El documento presenta un taller sobre la metodología de la investigación científica. Explica que la estructura de un trabajo científico experimental incluye el título, autores, introducción, antecedentes, materiales y métodos, resultados, discusión, conclusiones y bibliografía. Además, detalla los pasos para la comunicación del trabajo científico, incluyendo la estructura, contenido y estilo de los resúmenes y manuscritos, así como las normas para presentaciones en congresos y publicaciones.

1. TALLER DE
METODOLOGÍA DE LA
INVESTIGACIÓN
COMUNICACIÓN DEL TRABAJO
CIENTÍFICO
Tema III. Comunicación del trabajo científico. Estructura, contenido y
estilo del comunicado. Normas de presentaciones a Congresos y
publicación en revistas con arbitraje. Detalles de la confección de un
manuscrito de investigación.
La estructura de trabajo científico experimental: título, autores,
introducción, antecedentes del tema, materiales y métodos, resultados,
discusión, conclusiones, bibliografía citada, agradecimientos, resumen,
palabras claves.
Dra. Lucía I. Castellanos de Figueroa

2. CÓMO ESCRIBIR UNA
TESIS DE GRADO?

3. QUÉ ES UNA TESIS DE GRADO?
Un trabajo elaborado por los alumnos para la
obtención de su Título Profesional y/o Grado
Académico, que deberá ser inédito en el
área de una disciplina, referido a un
problema o un tema debidamente
fundamentado.
Licenciatura en Biotecnología
Dicho trabajo consiste en un estudio original,
dirigido por un Director designado a tal efecto,
orientado a resolver sistemáticamente un
problema o necesidad dentro del área de la
Biotecnología, mediante la aplicación de
conocimientos, métodos y técnicas generales y
específicas, según sea la naturaleza del tema.

4. NORMAS DE PRESENTACIÓN Y CONFECCIÓN DEL TRABAJO
FINAL (TESIS DE GRADO) DE LA LIC. EN BIOTECNOLOGÍA,
FAC. DE BIOQUÍMICA, QUÍMICA Y FARMACIA, UNT
Reglamento de Trabajo Final. Res. HCD 286-05
Artículo 7º
Para la realización del Trabajo Final los alumnos de la Carrera de Licenciatura en Biotecnología
deberán presentar un plan de trabajo que deberá ser aceptado por el Comité Académico de la
ATF y cuyo desarrollo se ajuste a alguna de las siguientes modalidades:
a. Trabajo Experimental
Se sustenta en el empleo y demostración experimental de principios o teorías que se toman
como marco de referencia teórica para la práctica. Incluye especialmente el empleo de la
Metodología formal del área escogida para llevar a cabo la práctica.
b. Proyecto en fábrica
Debe estar estructurado en términos de perfeccionamiento teórico y práctico, apoyándose en
la investigación bibliográfica, y debe culminar en un análisis crítico creativo de las actividades y
líneas de acción relacionadas al proyecto llevado a cabo en la Empresa o Fábrica.
c. Investigación teórica basada en una revisión bibliográfica o Trabajo de Seminario
Se entiende por Trabajo de Seminario una actividad académica teórica creativa no
meramente recopilatoria, basada en una revisión bibliográfica crítica acerca de algún
problema científico o profesional, mediante el cual el alumno profundizará en las teorías y
métodos de investigación propios de la disciplina y su aplicación a casos específicos.

5. Todo trabajo final constará de las siguientes partes y en el siguiente
orden:
1) Información general
2) Cuerpo principal o texto
3) Bibliografía

6. 1. Información general
a) El trabajo deberá ser escrito en hoja tamaño A4, a doble espacio y las páginas
deberán ir numeradas.
b) Página de título:
* Universidad Nacional de Tucumán
* Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia
* Asignatura “Trabajo Final”
* Título del trabajo
* Proyecto para optar al título de Licenciado en Biotecnología
* Nombre completo del alumno
* Nombre del director y director asociado
* Lugar de trabajo
* Mes y año

7. c) Página de agradecimientos
d) Índice
e) Nomenclatura empleada
f) Resumen
2. Cuerpo principal o texto
a) Introducción
b) Materiales y métodos
c) Resultados
d) Discusión
E) Conclusiones

8. 3. Bibliografía
• En el texto, las citas bibliográficas se
indicarán con el nombre del primer autor
y el año de su publicación entre
paréntesis o con las normas aceptadas
internacionalmente
• Al final del trabajo se escribirá la
bibliografía en orden alfabético
Cuando sea un libro:
Shriner R., Hermann C., Morril T., and Fuson R. (1998). The systematic identification of
organic compounds. 7, pp. 276-277. John Wiley and Sons, Inc. Eds.
Cuando sea una revista:
Smith A.M. (1976). Ethylene in soil biology. Annual Reviews of Phytopatology, 14: 53-57.

9. ¿CÓMO DEBE ESTAR ESCRITA?
Una tesis es un trabajo de investigación. El informe concierne a un
problema o conjunto de problemas en un área definida de la ciencia
y debe explicar lo que se sabe de él previamente, lo que se hacía
para resolverlo, lo que sus resultados significan, y dónde o cómo se
pueden proponer progresos, más allá del campo delimitado por el
trabajo.
¿Cuán detallada?
¡Bastante más que para un artículo científico! Es una ventaja que la
tesis sea bastante explícita en contraposición a una inconsistente.
La referencias bibliográficas son el medio adecuado de documentar
conceptos que no son propios, debe declarar donde está
documentado ese resultado en la literatura científica.
¡La ciencia debe ser escrita siempre en voz
activa y en modo impersonal!

10. RESUMEN
Debe ser una síntesis de la tesis: una descripción concisa del problema general (y
particular) que se aborda, su método de resolverlo, sus resultados y conclusiones.
Un resumen debe ser auto-contenido, o tener independencia, es decir no requerir
de la lectura del trabajo completo, para saber todo lo que en él se expone
globalmente.
Normalmente no contiene referencias. Cuando sea necesaria una referencia, su
detalle debe incluirse en el texto del mismo resumen. Verifique el límite de la
cantidad de palabras, que para una tesis va de 200 a 300.
INTRODUCCIÓN
¿Cuál es el tema y porqué es importante? Exponga el
problema global tan simple como pueda.
La introducción debe decir claramente adónde va la
tesis, y esto se volverá más claro en el avance de la
escritura misma. Aquí se realiza la revisión
bibliográfica. ¿De dónde vino el problema? ¿Qué se
sabe ya sobre este problema? ¿Qué otros métodos se
han tratado para resolverlo?

11. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados y la discusión se combinan muy a menudo
en las tesis. En la mayoría de casos, los resultados
obtenidos requieren discusión. ¿Qué significan? ¿Cómo
encajan en el cuerpo de conocimientos existentes? ¿Son
consistentes con las teorías actuales? ¿Dan discernimientos
nuevos? ¿Sugieren nuevas teorías o mecanismos?
Se debe estar seguro de que se ha descrito las condiciones en las cuales se
obtuvo el conjunto de resultados expresados. Se deben usar los análisis
estadísticos apropiados. Donde sea aplicable, se debe mostrar los errores de la
medición y los errores normales en las gráficas. Usar pruebas estadísticas
adecuadas.
CONCLUSIONES
Son las contribuciones del autor en la confirmación o el rechazo de las hipótesis
planteadas en la introducción.
Los resultados y las discusiones deben ofrecer suficiente evidencia científica como
para respaldar a las conclusiones. Debe existir además una fuerte correlación
entre la introducción (responde al qué) y las conclusiones (responden al cómo).
La conclusión global, debe despejar la idea principal, la que debe ser escrita con
énfasis y en forma positiva. Tanto la premisa mayor como la menor, deben salir
ambas de la propia experiencia.

12. BIBLIOGRAFÍA
Se trata de la presentación de una lista ordenada alfabéticamente por el apellido
del autor, de las obras citadas en el texto.
Sirve para dar al lector la oportunidad de comprobar la existencia de las fuentes
originales del trabajo realizado. Es un indicador directo del grado de profundidad
de la investigación.
Debe reunir los datos precisos, pertinentes y oportunos, que lleven identificar
inequívocamente a la fuente de información.
No debe haber citas en el texto que no tengan su correspondiente
referencia, y tampoco a la inversa.

13. COMUNICACIÓN EN LA
CIENCIA

14. Todo investigador debe escribir los resultados de su
investigación, ya que el propósito final de una
investigación científica debe ser la publicación de los
resultados obtenidos
El idioma Inglés es el lenguaje universal de la ciencia
Redacción científica: clara y sencilla
Finalidad: comunicar nuevos desarrollos o
conocimientos científicos

15. FORMAS DE COMUNICACIÓN CIENTÍFICA
Artículos científicos (“Scientific paper”)
Artículos de revisión (“Review paper”)
Comunicaciones breves (“Short communications”)
Comunicaciones a Conferencias (“Conference report”)
Resúmenes de Congresos (“Meeting abstracts”)
* Resúmenes amplios o expandidos
Presentaciones en Congresos (“Posters”)
Comunicaciones orales en Congresos
Libros: a) editados (colectivos) o b) de uno/s autores
Divulgación: al público en general

16. Artículos científicos (“Scientific paper”)
Es un trabajo de investigación original.
Artículos de revisión (“Review paper”)
Es una revisión de trabajos científicos. Información que ya fue
publicada.
Comunicaciones breves (“Short
communications”)
Trabajos de estructura simple, cortos, aspectos de interés más
limitados dentro de un tema general. Pueden publicarse
resultados negativos.

17. Comunicaciones de Conferencias
(“Conference report”)
Resumen de una conferencia dada en un Congreso, puede
contener información original.
Resúmenes de Congresos (“Meeting
abstracts”)
Se publican en los libros de resúmenes de los Congresos.
Deben tener resumido el contenido de la presentación a
realizar.
Resumen ampliado: Tiene la estructura de un “Scientific
paper”, sin detallar experimentos.

19. Book of Abstracts

20. Presentaciones en Congresos (“Posters”)
Es una presentación visual de lo que se quiere
mostrar.
Objetivo: detallar parte de un trabajo en una
forma que sea fácilmente asimilable y que
estimule la discusión.
Produce un fructífero intercambio de ideas.
No contiene muchos detalles.
Contiene poco texto y muchas gráficas e
ilustraciones.

22. DETECTION OF ACYLHOMOSERINE LACTONES
IN CULTURES OF Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5
Nieto Peñalver, Carlos G., Bichara, Laura, Marino Damián, Castellanos de
Figueroa, Lucía I., Irazusta, Verónica
PROIMI‐CONICET, Tucumán. Facultad de Ciencias Exactas‐
UNLP‐CONICET, La Plata. E‐mail: cgnieto@proimi.org.ar
Gluconacetobacter diazotrophicus is an acid‐tolerant nitrogen fixing Alphaproteobacterium first found in association with sugarcane. It has also been isolated from rice, coffee and tea, among others crops. The recent sequencing of the G. diazotrophicus PAL5 genome shows the presence of one luxI
homolog. These genes encode LuxI‐type enzymes responsible for the synthesis of N‐acylhomoserine lactones (AHLs), the main quorum sensing molecules in gram negative bacteria. The objective of this work was the detection and identification of AHLs produced by G. diazotrophicus PAL5. The strain was
cultured aerobically, and extracts were prepared with acidified ethyl acetate. Samples were analyzed by thin layer chromatography developed with the biosensor Agrobacterium tumefaciens NTL4 (pCF218) (pCF372). Results show that G. diazotrophicus PAL5 produce at least two types of AHLs under the
assayed conditions. Short‐chain AHLs could be detected since early exponential growth phase, and medium‐chain AHLs were detected in mid‐ and late‐exponential growth phase. The results suggest that the luxI homolog in G. diazotrophicus PAL5 is expressed and quorum sensing molecules are produced
and secreted. Similar to other bacteria, production of AHLs in G. diazotrophicus PAL5 could serves as a signaling mechanism among members of this genus or as inter kingdom signals.
INTRODUCCION
Sistemas regulatorios de Quorum Sensing Gluconacetobacter diazotrophicus
Los microorganismos pueden coordinar su fisiología mediante la biosíntesis y secreción de moléculas señal. En mayoría de las bacterias Es una bacteria diazotrófica aislada por primera vez de la planta de caña de azúcar. Es una bacterias endofíticas
gram negativas, estas moléculas pertenecen a la familia de las acil homoserinlactonas (AHL). Implicado en su producción se encuentra modelo para el estudio de las interacciones entre bacterias y plantas no leguminosas. Se la ha encontrado en
la enzima LuxI responsable de su biosíntesis. Una proteína del tipo LuxR capta estas moléculas señal y, actuando como un factor asociación con plantas de café, arroz y otros vegetales. Promueve el crecimiento de plantas mediante la síntesis de
transcripcional, induce cambios en la expresión de determinados genes. Generalmente, estos genes están relacionados las fitohormonas y la solubilización de micronutrientes. También controla el crecimiento de fitopatógenos como
interacciones con otros microorganismos y con organismos hospederos: exoenzimas, exoplisacáridos, sideróforos, etc. Colletotrichum falcatum. La secuenciación de su genoma ha localizado tres genes relacionados con sistemas de
quórum sensing: un gen que codificaría para una enzima del tipo LuxI y dos genes que codificarían dos proteínas
LuxR.
METODOLOGIA
Preparación de extractos concentrados
Acetato Bioensayos
DYGS+Glu0,2% 24h Evaporación y Extractos
de etilo - Agrobacterium tumefaciens NTL4
30°C concentración concentrados X500
(pCF218) (pCF372)
DYGS+Glu0,2% - Pseudomonas putida F117
LGIP+Gluc0,2% Extracción Separación de
con solvente fase orgánica
Bioensayos con cepas biosensoras
P. putida F117
TLC en Revelado con PAL5
(pKR-C12)
fase reversa A. tumefaciens NTL4
Fase móvil: (pCF218) (pCF372) DYGS+Glu0,2% Expresión
MeOH:H2O Bioensayos en placas de GFP
reveladas con
Estándares Extractos Inducción de P. putida F117 (pKR-C12)
concentrados β-galactosidasa
RESULTADOS DISCUSION
Los extractos concentrados de cultivos de G. diazotrophicus PAL5 inducieron la síntesis de β‐galactosidasa en A. tumefaciens NTL4
TLC en fase reversa revelada con A. tumefaciens (pCF218) (pCF372).
C6-HSL O NTL4 (pCF218) (pCF372): en los extractos de Por TLC se observan spots con Rf similares a los estándares comerciales C6‐HSL y C8‐HSL.
N H
cultivo de la cepa PAL5 se encuentran AHLs que
H 3 C
O
O
N H
O
inducen la síntesis de β-Gal. Los bioensayos en placa muestran que la cepa PAL5 puede inducir la síntesis de proteína de fluorescencia verde (GFP) en P. putida
H 3 C
O
O F117 (pKR‐C12).
C8-HSL Los resultados con la cepa biosensora F117 sugieren que G. diazotrophicus PAL5 también sintetiza acil homoserinlactonas de largas
Estándares cadenas.
comerciales Extracto DYGS
Extracto LGIP Estos resultados muestran que G. diazotrophicus PAL5 tiene un sistema de quorum sensing activo cuando crece en medios ricos y
complejos (DYGS + glucosa 0,2%), así como en medios minerales y sintéticos (LGIP + glucosa 0,2%). En este sistema intervienen
moléculas de la familia de las acil homoserinlactonas.
Expresión de GFP observada por
microscopia de
La secuenciación del genoma de G. diazotrophicus PAL5 muestra un único gen que codificaría una enzima del tipo LuxI. Esto sugiere
fluorescencia: la cepa PAL5 secreta
que esta enzima sería la responsable de la síntesis de todas las moléculas de quorum sensing producidas por la cepa PAL5.
moléculas que son captadas por la cepa
AGRADECIMIENTOS Y RECONOCIMIENTOS
F117, induciendo la síntesis de GFP
Este trabajo fue subvencionado por ANPCYT (PICT2007 N°734) y CONICET.
BIBLIOGRAFIA
G. diazotrophicus P. putida F117 Bertalan, M., et al. Complete genome sequence of the sugarcane nitrogen‐fixing endophyte Gluconacetobacter diazotrophicus Pal5. BMC Genomics 2009, 10:450.
PAL5 (pKR-C12) Saravanan, BMC Genomics 2009, 10:450. S., et al. Ecological Occurrence of Gluconacetobacter diazotrophicus and Nitrogen‐fixing Acetobacteraceae Members:
Their Possible Role in Plant Growth Promotion. Microb. Ecol. 2008, 55(1):130‐140.
Steindler, L., et al. Detection of quorum‐sensing N‐acyl homoserine lactone signal molecules by bacterial biosensors. FEMS Microbiol. Lett. 2007, 266(1):1‐9.

23. Proteomic study of Rhodotorula mucilaginosa RCL-11 revealed differential BT-P11
proteins expression under
copper stress
Verónica Irazusta , Cristina Estevéz , María Julia Amoroso , Lucía I. C. de Figueroa 1 1,2 1,2 1,2
1PROIMI-CONICET,
Av. Belgrano y Pje. Caseros, Tucumán, T4001MVB, Argentina,
2Universidad Nacional de Tucumán, Tucumán, T4001MVB, Argentina, virazusta@proimi.org.ar
ABSTRAC
Organisms subjected to metal exposures in their natural environments generally have had develop resistance mechanisms. Rhodotorula mucilaginosa RCL-11, yeast isolated from a copper filter
plant at the province of Tucumán, Argentina, has the ability of supporting high amounts of copper metal by a slow down in its growth rate(1). In order to understand the mechanism involved in
RCL-11 resistance to copper it was conducted a proteomic approach(2). Results of atomic absorption spectroscopy showed that copper concentration in the medium decreased from 0.5 to
0.2mM 48 h later inoculation occurred. Analyzing by mono-dimensional gel electrophoresis the crude cells extracts, it was observed differential bands expressions between cells with or without
copper. Further, with the aim of studying these differences, two-dimensional electrophoresis analyses was carried out. Gels were silver-stained, scanned and analyzed with Image Master Program.
2-D analysis of RCL-11 revealed that 48 h copper exposure produced an over-expression of 20 proteins; some of them increased their expression according to the time of copper exposure (16, 24
and 48 h). The results obtained in the present work show that when exposing R. mucilaginosa RCL-11 to 0.5mM copper concentration, it is produced a differential protein expressions probably
involved in cell resistance mechanisms.
1. Disminución del cobre en el medio de cultivo en presencia de 4. Aumento de la expresión de proteínas específicas con el tiempo
Rhodothorula mucilagenosa RCL-11 Se observa el aumento gradual de la expresión de algunas proteínas correlacionada con el
Las células de levadura fueron cultivadas en presencia o ausencia de 0,5 mM Cu2+ en medio tiempo de exposición al cobre. A las 48 horas se aprecia la máxima expresión de los spots
liquido. A las 24 horas de cultivo las levaduras logran disminuir los niveles del metal a la mitad, señalados en la figura.
logrando los menores valores de 0,14 mM a las 72 horas. Se demuestra que RCL-11 presenta la – Cu + Cu
Absorvancia 600 nm
capacidad de disminuir los niveles de cobre del medio de cultivo. 1 1 6
Curva de crecimiento Contenido de Cu extracelular 6
30 - Cu +Cu
+ Cu Cu mM 0,5
0,4
16 hs 8
20 8
0,3
10 0,2
0,1
0 0 1 1
20 40 60 80 0 20 40 60 80 6
0 6
tiempo tiempo
24 hs
8
2. Análisis monodimensional de los extractos proteicos de RCL-11 8
1 6 1
24hs 48hs Las proteínas totales fueron extraídas por medio 6
0,5 mM Cu - + - + mecánico utilizando perlas de vidrio y vórtex. Las 48 hs
8 8
97 proteínas fueron separadas por sistema de electroforesis
monodimensional SDS-PAGE. Los extractos proteicos
Peso molecular
84
corresponden a distintos tiempos de cultivo, en
66
(KDa)
presencia y ausencia de cobre. Los geles fueron teñidos
55 con EZ blue de BioRad. Se puede observar un perfil de 5. Identificación de las proteínas diferencialmente expresadas en presencia
45 bandas distinto en presencia y ausencia de cobre, tanto
a 24 como a 48 horas de cultivo. Dichas diferencias de cobre
30 Las proteínas fueron identificadas mediante huella peptídica combinada con secuenciación
pueden traducirse en la expresión diferencial de las
20 proteínas cuando las células son sometidas al MS/MS.
Proteína Spots Taxonomía Score
tratamiento con el cobre.
Proteína mitocondrial de choque térmico
1,2 Puccinia graminis f. sp 40
3. Análisis bidimensional de RCL-11 a las 48 horas de tratamiento (Hsp88)
Las proteínas fueron separadas según su punto isoelectrico en tiras de 11cm 3-11NL (GE) y según Metionina sintetasa 3,4,5,6 Puccinia graminis f. sp 41
Proteína mitocondrial de choque térmico
su peso en SDS-PAGE al 12,5 %. Se observan spots diferencialmente expresados cuando las 7,8 Ustilago maydis 521 162
(Hsp70)
células son cultivadas con Cu2+.
Probable chaperona de choque térmico
– Cu 48 horas + Cu 48 horas 9 Ashbya gossypii ATCC 10895 85
3 11 3 11 (Familia Hsp70)
97 1 2 2 Beta glucosidasa 10 Aspergillus niger 41
3 5 1 5
4 3 4
6 6 Proteína mitocondrial de choque térmico
66 7 7 11 Ustilago maydis 521 96
9
(Hsp60)
8 9
45
11 10 11
8
10 Superóxido dismutasa
CONCLUSIONES 12 Rhodotorula glutinis 25
Peso molecular
•La capacidad de reducir los niveles de cobre en el medio de cultivo por parte de la levadura
cultivo
29 Rhodothorula mucilagenosa RCL-11, se correlaciona con la expresión diferencial y selectiva de
sus proteínas.
.
(KDa)
20
•Las células responden al estrés provocado por el metal, aumentando la expresión de proteínas
cé estré expresió proteí
12 12
directamente implicadas en la defensa contra el estrés oxidativo, entre ellas destacan las
estré oxidativo,
REFERENCIAS
14 (1) Villegas LB, Amoroso MJ, C de Figueroa LI. J.rmico (Hsp60,70,88) y la superóxido dismutasa.
chaperonas de choque té Basic Microbiol. (2005) 45 5, 381–391
té superó dismutasa.
(2) Irazusta V, Cabiscol E, Reverter-Branchat G, Ros J, Tamarit J. JBC (2006) 28118, 12227-32
Este trabajo ha contado con el financiamiento de la Universidad Nacional de Tucumán CIUNT 26/D415 y PICT Préstamo BID 2007-568 del FONCyT (Agencia)

24. IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE HONGOS FILAMENTOSOS PRODUCTORES DE
ESTATINAS AISLADOS DE LAS YUNGAS (TUCUMÁN-ARGENTINA)
Cabral ME1; Delgado OD1; Figueroa LIC 1,2 & Fariña JI1.
PROIMI – CONICET. Av. Belgrano y Pje. Caseros, Tucumán, Argentina. 2Universidad Nacional de Tucumán, Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia, Tucumán,
1
Argentina. e-mail: mcabral@proimi.org.ar
INTRODUCCIÓN MATERIALES Y MÉTODOS
La capacidad de producir estatinas fue evaluada en una etapa previa de trabajo mediante el análisis de extractos orgánicos de cultivos fúngicos por
Las enfermedades cardiovasculares representan una de las principales causas de muerte a nivel cromatografía en capa fina de sílica gel (TLC) y mediante bioensayos con céspedes de levadura donde se evaluó el efecto inhibitorio de las estatinas sobre el
mundial. La utilización de estatinas ha mostrado gran efectividad y seguridad en la reducción de los crecimiento de dichos microorganismos. Los resultados fueron posteriormente confimados por RP-HPLC.
niveles de colesterol plasmático en pacientes hipercolesterolémicos, inhibiendo la síntesis de novo En base a los resultados del análisis realizado, se seleccionaron los mejores productores potenciales de estatinas, procediendo a la identificación de estos
aislamientos por amplificación y secuenciación de segmentos completos (ITS1, ITS2, 5.8S) y parciales (dominio D1/D2 de subunidad 28S) del ADNr (4) (Figura 2).
del colesterol endógeno. La actividad hipocolesterolémica de las estatinas, varias de ellas
metabolitos secundarios de origen fúngico, se basa en la inhibición competitiva de la enzima HMG- ITS1
CoA reductasa, que cataliza el paso limitante de la velocidad en la vía de síntesis del colesterol (1), 18S 5.8S 28S
debido a la similitud estructural existente entre la forma β-hidroxiácido de las estatinas y el sustrato NL4
de dicha enzima (HMGCoA) (Figura 1). A través de este mismo mecanismo, las estatinas bloquean Figura 2: ubicación del fragmento ITS1-NL4 del ADNr.
la síntesis de ergosterol, inhibiendo así el crecimiento en levaduras.
Cultivos fúngicos:
Además de su efecto hipocolesterolémico, las estatinas presentan capacidad de inducir apoptosis. Los aislamientos de las Yungas LY 28.1, LY 30.1, LY 30.2, LY 37.11, LY 38.4 y LY 39.1, fueron cultivados en medio sólido Czapek a 25ºC durante 5 días.
La lovastatina y sus análogos bloquean la síntesis de metabolitos intermediarios en la ruta del Extracción del DNA genómico total:
La extracción de DNA se realizó por tratamiento del micelio fúngico utilizando un kit comercial de QBiogene, según indicaciones del fabricante.
mevalonato, entre ellos, isoprenoides necesarios para la síntesis de proteínas esenciales en el
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR):
progreso del ciclo celular (2) (Figura 1). Esta popiedad haría a las estatinas aplicables también al Las secuencias de los primers utilizados para amplificar la región D1/D2 de la subunidad 26S del ADNr fueron:
tratamiento de enfermedades fibroproliferativas y tumorales. Adicionalmente, se observó que estos ITS1 5`-TCC GTA GGT GAA CCT GCG G-3` (4)
metabolitos fúngicos y sus análogos sintéticos presentan actividad inhibitoria sobre la velocidad de NL4 5`-GGT CCG TGT TTC AAG ACG G-3` (5)
replicación de HIV-1 en células infectadas (3). Las amplificaciones fueron llevadas a cabo utilizando un termociclador PerkinElmer con el siguiente programa de PCR: 4 min a 94°C; 30 s a 94°C; 30 s a 52°C; 1.5 min a
HMG-CoA H O O 70°C (30 ciclos), 7 min a 72°C, y finalmente tiempo indefinido a 4°C. Electroforesis de DNA en geles de agarosa:
O H
HMG-CoA
Statins O H El ADN resultante de la extracción y de la reacción de amplificación se analizó por electroforesis en gel de agarosa al 0,8% en buffer TAE 1X. El revelado se realizó con
reductase
Mevalonate R1 bromuro de etidio y las bandas se visualizaron por fluorescencia emitida al irradiar con luz ultravioleta.
C H 3 Secuenciación e identificación molecular:
Isopentenyl-PP R2 La secuenciación de las regiones ITS1- 5.8S - ITS2 y del dominio D1/D2 de la subunidad 28S del rDNA fue realizada en MacroGen (Corea). Las secuencias fueron
depositadas en la base de datos GenBank. Las mismas fueron comparadas con las ya existentes en dicha base de datos, con la finalidad de construir los árboles
Geranyl-PP
filogenéticos correspondientes.
Farnesylated proteins (Ras, etc)
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Farnesyl-PP Geranylgeranyl-PP
Squalene Geranylgeranylated proteins (Rho, etc)
Las cepas seleccionadas, productoras de estatinas y/o compuestos químicamente relacionados, mostraron mayor porcentaje de
ERGOSTEROL/ CHOLESTEROL / STIGMASTEROL similitud con cepas de los géneros Penicillium, Fusarium e Hypocrea (Tabla 1).
Figura 1. Actividad inhibitoria de las estatinas sobre la vía de síntesis de esteroles y otros dervidados del
Las secuencias fueron depositadas en la base de datos Tabla 1: Similitud entre las secuencias del dominio D1/D2 de aislamientos fúngicos de Las
Yungas y organismos relacionados.
mevalonato. GenBank bajo los números de acceso FJ434201, Aislamiento Nicho ecológico Organismos relacionados Similtud (%)
Debido a que la producción microbiológica de estatinas no FJ434202, FJ434203, FJ434204, FJ434205 LY 28.1
Hongo de
sombrero
Fusarium chlamydosporum
NBAIM:236 99,5
se ha encarado aún en nuestro país, se consideró de gran correspondientes a los aislamientos LY 28.1, LY 30.1, LY 30.1 Tronco
Hypocrea vinosa CBS 960.68
Hypocrea lixii CBS 226.95
100
100
importancia la búsqueda de nuevas cepas fúngicas con LY 30.2, LY 37.11, LY 38.4 y LY 39.1, respectivamente. LY 37.11
LY 38.4
Tierra Penicillium kojigenum NRRL 3442
Penicillium gladioli NRRL 939
96,3
99,3
capacidad para producir este tipo de metabolito Las mismas fueron comparadas con las ya existentes Hongo de
sombrero Penicillium clavigerum NRRL1004 99,3
secundario. en dicha base de datos, con la finalidad de construir las LY 39.1 Tronco
Penicillium crustosum NRRL 35178
Penicillium gladioli NRRL 939
99,3
99,3
La selección de hongos filamentosos productores se matrices de similitud y los árboles filogenéticos Penicillium clavigerum NRRL1004 99,3
Penicillium crustosum NRRL 35178 99,3
realizó a partir de 201 aislamientos obtenidos de la correspondientes (Figura 2).
zona de Las Yungas (Tucumán-Argentina), un 1 2 3 4 5 6 7 8
98 LY38.4
ecosistema de amplia diversidad microbiológica y 1 LY 38.4 100% 24
LY39.1
2 LY 39.1 100% 100%
escasamente estudiada. 3 P. gladioli NRRL 939 99.3% 99.3% 100% 17
P. clavigerum NRRL 1004
4 P. crustosum NRRL 35178 99.3% 99.3% 99.6% 100%
La identificación de aislamientos fúngicos por métodos de taxonomía convencional a veces requiere 5 P. clavigerum NRRL 1004
6 A. crystallinus NRRL 5082
99.3% 99.3% 99.4% 99.3% 100% 51
P. crustosum NRRL 35178
98.9% 98.9% 98.2% 98.4% 98.2% 100%
técnicas específicas y laboriosas, con un alto insumo de tiempo y propensas a errores si se carece 7P. camembertii NRRL 874 99.1% 99.1% 99.6% 99.7% 99.1% 98.0% 100% 53
P. gladioli NRRL 939
8 P. angulare NRRL 35683 91.4% 91.4% 91.4% 91.6% 91.9% 91.7% 91.6% 100%
de la debida experiencia. A. crystallinus NRRL 5082
Por este motivo, es actualmente reconocido que la aplicación de técnicas moleculares representa P. camemberti NRRL 874
una herramienta de alto valor para la identificación rápida y precisa de los hongos filamentosos. P. angulare NRRL 35683
El objetivo de este trabajo fue identificar mediante técnicas moleculares aquellos aislamientos 0.005
fúngicos que fueron seleccionados como mejores productores de estatinas y compuestos Figura 2. Matriz de similitud y árbol filogenético construido en base a secuencias del dominio D1/D2 para los aislamientos LY 38.4, LY 39.1 y cepas
químicamente relacionados con la misma actividad. filogenéticamente cercanas.
Los aislamientos LY 38.4 y LY 39.1 mostraron estar relacionados filogenéticamente a especies del género Penicillium. Entre sí,
Bibliografía dichos aislamientos presentaron un 100% de identidad comparando tanto las secuencias de la región D1/D2 como el fragmento
completo ITS1- NL4. De acuerdo a esto, podría tratarse, entonces, de dos cepas de la misma especie pertenecientes al género
1) Goldstein J.L. & Brown M.S. (1990). Nature 343: 425-430.
2) Matar P., Rozados V.R., Roggero E.A. & Scharovsky O.G.(1998).Cancer Biotheraphy and Radiopharmaceutical 13:387- 393. Penicillium.
3) Maziére J.C., Landureau J.C., Giral P., AuclairM., Fall L. & Zagury D. (1994). Biomed. & Pharmacother. 48: 63-67.
4) Kurtzman, C. P. and C. J. Robnett (1997). Journal of Clinical Microbiology 35 (5),1216. El aislamiento LY 37.11 mostró sólo un 96,3% de similitud con una cepa de Penicillium kojigenum, pudiendo tratarse en este caso
5) Lott, T. J.; Kuykendall, R. J. and Reiss E. (1993). Yeast. 9: 1199-1206. de una nueva especie.
CONCLUSIONES
Este trabajo permitió la identificación de hongos filamentosos pertenecientes a un ecosistema ecológicamente relevante, escasamente explorado en su diversidad
Agradecimientos microbiológica, y que podría representar un reservorio de elevado potencial biotecnológico aún sin explotar. El aporte de datos referidos a la microflora de la región
es de gran importancia, ya que son escasos los estudios existentes al respecto. Por otra parte, también es posible contar actualmente con cepas de identidad
Los autores agradecen a ANPCYT (PICT 14496/03, PICT 38164/05), a la Universidad Nacional de Tucumán (CIUNT D-311) y conocida con capacidad para producir metabolitos secundarios de potencial aplicación en la industria farmacéutica, tales como las estatinas.
a CONICET (PIP 6202) por el apoyo financiero.

25. ibt
Biotecnología San Juan
ARGENTINA
Dynamic of Killer-Sensitive Population in Mixed Cultures of Wild and Mutant Oenological
Yeasts Under Fermentation and Aerobic Conditions
Y.P.MATURANO1,2, M.C.NALLY1,2, M.E. TORO1, L.I.C.DE FIGUEROA3 and F. VAZQUEZ1
Instituto de Biotecnología, San Juan, Argentina - e-mail: fvazquez@unsj.edu.ar 2 Facultad de Cs. Exactas, Físicas y Naturales, San Juan, Argentina 3 PROIMI, Tucumán,
1
Argentina
Killer yeast strains produce inhibitory glycoproteins, and enzymes that eliminate other yeasts (called Sensitive). There are not many studies about the behavior of OBJECTIVE
these yeasts under enological and aerobic conditions, specially mixed cultures of killer and sensitive strains. The enological interest in killer yeasts arises because these yeasts, To investigate the dynamic of yeast
when present, might dominate a wine fermentation. When sensitive strains are inoculated in musts, its action can be interfered or they can be eliminated by killer strains
present in musts during the fermentation process. A selected killer strain may not be completely dominant in wine fermentations possessing a native sensitive yeast flora population in mixed cultures of killer–
because the prevalence of a yeast strain in the fermentations depends on different factors like growth rate of killer and sensitive strains, the initial proportion of them, the sensitive wild and mutant strains under
sensitive yeasts susceptibility to the different killer strains toxins (Jacobs, C.J. and Van Vuuren, H.J.J., 1991).
oenological and aerobic conditions
Materials and Methods Aerobic Conditions
Microorganisms: Saccharomyces cerevisiae NCYC1006 (S); S. cerevisiae ATCC36900 (K); BSc411 (wild S. cerevisiae, K); MN41 (Acridine Orange 100
µmax BSc400 (K) = 0.3498
µmax BSc377 (S) = 0.3966
cured plasmid mutant, S); BSc400 (wild S. cerevisiae, K) BSc377 (wild S. cerevisiae, S). Microvinifications: they were realized in 250 ml Erlenmeyer 80
flasks with 150 ml of concentrated must, diluted to 21°Brix. A Müller valve (a glass device which contains 50% sulphuric acid that allows only CO2 to
% -S
60
escape from the system) aseptically closed the vessels, and incubated at 25°C. Yeast population was enumerated by the plate count technique. After 3
K
days of incubation at 25°C and 37°C (toxin inactivation temperature) , colonies were transferred at random to buffered YPD-methylene blue agar to 40
determine their sensitive or killer character (Vazquez et al. 2001). Aerobic conditions assay: they were done by batch process using a 1 L bioreactor. 20
Both strains were inoculated at a final concentration of 3x106 cells. ml-1, pH 4.6. Agitation (300 rpm), sterile aeration (0,6 l.min-1) and temperature (25°C). 0 Figure 3: 10%K/90%S
Samples were taken periodically (90 min) during 24 h. Biomass concentration was determined by direct cellular counting with hemocytometer. Assays 100
0 90 180 270 360 450 540 630 720 810 1440
Conditions : 10% K/90% S; 50% K/50% S in aerobic and anaerobic conditions
80
Results and Discussion 60
% -S
K
Fermentation Assay Figure 1: 50%K/50%S
40
20
100
0
Figure 4: 50%K/50%S
90
0 90 180 270 360 450 540 690 810 900 1440
80
Time (min)
70 %BS c400 (K) % BS c377(S )
% -S
60
K
50
40
30
100 Figure 5: 50%K/50%S 100 Figure 6: 10%K/90%S
20 µmax BSc411 (K) = 0.3303
10 80 µmax MN41 (S) = 0.4385 80
0 60
%K - S
60
0hs 24hs 72hs 120hs 168hs 216hs 264hs 336hs 408hs 504hs 600hs
40 40
100 Figure 2: 10%K/90%S
20 20
90
80 0 0
0 90 180 270 360 450 540 630 720 810 0 90 180 270 360 450 540 630 720 810
70
% BSc411 (k) % MN41 (S) Time (min)
% BSc411 (K) % MN41 (S) Time (min)
60
% -S
50
Results obtained with BSc411 (wild K) and the mutant resulting from Acridine Orange treatment MN41 (S), in aerobic conditions
K
40
are consistent with those obtained using killer and sensitive wild yeasts (Figures 5 and 6). In this case, the µmax of MN41 is 24,7% higher
30
than the specific growth rate of BSc411.
20
10 Results in Figure 7 showed that when the sample was
% killer strain at different incubation temperature
Figure 7: Proportions of K/S at 25°C and 37°C
0 incubated at 37°C (temperature of toxin inactivation), the number of
100
0hs 24hs 72hs 120hs 168hs
BS c400 (K)
216hs 264hs
BS c377(S )
336hs 408hs 504hs 600hs killer strains descended in relation with those incubated at 25°C. At
Time 80
25°C the toxin can interact with the cells that are near. The
In both conditions, (50% S-50% K; 90% S-10% K) the wild killer yeast dominated the must in temperature to inactivate the toxin is below that one considered
60
40 mutagenic (Vodkin M. 1977).
less than 24h. On the other hand, the percentage of BSc400 (K) descended from 100 - 93% -depending on
20
the culture conditions- to 11 - 7% at the last stages of the experiments (Figures 1 and 2). In spite of the
Bibliography
fact that the killer strain dominated the must in a relatively short period of time (less than 24 h), the 0
Jacobs, C.J. and Van Vuuren, H.J.J. (1991). Am. J. Enol. and Vitic. 42: 295 - 300.
sensitive one was not completely eliminated. Gradually declination of environment pH may affect both 0 12 24 48 72 96 120 144 192 216 240 264 288 336 360 408 456 600 672
Vazquez et al. (2001). Vol. 14. Food Microbiology Protocols. Humana Press Inc. Totowa, New
toxin stability and physiological state of killer cells. Those facts probably allowed the raise of BSc377 % K iller 25° C % K iller 37° C T im e (h )
Jersey.
biomass at 552 h in both experiments. Vodkin, M. (1977). J Bacteriol Oct; 132,1:346-8.
Conclusions
· Results obtained in mixed killer-sensitive culture experiments under aerobic and oenological conditions showed the influence of specific growth rates of the sensitive strains with respect to the possibility of
prevalence on the culture medium. Other factors like pH, the rate of subtract consumption may influence the strains competition in these kinds of experiments.
· Cultivation temperature of samples with the purpose of evaluate killer-sensitive proportions is an important factor for the estimation of the sensitive strain.

26. Prevalencia de Actividades Enzimáticas de Hongos Filamentosos Aislados de
Las Yungas (Tucumán, Argentina)
Viñarta, Silvana C.; Pajot, Hipólito F.
Cátedra de Microbiología Superior, Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia.
INTRODUCCIÓN Universidad Nacional de Tucumán. MATERIALES Y MÉTODOS
Las Yungas son selvas de montaña que se extienden desde Venezuela hasta El muestreo se realizó en diciembre de 2004 en un punto ubicado sobre
el noroeste argentino. Constituyen uno de los ecosistemas con mayor los 26° 43´20´´(L.S.) y 65° 17´ 21´´ (L.O.) sobre la ladera sud-oriental de
biodiversidad de Argentina y están entre los más amenazados del mundo. Sin las Sierras de Javier, a 930 m s.n.m. La temperatura en el lugar era de
embargo, existen pocos reportes acerca del potencial biotecnológico de la 20°C. Las muestras se colectaron asépticamente a partir de hongos
Act. Decolorante Lipasa Pectinasa
microbiota de esta zona. En este trabajo se aislaron 242 hongos autóctonos. silvetres, agua o suelo, a partir de 8 sitios diferentes.
Los hongos filamentosos ofrecen grandes ventajas como sistemas Las muestras de hongos fueron inoculadas en placas de Petri
productores de enzimas y otros metabolitos de elevada capacidad conteniendo medio sólido MYSA (Skaar et al, 1996). Las muestras de
biosintética, alto rendimiento, aún empleando sustratos de bajo costo y por la suelo y agua, fueron previamente diluidas e inoculadas en el mismo
versatilidad usual de sus cultivos. Por ello se estudió la capacidad de los medio. Las placas fueron incubadas a 20°C hasta la aparición de
aislamientos obtenidos Celulasa ATB. E.coli Laminarinasa colonias. Se seleccionó una colonia correspondiente a cada morfotipo
por placa, y la misma fue aislada y repicada en el mismo medio de
para producir las siguientes enzimas: amilasa, lipasa, xilanasa, beta- cultivo.
galactosidasa, proteasa, laminarinasa, quitinasa, celulasa y pectinasa. Estas Las actividades enzimáticas fueron probadas en medio MYSA con
actividades enzimáticas son de amplio uso en la fabricación de pan, quesos, diferentes sustratos: Celulasa, Carboximetil-celulosa 0.5% p/v;
cervezas, vinos, jugos de frutas, papel, detergentes y en las industrias Quitinasa, RBB-quitina 0.5-1% p/v; Xilanasa, xilano 1% p/v; Amilasa,
farmacéutica y textil. Adicionalmente se estudió la capacidad para biodecolorar almidón 1% p/v; Laminarinasa, laminarina-azure 0.05% p/v; -
así como también la actividad antimicrobiana de dichos aislamientos. galactosidasa, lactosa 0.2% p/v; Pectinasa, pectina 1% p/v; lipasa,
aceite de oliva 3% v/v; proteasa, leche descremada 0.5% p/v; actividad
decolorante, Vilmafix Blue RR-BB 200 ppm. La actividad antimicrobiana
fue ensayada de acuerdo a Kekessy and Piguet (1970).
RESULTADOS
Sitio 1 Sitio 5
Pectinasa Celulasa
Las actividades enzimáticas más frecuentemente encontradas, discriminadas por
17% 13%
Otras Otras Xilanasa
48% 44% 17%
sitio, pueden observarse en la Figura 1.
70
tajes
Amilasa
20%
Amilasa
De las 71 muestras obtenidas de ocho sitios de las Yungas, se aislaron 242 hongos 60
50
Lipasa 13%
filamentosos. 40
orcen
Laminarinasa
15% 13%
30
20
Sitio 2 Sitio 6 Los porcentajes del total de hongos aislados que dieron positivo para cada 10
P
0
Celulasa
Celulasa actividad enzimática ensayada pueden observarse en Figura 2. Se observó que las Figura 2. Porcentajes del total de hongos aislados que dieron positivo para cada actividad
.
a
sa
a
sa
t.
a
a
.
12%
in
sa
or
as
Otras
as
ac
17%
actividades enzimáticas prevalentes fueron laminarinasa y celulasa, encontradas
as
as
enzimática ensayada.
ar
ila
na
pa
ol
Pectinasa 31%
tin
ul
al
tin
te
in
Otras
m
ec
ila
15%
-G
Li
el
ro
m
ui
ec
44%
A
en 6 sitios de los 8 estudiados y pectinasa y amilasa en 4 de ellos. En cuanto a las
D
C
X
Q
P
La
B
P
Xilanasa
15%
Laminarinasa
Amilasa
12% Laminarinasa Lipasa
propiedades antimicrobianas, los resultados revelaron que, el 47% de los hongos
aislados inhibió el crecimiento de E. coli ATCC 35218 y el 46% inhibió el
22% 15%
17%
Sin Inhibición 37% Inhibe E. coli 17%
Sitio 3 Sitio 7
crecimiento de L. monocytogenes. Un 17% de los hongos fue capaz de inhibir
únicamente a E. coli ATCC 35218, y el 16% pudo inhibir exclusivamente a
Xilanasa Otras Celulasa
20% 7% 26%
Laminarinasa
L. monocytogenes. El 30% fue capaz de inhibir a ambas bacterias y un 37% no
Otras 27%
39%
Amilasa
presentó actividad antimicrobiana (Figura 3).
23% B-
Lipasa Inhibe Inhibe ambas 30%
Laminarinasa galactosidasa
18%
20%
20% L.monocytogenes
Figura 3. Actividades antimicrobianas de los hongos aislados.
16%
Sitio 4 Sitio 8
Decolorante Decolorante
14% Otras
17%
CONCLUSIONES
Otras 23%
58%
Celulasa
15%
Celulasa
17% La mayoría de las actividades ensayadas en este trabajo revisten particular interés desde el punto de vista de su potencial comercialización por
Xilanasa
13%
Laminarinasa
14% B-
galactosidasa
Pectinasa
14% tratarse, ya sea de productos de alto valor agregado tales como antibióticos o enzimas o bien, insumos utilizados a escala industrial.
15%
Esta clase de biomoléculas podrían ser empleadas como aditivos, ya sea para modificar alguna propiedad funcional del producto (proteasas,
Figura 1. Actividades enzimáticas prevalentes discriminadas por sitio de muestreo.
amilasas y lipasas en panificación, proteasas en curtiembres, pectinasas en clarificación de jugos, glucanasas en la elaboración de cervezas, etc.) o
bien, para facilitar una etapa de proceso (celulasas en la extracción de aceite y almidón, etc.). Así también cabe mencionar su utilización como
REFERENCIAS catalizadores biológicos en procesos de relevancia industrial (beta-galactosidasa en leches deslactosadas).
Las selvas Pedemontanas de las Yungas. http://www.ciencia-hoy.retina.ar/hoy83/selva.htm Por otra parte, el estudio de actividad antimicrobiana es de vital importancia, ya que puede conducir al descubrimiento de nuevos antibióticos. Ello
Skaar I. & Stenwig H. (1996). Malt-yeast extract-sucrose agar, a suitable medium for enumeration reviste un gran interés a nivel mundial teniendo en cuenta la aparición de nuevos patógenos o la existencia de algunos ya conocidos pero que que
and isolation of fungi from silage. Appl. Env. Microbiol., 62, 3614-3619. han adquirido resistencia a los antibióticos comercializados hoy en día.
Birgisson H., Delgado O.D., García Arroyo L., Hatti-Kaul R. & Mattiasson B. (2003). Cold- Todos los hongos aislados de Las Yungas presentaron al menos una de las actividades ensayadas. En virtud de los resultados encontrados y
adapted yeasts as producers of cold-active polygalacturonases. Extremophyles, 7, 185-183.
Vargas V.A., Delgado O.D., Hatti-Kaul R. & Mattiasson B. (2004). Lipase-producing
tomando como punto de partida la selección de organismos hiperproductores o productores de actividades con características innovadoras
microorganisms from a Kenyan alkaline soda lake. Biotechnol. Lett., 26, 81-86. (tolerancia a condiciones extremas, etc.) se continúa trabajando a fin de identificar los microorganismos de interés y caracterizar los metabolitos
Gómez Ramírez M., Rojas Avelizapa L.I., Rojas Avelizapa N.G. & Cruz Camarillo R. (2004). producidos.
Colloidal chitin stained with Remazol Brilliant Blue RR, a useful substrate to select chitinolytic
microorganisms and to evaluate chitinases. J. Microbiol. Meth., 56, 213-219.
Fernandes S., Geueke B., Delgado O.D., Coleman J. & Hatti-Kaul R. (2002). β-galactosidase Los resultados encontrados indican la necesidad de proteger este
from a cold-adapted bacterium: purification, characterization and application for lactose hydrolysis. ecosistema tan amenazado y resaltan la importancia de realizar estudios AGRADECIMIENTOS
Appl. Microbiol. Biotechnol., 58, 313-321. sistemáticos que permitan aprovechar más eficientemente todos los Agradecemos especialmente la participación de los
Teather R. & Wood P.J. (1982). Use of Congo Red-polysaccharide interactions in enumeration and
recursos provistos por esta reserva natural. Dres. Julia Inés Fariña, Osvaldo Delgado, Lucía Inés
characterization of cellulolytic bacteria from the bovine rumen. Appl. Env. Microbiol., 43, 777-780.
Kekessy A.M. & Piguet D.B. (1970). New method for detecting bacteriocin production. Appl. Castellanos de Figueroa y Oscar Molina, sin quienes
Microbiol., 20, 282-283. CONTACTOS este trabajo no podría haber sido realizado.
scvinarta@hotmail.com, hipolitopajot@gmail.com

27. COMO ESCRIBIR Y
PUBLICAR UN TRABAJO
CIENTÍFICO

28. Publicación científica (“paper”)
• información o comunicación (“report”)
• describe resultados originales de un
trabajo de investigación
• producto de una investigación científica
válida
• título apropiado

29. Comunicación de la ciencia:
“la comunicación es esencial para el progreso
científico”
Publicaciones científicas (ciencias biológicas y
médicas) pueden ser:
Scientific research (artículos de investigación) Publicaciones válidas de
resultados originales
Case histories (historia de casos)
Short communications (Informes breves): trabajos menos extensos o complejos,
descripción de técnicas avaladas experimentalmente (generalmente no tienen subdivisiones). Cubren
temas de estructura más simple o de interés más limitado.
Reviews (trabajos de revisiones): cubren principalmente resultados y descubrimientos
de otros científicos más que los propios, no son publicaciones originales. Tienen mucho valor ya que
sintetizan resultados de una búsqueda, ofrecen una evaluación crítica de lo publicado y se puede llegar a
conclusiones basadas en los trabajos citados. Ej. Annual Review of …………

30. Es importante tener en
cuenta que “la comunicación
es esencial para el progreso
científico”
Puede ser escrito en diferentes
idiomas pero el idioma
internacional por medio del cual
se comunican los científicos es el
INGLÉS

31. Un “scientific paper” incluye
• una redacción científica ética
• las normas de la editora
• una acción recíproca entre los
procedimientos de impresión y
publicación

32. Qué es un trabajo científico?
“scientific paper”
La información de un trabajo científico original
Una publicación científica debe:
i. contener suficiente información y que posibilite a los pares un
fácil acceso a ella
ii. los experimentos deben ser reproducibles
iii. que se puedan hacer observaciones
iv. que se puedan evaluar los procesos intelectual y
académicamente
v. disponible para la comunidad científica sin restricciones

33. Para escribir un trabajo científico
“scientific paper” se debe seguir
un orden ya establecido
título
resumen
introducción
materiales y métodos
resultados
discusión

34. Este orden es lógico, un modo
efectivo es responder a las siguientes
4 preguntas:
Cuál es el problema? La respuesta es la
Introducción
Cómo se estudió el problema? La respuesta es
Materiales y Métodos
Qué se encontró o descubrió? La respuesta es
Resultados
Qué significan esos datos o esos resultados? La
respuesta es la Discusión

35. Título La menor cantidad de palabras posibles
que describan adecuadamente el contenido del
trabajo
* Fusion between yeast protoplasts and isolated nuclei of
Fusarium moniliforme
Heluane H.1,2, Vázquez F.3, and Figueroa L.I.C. de1,2
1 PROIMI, Av. Belgrano y Pje. Caseros, 4000 Tucumán, Argentina.
2 Universidad Nacional de Tucumán, Argentina.
3 Universidad Nacional de San Juan, Argentina.
* Glycerol and Arabitol Production by PB2 Intergeneric Hybrid Obtained by
Protoplast Fusion between Saccharomyces cerevisiae and Torulaspora
delbrueckii
María E. Lucca 1, 2, John F.T. Spencer 1 and Lucía I. C. de Figueroa 1, 2
1PROIMI, Av. Belgrano y Pje. Caseros, 4000 Tucumán, Argentina
2Microbiología Superior, Facultad de Bioquímica, Universidad Nacional de Tucumán, Argentina
Short title: Glycerol and Arabitol Production by Yeasts

36. * Títulos cortos “Short titles – running title”
Título abreviado: Va en la parte superior de algunas revistas
* Palabras claves “Key words”
Son las palabras por las que se identifica el trabajo. Algunas pueden
estar en el título y otras el resumen.
* Agradecimientos “Acknowledgments”
Va luego de la discusión:
1) Ayuda significante de una persona en el laboratorio o de otro tipo.
2) Equipos usados en otros lados, cepas de cultivos que fueron
donadas u otros materiales.
3) Apoyo financiero, subsidios por medio de los cuales se pudo llevar
a cabo el trabajo experimental.

38. Resumen “Abstract”
i) Debe expresar los objetivos y alcances de la
investigación
ii) Describir la metodología empleada
iii) Resumir los resultados
iv) Enunciar la principal conclusión
v) No se pone referencias

39. Cuál es el problema? La respuesta es la
Introducción
Cómo se estudió el problema? La respuesta
es Materiales y Métodos
Qué se encontró o descubrió? La respuesta
es Resultados
Qué significan esos datos o esos resultados?
La respuesta es la Discusión

40. Introducción
i. Debe presentar claramente la naturaleza y los
antecedentes de la investigación, con
referencias
ii. Explicar porque se utilizó una determinada
metodología
iii. Para orientar al lector, la bibliografía debe ser
exacta y actualizada
iv. Mencionar los principales resultados de la
investigación*
v. Expresar la conclusión derivada de los
resultados mencionados*
* No se debe tener al lector en suspenso

41. Cuál es el problema? La respuesta es la
Introducción
Cómo se estudió el problema? La
respuesta es Materiales y Métodos
Qué se encontró o descubrió? La respuesta
es Resultados
Qué significan esos datos o esos resultados?
La respuesta es la Discusión

42. Materiales y Métodos
i) Se deben dar todos los detalles del trabajo
experimental
ii) La metodología utilizada debe ser muy bien
explicada para que se la pueda reproducir
iii) Se debe citar la bibliografía que corresponde a
un determinado método o se explica si fue un
desarrollo propio

43. Cuál es el problema? La respuesta es la
Introducción
Cómo se estudió el problema? La respuesta
es Materiales y Métodos
Qué se encontró o descubrió? La
respuesta es Resultados
Qué significan esos datos o esos resultados?
La respuesta es la Discusión

44. Resultados
i) Se detallan los datos obtenidos en el trabajo
experimental
ii) Se deben respaldar los resultados explicados
en el texto con tablas, figuras, gráficos, fotos,
etc.
iii) Estos presentan los resultados en forma
condensada y ayudan a clarificar los datos
obtenidos

45. Cuál es el problema? La respuesta es la
Introducción
Cómo se estudió el problema? La respuesta
es Materiales y Métodos
Qué se encontró o descubrió? La respuesta
es Resultados
Qué significan esos datos o esos
resultados? La respuesta es la Discusión

46. Discusión
i) Se presentan los principios, relaciones y
generalizaciones mostradas en los resultados
ii) Se debe expresar como los resultados y las
interpretaciones concuerdan o no con otros
trabajos previamente publicados
iii) Se debe discutir las implicancias teóricas del
trabajo y también las posibles aplicaciones
prácticas o las proyecciones del mismo

47. COMO SE JUSTIFICAN LOS RESULTADOS
DEL TRABAJO REALIZADO
Tablas: cuando hay pocos valores numéricos y se los quiere
resaltar. Son valores exactos
Gráficos de barras: cuando los valores no son continuos.
Tienen un sólo eje continuo. Para hacer comparaciones,
para mostrar diferencias
Gráficos de tortas: relaciones de fracciones o porcentajes
respecto al total
Gráficos en ejes cartesianos: abscisas y ordenadas, relación
entre un eje X y un Y. Pueden ser curvas o rectas. Relación
entre dos o más variables
Esquemas, fotos, microfotografías: para describir un objeto
íntegro

48. Tablas: cuando hay pocos valores numéricos y se
los quiere resaltar. Son valores exactos
Gráficos de barras: cuando los valores no son
continuos. Tienen un sólo eje continuo. Para hacer
comparaciones, para mostrar diferencias
Gráficos de tortas: relaciones de fracciones o
porcentajes respecto al total
Gráficos en ejes cartesianos: abscisas y
ordenadas, relación entre un eje X y un Y. Pueden
ser curvas o rectas. Relación entre dos o más
variables
Esquemas, fotos, microfotografías: para describir
un objeto íntegro

49. Ejemplo de tabla:
Table 2: Maximum concentrations and yields of xylitol in YNB medium
containing 20 g/l xylose.
STRAINS XYLITOL XYLITOL RESIDUAL FERMENTATION
(g/l) YIELDa XYLOSE (g/l) TIME (h)
F. moniliforme 0 0 1.1 144
PF3 4.3 0.25 4.3 32
SF64 4.4 0.29 4.4 32
SF65 3.7 0.19 3.7 44
SF79 2.0 0.11 2.0 28
SF83 4.9 0.29 4.9 36
a
Expressed as g xylitol/g xylose consumed
Batch fermentations were carried out in 250 ml flasks containing 50 ml of the
medium at 30ºC and 100 rpm. The cultures were sampled periodically. Xylitol and
xylose were measured by HPLC.

50. Tablas: cuando hay pocos valores numéricos y se
los quiere resaltar. Son valores exactos
Gráficos de barras: cuando los valores no son
continuos. Tienen un sólo eje continuo. Para hacer
comparaciones, para mostrar diferencias
Gráficos de tortas: relaciones de fracciones o
porcentajes respecto al total
Gráficos en ejes cartesianos: abscisas y
ordenadas, relación entre un eje X y un Y. Pueden
ser curvas o rectas. Relación entre dos o más
variables
Esquemas, fotos, microfotografías: para describir
un objeto íntegro

51. Gráfico de barras:
5a 240
220
200
Ethanol, glycerol, arabitol,
180
160
glucose (g/l)
140
120
100
80
60
40
20
0
Ethanol Glycerol Arabitol Residual
Glucose
S. cerevisiae T. delb rueckii PB2 hyb rid

52. Tablas: cuando hay pocos valores numéricos y se
los quiere resaltar. Son valores exactos
Gráficos de barras: cuando los valores no son
continuos. Tienen un sólo eje continuo. Para hacer
comparaciones, para mostrar diferencias
Gráficos de tortas: relaciones de fracciones o
porcentajes respecto al total
Gráficos en ejes cartesianos: abscisas y
ordenadas, relación entre un eje X y un Y. Pueden
ser curvas o rectas. Relación entre dos o más
variables
Esquemas, fotos, microfotografías: para describir
un objeto íntegro

53. Gráfico de tortas:
Otros Canadá Latinoamérica
10% 5% 7%
Japón
9%
Estados Unidos
29%
Asia
15%
Europa
25%
Figura 1: Consumo mundial de glicerol por regiones

54. Tablas: cuando hay pocos valores numéricos y se
los quiere resaltar. Son valores exactos
Gráficos de barras: cuando los valores no son
continuos. Tienen un sólo eje continuo. Para hacer
comparaciones, para mostrar diferencias
Gráficos de tortas: relaciones de fracciones o
porcentajes respecto al total
Gráficos en ejes cartesianos: abscisas y
ordenadas, relación entre un eje X y un Y. Pueden
ser curvas o rectas. Relación entre dos o más
variables
Esquemas, fotos, microfotografías: para describir
un objeto íntegro

55. Gráfico con ejes cartesianos:
2a glycerol arabitol ethanol glucose
100 400
350
arabitol,ethanol (g/l)
75 300
Glucose (g/l)
250
Glycerol,
50 200
150
25 100
50
0 0
0 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120
time (h)
Figure 2: Batch culture of PB2 hybrid in LH fermentor with YEPD-
400 at 30°C, initial pH 4.0, with agitation (500 rpm) and aeration:
(a) glycerol, arabitol, ethanol and residual glucose (g/l)

56. Gráfico con ejes cartesianos:

57. Tablas: cuando hay pocos valores numéricos y se
los quiere resaltar. Son valores exactos
Gráficos de barras: cuando los valores no son
continuos. Tienen un sólo eje continuo. Para hacer
comparaciones, para mostrar diferencias
Gráficos de tortas: relaciones de fracciones o
porcentajes respecto al total
Gráficos en ejes cartesianos: abscisas y
ordenadas, relación entre un eje X y un Y. Pueden
ser curvas o rectas. Relación entre dos o más
variables
Esquemas, fotos, microfotografías: para describir
un objeto íntegro

58. Esquema:

59. 0.05
Esquema:
Árbol
filogenético 100 C. parapsilosis L11352
C. parapsilosis L47109
95 C. albicans AJ249486.
100
C. dubliniensis U96719
100 C.stellatoidea L47114
87 C. tropicalis ASM III AF268095
60 C. tropicalis L11349
C. tropicalis L47112
100
C. viswanathii U70510
S. cerevisiae AB01804
Figure 3: Phylogenetic placement of ASM III derived from maximum parsimony analysis of 26S
rDNA D1/D2 domain sequences from related species. S. cerevisiae (AB01804) was included as
outgroup and 5,000 bootstraps were performed.

61. Foto: Gel de electroforesis. Separación de fragmentos de ADN de
levaduras, previamente amplificados por PCR
1 2 3 M 1 2 3 1 2 3 M 1 2 3 1 2 3 1 2 3 M
500 bp
A B C D E F
Figure 2: RFLP of ITS1-NL4 regions. Lanes: 1, S. cerevisiae ATCC 32052; 2, ASM III;
3, C. tropicalis ATCC 20311. A, undigested PCR products; B, BspdI digested PCR
products; C, SspI digested PCR products; D, EcoRI digested PCR products; E, BamHI
digested PCR products; F, HaeIII digested PCR products; M, molecular weight marker
100 bp DNA Ladder.

62. Foto:
Formación de
protoplastos de
un hongo
filamentoso

63. Microfotografías obtenidas con microscopio electrónico de transmisión
Transmission electron micrographs of C. guilliermondii
Transmission electron micrographs of R. mucilaginosa

64. Microfotografías obtenidas con microscopio electrónico de barrido
Scanning electron micrographs of C. guilliermondii Scanning electron micrographs of R. mucilaginosa
Scanning electron micrographs
of isolated yeasts

66. REFERENCES
Adler L, Blomberg A, Nilsson A. 1985. Glycerol metabolism and
osmoregulation in the salt-tolerant yeast Debaryomyces hansenii. J Bacteriol 162:
300-306
Blomerg A, Adler L. 1992. Physiology of osmotolerance in fungi. Adv Microbiol
Physiol 33: 145-212
Brown AD. 1978. Compatible solutes and extreme water stress in eukaryotic
microorganisms. Adv Microbiol Physiol 17: 181-242
Deak T, Beuchat LR. 1993. Yeasts associated with fruit juice concentrates. J
Food Protection 56: 777-782
Groleau D, Chevalier P, Tse Hing Yuen TLS. 1995. Production of polyols and
ethanol by the osmophilic yeast Zygosaccharomyces rouxii. Biotechnol Lett 17:
315-320
Spencer JFT, Spencer DM. 1978. Production of polyhydroxy alcohols
by osmotolerant yeast. In: Rose AH (ed) Economic Microbiology.
Academic Press, London, pp 393-425

67. References
Altamirano A, Vázquez F & LIC de Figueroa (2000) Isolation and identification of
xylitol-producing yeasts from agricultural residues. Folia Microbiol. 45: 255-258
Belloch C, Barrio E, Garcia MD & Querol A (1998) Phylogenetic reconstruction of
the yeast genus Kluyveromyces: restriction map analysis of the 5.8S rRNA gene
and the two ribosomal internal transcribed spacers. System. Appl. Microbiol. 21:
266-273
Bignell GR & Evans IH (1990) Localization of glucoamylase genes of
Saccharomyces cerevisiae by pulsed field gel electrophoresis. Antonie van
Leeuwenhoek 58: 49-55
Yarrow D. (1998) Methods for the isolation, maintenance and
identification of yeasts. In: The yeasts, A taxonomic study, 4th
edn (Kurtzman CP & Fell JW Eds.), pp. 77-100. Elsevier Science
BV, Amsterdam.
Faria LF, Gimenes MA, Nobrega R & Pereira NJ (2002) Influence of oxygen
availability on cell growth and xylitol production by Candida guilliermondii. Appl.
Biochem. Biotechnol. 98: 449-458

68. Dónde publicar los
resultados?
Existen formas para analizar la calidad de
un “Journal”. Varían año a año.
Los “Journals” están agrupados por áreas
temáticas.

69. “Journal Citation Reports”, que son
los volúmenes anuales del “Science
Citation Index (SCI)” (bases de
datos): clasifica los “Journals” de
acuerdo a su IF.
• Número de veces que se cita un trabajo
publicado en el “Journal”, en otros “papers”
durante un año.
• Relaciones estadísticas.

70. “Impact Factor”: es un indicador
bibliométrico elaborado por el “Institute
for Scientific Information (ISI)”. Es el
promedio entre el número de veces que
un “paper”, publicado en un “Journal”, ha
sido citado en los dos años anteriores al
que se calcula el Factor de Impacto.

71. Otro concepto importante es el de una
“Citation Classic”: publicación muy citada e
identificada por el “Institute for Scientific
Information (ISI)” que publica el “SCI”
Difieren de acuerdo a las disciplinas
Bioquímica: publicación citada más de 350 o 400 veces

72. Conclusión
La comunidad científica
“Journals” que poseen distinto grado de “prestigio” medidos
objetivamente
La comparación de los “Impact Factors” de “Journals” (en un
campo particular)
Conduce a una real información para evaluar las distintas
revistas

73. Subsidios para investigación científica
Ejemplos de entidades nacionales que otorgan subsidios:
CIUNT - CONICET - Agencia de Promoción C y T – Empresas
privadas
Subsidios Internacionales: UE y los otros que dependen de
cada país

74. DESCRIPCIÓN TÉCNICA:
* OBJETIVOS GENERALES
Objetivos Generales e impacto: Identificar el problema general en estudio, contextualizar el
problema a nivel local, identificar que parte del problema se intenta abordar /contribuir con la
investigación.
* OBJETIVOS ESPECÍFICOS E HIPÓTESIS DE TRABAJO
Identificar los Objetivos específicos relacionados con el problema que se abordará. Describir la
hipótesis de trabajo y como se abordará el problema en cuestión a través de la experimentación
y estudio.
* RELEVANCIA DEL PROBLEMA
Desarrollar la importancia e impacto a nivel local, general y para la especialidad del problema,
los objetivos y el conocimiento que se generará.
Describir antecedentes, avances y el estado del arte, búsqueda bibliográfica actualizada.
* RESULTADOS PRELIMINARES Y APORTES DEL GRUPO AL ESTUDIO DEL
PROBLEMA EN CUESTIÓN
Describir con suficiente detalle los resultados ya obtenidos por el grupo, sean publicados o no,
que indican la capacidad técnica del grupo y la dedicación previa del grupo para el estudio
propuesto.
* CONSTRUCCIÓN DE LA HIPÓTESIS y JUSTIFICACIÓN GENERAL DE LA
METODOLOGÍA DE TRABAJO
A partir de lo expuesto en la introducción y los datos preliminares proponer la hipótesis de
trabajo y justificar la metodología propuesta.
* TIPO DE DISEÑO DE INVESTIGACIÓN Y MÉTODOS
Se deberá organizar el estudio propuesto en secciones mayores, correspondientes a los
objetivos específicos, y, secciones menores, correspondientes a experimentos específicos.

75. Subsidios para investigación científica
IMPACTOS:
* Sobre las áreas disciplinares o campos de aplicación
Detalle el grado en que su proyecto explora enfoques originales e innovativos
haciendo referencia al estado del arte en el tema. Resalte los aspectos referidos
a la creatividad y el impacto en el conocimiento científico y/o tecnológico.
* Sobre las capacidades institucionales:
Incorpore información breve referente al modo en que el proyecto facilitará el
desarrollo y/o capacitación de recursos humanos; los vínculos con otros grupos,
centros, empresas y entidades tanto nacionales como extranjeras.
* Sobre el sector socio-económico y/o sector productivo
Describa de qué manera el proyecto afectará real o potencialmente a sectores
económicos (industriales y/o de servicios) y grupos sociales; indique el alcance
del proyecto (regional, local, nacional o internacional).

76. Bibliografía consultada:
Matthews J.R., Bowen J.M. and Matthews R.W. (2000). Successful scientific writing.
A step-by-step guide for the biological and medical sciences. Cambridge University
Press. ISBN 0 521 78962 1.
Day R.A. (1998). How to write and publish a scientific paper. ISI press, University
City Science Center. ISBN 0 89495 008 8.
http://www.foodprotection.org/publications/jfpImpactFactors.asp
http://www.garfield.library.upenn.edu/papers/multiple_meanings_impfactor.html
http://www.sciencegateway.org/impact/
http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/writing/HTWtoc.h
tml