Este documento describe el efecto de diferentes colorantes como el cristal violeta, la safranina, el azul de metileno y el verde de malaquita sobre el crecimiento de microorganismos. Se realizaron pruebas en tubo y placa para determinar la concentración mínima inhibitoria de los colorantes sobre Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus y Klebsiella pneumoniae. Los resultados mostraron que la safranina y el cristal violeta inhiben el crecimiento de los microorganismos a concentraciones

1. INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL- ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Efecto de los colorantes sobre el crecimiento de los
microorganismos
Laboratorio de microbiología general
Grupo 3QM1
Laboratorio 3 y 4. Equipo 6

2. Introducción
Un colorante es un compuesto orgánico natural o
sintético, que al aplicarlo a un sustrato le confiere
un color más o menos permanente.
Las sustancias coloreadas son las que absorben
luz en la región visible del espectro (400 a 750
nm). Una sustancia presenta el color
complementario del que absorbe ya que este se
resta de la luz reflejada o transmitida.
F. Klages.Tratado de Química Orgánica. Colorantes. 1968

3. Naturaleza química de los colorantes
Cromóforos: (del griego portador de color) es el responsable del color. Son
rearreglos de dobles enlaces conjugados en sistemas aromáticos o lineales, que
dan la disponibilidad electrónica para absorber cuantos de la región del visible del
espectro electromagnético, poseen átomos electrodonadores o electroatractores
al final de estas conjugaciones.
NITRO
NITROSO
IMINA
AZO
JA Kiernan. Classification and naming of dyes, stains and fluorochromes.
Biotechnic and Histochemistry · September 2001

4. Auxocromos: Evita las interferencias generadas en el cromóforo,
intensificando el color del mismo y también permite acoplarse a las
estructuras deseadas de un sustrato.
BÁSICOS O
CATIÓNICOS:
ÁCIDOS O
ANIÓNICOS:
-COOH, -OH, -SO3H-NHR, -NR2, -NH
FRY, B. A. (1957). J. gen. Microbiol. 16, 341-349

5. Usos de colorantes en microbiología

6. Colorantes por acción antimicrobiana
Derivados del trifenilmetano. Intervienen
en la síntesis de pared celular.
Ejemplos: Verde brillante, Verde de
malaquita, Cristal violeta.
Derivados de la acridina. Intervienen en la
síntesis de ácidos nucléicos y proteínas.
Ejemplos: Acriflavina, Proflavina, Naranja
de acridina.
Feduchi, Blasco, Romero, Yánez. Bioquímica. Conceptos esenciales. 2010.

7. Derivados del trifenilmetano. Mecanismo de
acción:
La Pseudobase, adquiere carácter más
lipofílico, lo que le confiere una mejor
incorporación a la célula, y posteriormente
pueda fijarse a los grupos Fosfato de los
ácidos nucléicos.
Se ha demostrado su capacidad
inhibitoria en la síntesis de glutamina en
modelos bacterianos de Staphylococcus
aureus. (Fry,1957).

8. Verde de Malaquita Cristal violeta
Estructuras de los colorantes

9. Derivados de la acridina. Mecanismo de acción:
Cuadro tomado de: Journal of Antimicrobial Chemotherapy
(2001) 47, 1-13
Su mecanismo de acción es, la
formación de un complejo
DNA-acridina, que interfiere en
la biosíntesis de ácidos
nucléicos.

10. Azul de metileno Safranina
Proflavina Naranja de acridina
Estructuras de los colorantes

11. Objetivo
Realizar dos técnicas que permitan observar el efecto de los colorantes sobre la
viabilidad de los los microorganismos.

12. Procedimiento
I. Efecto de colorantes en tubo
*La concentración de colorante en el tubo 1 es de 2 (㎍/ mL)
Los colorantes utilizados fueron: cristal violeta, safranina, azul
de metileno y verde de malaquita

13. II. Efecto de los colorantes en placa
*Las 3 concentraciones de los colorantes en las cajas
fueron de: 1 ㎍/ mL, 0.1 ㎍/ mL y 0.01 ㎍/ mL

14. Resultados en tubo Laboratorio 3
Colorante
Escherichia coli Staphylococcus aureus
Dilución CMI (㎍/ mL) Efecto Dilución CMI (㎍/ mL) Efecto
Cristal
violeta
10-1 2 bactericida 10-2 0.2 bactericida
Safranina - >2 bactericida 10-2 0.2 bactericida
Azul de
metileno
- >2 bactericida 10-2 0.2 bactericida
Verde de
malaquita
- >2 bactericida 10-3 0.02 bactericida
CMI= Concentración mínima inhibitoria
- = Se desconoce la dilución

15. Resultados en tubo Laboratorio 4
Colorante
Escherichia coli Staphylococcus aureus
Dilución CMI (㎍/ mL) Efecto Dilución CMI (㎍/ mL) Efecto
Cristal
violeta
10-2 0.2 X 10-8 2X10-7
X
Safranina - >2 X - >2 X
Azul de
metileno
- >2 X 10-1 2 X
Verde de
malaquita
- >2 X No se sembró
CMI= Concentración mínima inhibitoria
- = Se desconoce la dilución
X= no se determinó

16. Resultados en tubo ambos laboratorios

17. Safranina
Dilución Escherichia coli Bacillus subtilis Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae
10-4
+ +/- +/- +
10-5 + +/- +/- +
10-6
+ + +/- +
CMI >1μg/ml >1μg/ml >1μg/ml >1μg/ml
Cristal violeta
10-4
- - - +
10-5 - - - +
10-6
- - - +
CMI <0.01μg/ml <0.01μg/ml <0.01μg/ml >1μg/ml
Resultados en en placa Laboratorio
4

18. Resultados en en placa Laboratorio
3
Safranina
Dilución Escherichia coli Bacillus subtilis Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae
10-4
+ +/- +/- +
10-5 + +/- +/- +
10-6
+ + +/- +
CMI >1μg/ml <0.1μg/ml <0.1μg/ml >1μg/ml
Cristal violeta
10-4
- - - +
10-5 - - - +
10-6
- - - +
CMI <0.01μg/ml <0.01μg/ml <0.01μg/ml >1μg/ml

19. Evidencias Evidencias del crecimiento con Safranina en placa
Dilución 10-6 Dilución 10-5 Dilución 10-4
Bacillus subtilis, Escherichia coli Escherichia coli (+) Escherichia coli (+)
Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+)
Donde 1: Bacillus subtilis
2: Escherichia coli
3: Staphylococcus aureus
4: Klebsiella pneumoniae

20. Evidencias Evidencias del crecimiento con Cristal violeta en placa
Dilución 10-6 Dilución 10-5 Dilución 10-4
Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+)
Donde 1: Bacillus subtilis
2: Escherichia coli
3: Staphylococcus aureus
4: Klebsiella pneumoniae

21. Bibliografía
Feduchi, Blasco, Romero, Yánez. Bioquímica. Conceptos esenciales.
2010.Editorial Médica Panamericana.
F. Klages.Tratado de Química Orgánica. Colorantes. 1968. Ed. Reverté Pág 33