteínas entre las cuales se pueden mencionar, por su importancia, la fosfatasa
ácida prostática, el antígeno prostático específico (PSA), la fosfoglucomutasa (PGM), peptidasa A
(Pep A) y la Glioxilasa I (Glo I). Debe mencionarse también la presencia de sustancias similares a
los antígenos del sistema ABO, los cuales estarán presentes en aquellos individuos secretores y
que permitirán la determinación del mismo en este fluido. En tal sentido, se conoce que entre el 75
y el 80% de la población tiene esta característica y, por lo tanto, todos sus fluidos corporales
contienen este tipo de sustancias.
11.1 Estudio de las manchas de semen
Un modo práctico para el estudio de las manchas de semen es el que se detalla en el
siguiente cuadro:
Visual
Localización Táctil
U.V.
¼ de hisopo o ½ cm2
de mancha Mancha o hisopo
+ 250 l de Solución Fisiológica
visualización de espermetazoides
centrifugar a bajas revoluciones (2.000 rpm)
ABO
Sobrenadante Pellet
Fosfatasa ácida (AP) Observación microscópica PGM – Pep A
PSA
11.2 Localización de la mancha
Las manchas de semen pueden presentarse sobre diversos soportes pero, los más
comunes son la ropa interior de la víctima y las prendas de cama. Un dato a tener en cuenta
serán las características del material a examinar, entre las cuales se destaca la capacidad de
absorción del mismo, su color, etc.
2. Manual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología
196
De todos modos, en general, puede decirse que las manchas de semen presentan un
color blanco grisáceo que va tornando hacia el amarillento con el paso del tiempo, adquiriendo,
en especial sobre las telas, una consistencia apergaminada, característica que resulta de
utilidad para su ubicación por medio del tacto. El empleo de luz U.V. constituía un método
práctico para localizar este tipo de manchas, pero los daños que ésta puede causar al material
genético ha hecho que caiga en desuso. La misma se basaba en la propiedad fluorescente de
las manchas de esta clase.
11.3 Observación de Espermatozoides
La visualización de espermatozoides completos constituye, por sí sola, la única prueba
irrefutable de la presencia de semen en una mancha.
De allí que, previo a detallar las técnicas a emplear para tal fin, es importante repasar
someramente su estructura. Los espermatozoides son células móviles compuestos
básicamente por cabeza (en la cual se encuentra el núcleo), cuello, cuerpo y cola. Su longitud
oscila entre 40 y 50 m, mientras que con respecto a su forma la cabeza, vista de frente, es
oval, mientras que de perfil es aguzada (Fig. 11.1).
Fig. 11.1: espermatozoide
Para su estudio, tal como puede verse en el esquema precedente, hay dos
posibilidades. Una de ellas es trabajar directamente sobre el material motivo de pericia y la otra
sobre el pellet obtenido en la centrifugación de un macerado en solución fisiológica de la
mancha a estudiar. Cualesquiera sea la metodología empleada, un hecho para tener en cuenta
es que los espermatozoides son elementos sumamente lábiles, de modo tal que la cabeza y la
cola se separan muy fácilmente. De allí que múltiples factores que hacen a la conservación de
la muestra dificultan, cuando no imposibilitan, la observación de estos elementos en forma
completa. Paralelamente, esto implica un sumo cuidado en el procesamiento del material a
estudiar.
Por otra parte debe tenerse en cuenta que ciertas enfermedades afectan, de forma
diversa, la cantidad de espermatozoides que produce un individuo. Así, en la oligozoospermia,
su concentración está disminuída, mientras que en la azoospermia no se encuentran presentes
en el semen.
Visualización directa: para tal fin, un trocito de la mancha en estudio se coloca en
el centro de un portaobjetos, adicionando sobre el mismo una gota de solución
fisiológica y otra de una solución al 0,5% de eritrosina en NH3 al 5% y se
comprime el material con ayuda de dos agujas de disección, con el objeto que los
componentes de la mancha pasen a la solución. Luego se retira la muestra, se
coloca un cubreojetos y se observa al microscopio con ocular de 40X. Los
espermatozoides se verán con la cabeza teñida de color rosa.
Visualización previa centrifugación: en este caso, y tal como se indica en el
esquema, se emplea el sedimento de la centrifugación de un macerado de la
mancha en solución fisiológica.
3. Manual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología
197
Para tal fin, ¼ de un hisopo o un cuadrado de 0,5 cm de lado de tela manchada se
coloca en un tubo de centrífuga al cual se adicionan 250 l de solución fisiológica. Luego, con
sumo cuidado, se presiona el material contra las paredes del tubo con ayuda de una varilla de
vidrio a fin que el material presente en el mismo pase a la solución.
Posteriormente, de retira el material presionando de modo tal que escurra el líquido casi
en su totalidad. Luego se centrifuga a baja velocidad (1.500 a 2.000 rpm) durante 3 a 5
minutos. El sobrenadante se transfiere con sumo cuidado a otro tubo y sobre el sedimento se
procede a investigar la presencia de espermatozoides, previa resuspensión del mismo agitando
suavemente, empleando la coloración descripta precedentemente.
En ese sentido, diversas son las técnicas que pueden utilizarse, siendo una de ellas la
desarrollada por I.C. Stone.
Para ello se prepara las siguientes soluciones:
a) Solución Kernechtrot; disolver 5g de Al2 (SO4 )3 (grado analítico) en 100 ml de agua
destilada hirviendo. Inmediatamente adicionar 0,1g de Nuclear Fast Red y agitar con
ayuda de una varilla de vidrio. Enfriar y filtrar a través de papel de filtro. Esta solución es
estable de 3 a 6 meses a 8ºC.
b) Solución picroindigocarmín (PICS); adicionar 4g de ácido pícrico (grado analítico). a 300
ml de agua destilada, en un vaso de precipitado Tapar el recipiente y dejar durante toda
la noche a temperatura ambiente a fin de obtener una solución saturada. Luego disolver
1g de Índigo-carmín, filtrar y guardar. Unos pocos cristales de ácido pícrico pueden
permanecer en la solución.
Procedimiento: una gota del pellet se coloca en un portaobjetos y se adiciona sobre ésta una
gota de solución a). dejando 15 minutos debajo de un vaso de precipitado adecuado (600 ml)
invertido. A continuación, con una pipeta limpia adicionar en un lateral del portaobjetos 1 – 2
gotas de agua deionizada de modo tal que no toque la mezcla. Inclinar con cuidado el
portaobjetos y quitar el excedente con papel de filtro. No tocar el área original de la gota
muestra con el papel. Repetir esta operación hasta que el agua de lavado resulte incolora.
Luego, agregar una gota de la solución b) sobre el sector donde se había colocado la
muestra y emplear la misma técnica de lavado descripta anteriormente, pero empleando etanol
absoluto. Al observar al microscopio, los espermatozoides se visualizarán teñidos de la
siguiente manera: la cabeza de color rojo, la parte central roja y verde y la cola de color verde.
De existir células de la mucosa se observarán teñidas de color azul con su centro rojo.
En muestras mal conservadas los espermatozoides pueden aparecer pálidos o
descoloridos e, inclusive, de una tonalidad verdosa o violeta. Debe tenerse presente que éste
fenómeno también puede ocurrir en casos de sobrecoloración con la solución b).
Si los espermatozoides no se observan completos, el autor refiere que pueden
reconocerse las colas, aunque debe recordarse aquí la importancia, por el grado de certeza, de
observar estos elementos completos. Una variante más sencilla de realizar esta técnica es la
siguiente: una gota del sedimento se fija a un portabjetos mediante la acción del calor (30
minutos a 60ºC).
Luego, cubrir el preparado con una gota de Nuclear Fast Red y dejar al menos 10
minutos. Lavar con agua destilada. A continuación, adicionar una gota de picroindigocarmín y
rotar el preparado durante 15 – 30 segundos (pero no más). Lavar con etanol, secar y observar
a 400X, usando aceite de inmersión de ser necesario.
Otras metodologías a emplear serían Papanicolau, May Grünwald – Giemsa, azul de
Loeffler, etc. Cualesquiera fuera la metodología empleada, se coloca una gota del sedimento
en un portaobjetos, se hace un extendido y se lo deja secar al aire, pudiendo recurrir
eventualmente y con precaución, a una fijación con ayuda de calor muy suave.
11.4 Fosfatasa ácida prostática
Como hemos dicho anteriormente, los espermatozoides son elementos sumamente
lábiles, motivo por el cual en los Laboratorios Forenses resulta muy frecuente no poder
observarlos completos. A este hecho debe sumarse que, tal como se mencionó anteriormente,
diferentes patologías pueden disminuir su número e incluso estar ausentes en el fluido seminal.
Es en estos casos cuando evidenciar la presencia de semen se torna más dificultosa
aunque, diversos marcadores, permiten arribar con un grado de certeza muy importante a tal
4. Manual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología
198
objetivo. Para tal fin se debe demostrar en la mancha la existencia de componentes habituales
del plasma seminal, tales como colina, espermina, fosfatasa ácida prostática (FAP) y el
antígeno prostático específico (PSA), siendo los dos últimos los más empleados hoy en día.
Para ello, se puede trabajar con el sobrenadante de la centrifugación o bien con el
líquido obtenido luego de adicionar al material en estudio solución fisiológica. La primera
alternativa posee como ventaja la “limpieza” de la solución a emplear.
La FAP es una enzima presente en el semen en concentraciones tan elevadas como en
ningún otro fluido biológico. Si bien es cierto que la misma no se encuentra exclusivamente en
dicho fluido, la característica enunciada sumado a que es inhibida por el ácido L (+) tartárico,
han permitido el desarrollo de técnicas destinadas a su investigación.
Una de ellas es la de Sivaram la cual por su practicidad, rapidez, sencillez y la posibilidad
de realizar varios ensayos simultáneamente, resulta de suma utilidad para el estudio de esta
enzima.
Los reactivos a emplear son los siguientes:
Buffer citrato- cítrico pH 4,9: disolver 1,89 g de ácido cítrico monohidrato en 50 ml de
H2O destilada. Adicionar a la solución resultante 18ml de NaOH 1 N y 10 ml de HCl 0.1 N,
ajustando el pH a 4,9. Completar a 100 ml y conservar en heladera.
Tartrato de Sodio 0,4 M: disolver 0.6g de ácido L (+) tartárico en 5 ml de agua
destilada y luego adicionar 3.5 ml de NaOH 2 N. Ajustar el pH a 4.9 y completar el volumen a
10 ml con agua destilada. Conservar en heladera.
Los reactivos siguientes se deben preparar en el momento de usar:
Reactivo I: alfa-naftil fosfato disódico (5 mg) se disuelven en 5 ml de buffer citrato y a
continuación se le adicionan 5 mg de Fast Blue B. Disolver.
Reactivo II: 5 mg de alfa-naftil fosfato disódico se disuelven en 4,5 ml de buffer citrato y
0,5 ml de tartrato 0,4 M, adicionando, a continuación, 5mg de Fast Blue B.
Observar que la diferencia entre los dos últimos reactivos consiste en la presencia del
inhibidor en el segundo de ellos.
11.4.1 Ensayo de orientación
El mismo tiene como utilidad descartar, o no, la presencia de la enzima en el material en
estudio. Para su realización, la mancha se comprime con un papel de filtro húmedo y se
adiciona sobre el mismo gotas del reactivo I que de ser positivo, se observa en forma
prácticamente inmediata, la aparición de un color púrpura.
Es aconsejable la realización de un ensayo en blanco empleando para tal fin un sector no
manchado del material en estudio. El mismo tiene por objeto descartar la presencia de
interferencias.
11.4.2 Ensayo de confirmación
En caso de obtener resultado positivo en el ensayo precedente, se procede a efectuar la
prueba definitiva, la cual se realiza de la siguiente manera: en el primer pocillo de una
policubeta de Kline se coloca una gota de solución obtenida de modo similar a aquella del
material en estudio, pero empleando una zona del mismo no maculada (blanco).
En los dos pocillos contiguos adicionar una gota del macerado o sobrenadante en estudio (ver
fig. 11.2)
5. Manual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología
199
Fig.11.2 1 gota blanco 1 gota muestra problema
Posteriormente, se adiciona a los dos primeros pocillos una gota del Reactivo I y, al
tercero, una gota del Reactivo II. Al cabo de un minuto, aproximadamente, deberá observarse
la aparición de un color púrpura en el segundo pocillo, permaneciendo inalterables los otros
dos en caso de una reacción positiva, mientras que de ser negativa no se observará la
aparición de dicha tonalidad. Eventualmente, puede apreciarse una cierta tonalidad en el
tercer pocillo, pero su intensidad deberá ser considerablemente menor que aquella del primero.
Este hecho se debe a que la concentración de la enzima presente es muy elevada y por lo
tanto, rebasa la capacidad inhibitoria de ácido L (+) tartárico. De todos modos, el primer pocillo
deberá permanecer siempre inalterable, ya que la aparición de color indicará la presencia de
algún tipo de interferencia originado en el soporte de la mancha.
11.5 Antígeno Prostático Específico (PSA)
Este marcador consiste en una glicoproteína intracelular (PM 34.000 dalton), sintetizada
exclusivamente por la glándula prostática, siendo, por lo tanto un componente normal del
plasma seminal.
Para su estudio pueden emplearse diferentes metodologías, entre las cuales el kit
comercial “PSA-check 1” provisto por la firma Veda-lab ofrece muy buenos resultados, siendo
además un método práctico y rápido.
Se trata de un ensayo inmunocromatográfico, el cual emplea una única combinación de
conjugado colorante-anticuerpo monoclonal y anticuerpo policlonal en fase sólida, permitiendo
así identificar el antígeno con un aceptable grado de sensibilidad (límite de detección 4 mg/ml).
De este modo, el antígeno se combina con el anticuerpo monoclonal, fluye por la placa
por capilaridad y se combina con los anticuerpos anti-PSA fijos, originando un complejo
coloreado visualizado en forma de banda, que indicará una reacción positiva.
Técnica: 5 gotas (aproximadamente 250l) del macerado de la mancha o del
sobrenadante se dejan caer en el sector de la placa destinado a tal efecto, se deja unos 10
minutos y luego se lee el resultado. La aparición de dos bandas de color indicarán una reacción
positiva mientras que la aparición de una sola banda indicará un resultado negativo (fig.11.3).
Sector agregado macerado banda control banda que indica presencia de PSA
Fig. 11.3: determinación por inmunocromatografía de PSA (Veda-lab)
La banda control debe observarse en todos los casos, ya que de no ser así, indica la
existencia de algún inconveniente, siendo aconsejable repetir la prueba empleando otra placa.
6. Manual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología
200
Electroforesis empleando anti-P30:
La proteína P30 es una glicoproteína característica del semen y cuyas características
coinciden, exactamente, con aquellas del antígeno prostático específico, no obstante lo cual
será designada con el nombre de la técnica original.
El antisuero empleado, anti-P30 provisto por los Laboratorios SERI, es específico de
P30 y no muestra reacción cruzada con ningún otro fluido corporal. Este reacciona con máxima
sensibilidad (semen diluido 1:3.000) usando la técnica de cross-over y de allí que sea la misma
la aconsejada.
Un hecho a tener en cuenta, es que la proteína a investigar está formada por cuatro
fracciones y se requiere, por lo tanto, una correcta combinación de los valores de endosmosis y
pH para que las mismas permanezcan unidas.
Reactivos:
Buffer de corrida: disolver 25,2 g de Tris base más 2,5 g de EDTA (libre de ácido) y 1,9
g ácido bórico en 1 litro de agua destilada. Ajustar a pH 9,1 con solución de NaOH al
20%.
Buffer Gel: Idem buffer de corrida.
Gel de Agarosa 1%: disolver 0,08g de Agarosa en 8ml de Buffer Gel
Coomassie Blue 0,2% disolver el colorante en una mezcla de solventes formada por: 50
ml de metanol , 50 ml de agua y 10 ml de ácido acético.
Procedimiento:
Emplear placas de 3 x 2 pulgadas (1 pulgada = 2,54 cm). Con un sacabocados realizar
hoyuelos en la placa tanto del lado anódico como catódico y sembrar el antisuero y las
muestras y testigos del segundo.
Varios autores aconsejan el empleo de testigos de semen y flujo vaginal, pudiendo
mencionarse que los Laboratorios SERI proveen estándares de semen (SERI lyophilized
semen – std – R563).
La corrida electroforética se realiza a temperatura ambiente y bajo las siguientes
condiciones: voltaje 120 V durante 20 minutos. Luego, leer con luz reflejada sobre un fondo
oscuro. La lectura puede completarse de la siguiente manera: lavar la placa en una solución
salina 1 Molar durante toda la noche. A continuación cubrir con papel de filtro Wahtman Nº1 y
secar a 60ºC.
Luego emplear una solución colorante de Coomassie Blue al 0,2% sumergiendo la placa
durante 15 minutos. Lavar con solución salina 1M hasta que el fondo sea claro.
11.6 Determinación de Grupo ABO en manchas de semen
Una vez establecida la presencia de semen, el paso siguiente es la determinación del
grupo sanguíneo ABO y luego de las isoenzimas PGA y Pep A. Si bien es cierto que las
modernas metodologías para estudio del ADN han superado ampliamente (por su poder de
discriminación) a las técnicas mencionadas, el autor considera que, al menos en lo que
respecta al estudio del grupo, sigue constituyendo por su simplicidad y costos, una interesante
alternativa que permite descartar a un sospechoso.
En ese sentido, un hecho de fundamental importancia será la cantidad de muestra
disponible de la que dependerá, por razones obvias, cuales serán las pruebas a efectuar.
En cuanto a la presencia de los antígenos ABO en plasma seminal, fue establecida por
Yamasani y Shirai (1926), siendo el título de los mismos igual o mayor que aquel observado en
saliva.
La tipificación de individuos secretores mediante la técnica de absorción – inhibición
(ver capítulo Manchas de sangre) no resulta dificultosa y ofrece buenos resultados, mientras
que aquella de absorción – elución puede arrojar falsos negativos para la presencia de un
antígeno. Esta situación se debe a que las sustancias secretadas son solubles y, por lo tanto,
podrían ser eliminadas en los pasos de lavado. Por tal motivo, la última de las técnicas no es
aconsejable para procesar este tipo de muestras.
Un hecho a tener muy en cuenta en la interpretación de los resultados obtenidos, deriva
de la siempre posible contaminación del semen presente con flujo vaginal (lo cual ocurre
invariablemente en hisopados vaginales) y/o sangre de la víctima.
7. Manual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología
201
En ese caso, algunos autores desaconsejan la determinación del grupo y, de efectuarlo,
tener muy presente que, en el resultado obtenido, bien pudo haber influido la presencia de
dichos fluidos. En tal sentido, resulta de suma utilidad el conocimiento del grupo sanguíneo de
la víctima y, de ser posible, el del sospechoso, al igual que el carácter secretor o no de los
mismos.
11.6 Otras determinaciones
Dos sustancias cuya determinación suele investigarse en el análisis de manchas de
semen, ya sea por que son solicitadas por la instrucción o bien por la influencia que en los
resultados de las pericias podrían tener, son la saliva y la materia fecal.
11.6.1 Investigación de saliva
Si bien la misma no posee un marcador característico, una elevada concentración de la
enzima amilasa sugeriría la presencia de este fluido.
Reactivos:
Buffer pH 6.9: disolver 2,7 g de NaPO4H2 más 3,9 g de Na2PO4H y 0,2 g de NaCl (7
mM) en 500 ml de H2O deionizada
Gel: disolver 0,1g de agarosa y 0,02g de Almidón soluble en 10 ml de Buffer pH 6.9
Procedimiento:
Volcar la solución del gel en una cápsula de Petri plástica de 15 x 100 mm y dejar en
reposo hasta que se forme el gel. Luego practicar en el mismo, con ayuda de una Pipeta
Pasteur o similar, hoyuelos separados por una distancia de, al menos, 1,5 cm y luego sembrar
las muestras y controles con cuidado de no rebalsar los orificios. Los últimos pueden ser, por
ejemplo, saliva sin diluir y en diluciones 1:500 y 1:1.000, los cuales, además, servirán para
tener una idea aproximada de la concentración de saliva en la muestra en estudio, a partir de la
medida de los diámetros obtenidos.
Tapar la cápsula e incubar a 37ºC toda la noche. Luego adicionar a la placa una dilución
1:100 de una solución de yodo saturada. La presencia de círculos claros en torno a un hoyuelo
indica reacción positiva para la presencia de la enzima en la muestra en cuestión.
11.6.2 Investigación de materia fecal
Para tal fin, se analiza la presencia de urobilinógeno. Este test se basa en la formación de
un complejo verde fluorescente zinc – urobilina. El urobilinógeno es oxidado a urobilina la cual
es soluble en alcohol, y así, en presencia de una sal neutra de zinc en solución alcohólica se
forma el mencionado complejo.
Procedimiento: preparar un extracto acuoso de la mancha en un tubo pequeño. Colocar la
misma cantidad de agua en un segundo tubo como control. Adicionar a cada tubo 3 gotas de
una solución saturada de cloruro mercúrico en etanol.
Adicionar un volumen igual de una solución saturada de cloruro de zinc en etanol y agitar.
Luego observar bajo luz U.V. Una fluorescencia estable de color verde indica la presencia de
urobilinógeno.
8. Manual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de Toxicología
202
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