18. COLESTEROL EN FRACCIONES LIPOPROTEÍCAS
El colesterol circula a través de la sangre asociado a proteínas específicas formando complejos
macromoleculares denominados lipoproteínas.
Estas lipoproteínas según su densidad se clasifican en tres grupos (por ultra centrifugación) a saber: VLDL
(Very Low Density Lipoprotein), LDL (Low Density Lipoprotein) y HDL (High Density Lipoprotein) cada uno
con sus propiedades y papel metabólico diferentes como podemos indicar:
❖Lipoproteínas VLDL transportan los triglicéridos desde el hígado hacia los tejidos
❖Lipoproteínas LDL transportan el colesterol por la sangre
❖Lipoproteínas HDL recogen el exceso de colesterol de los tejidos y los llevan hasta el hígado para su
eliminación.
❖Los niveles de colesterol asociado a LDL correlacionan directamente con el riego cardiovascular, mientras el
colesterol asociado a HDL presenta una relación inversa.
20. PROCEDIMIENTO para colesterol total.
1.- Seleccionar tres tubos de ensayo y completar en el siguiente cuadro:
B S D
Agua 20 μL - -
Standard 200mg/dL - 20μL -
Muestra - - 20μ
Reactivo de trabajo 2 mL 2 mL 2 mL
Absorbancia , 505 nm 0.0
Mezclar e incubar 5 minutos a 37 ºC y hacer la lectura de su absorvancia
CALCULO DE RESULTADOS
CT Colesterol (g/L) = D.O. desconocido * f , F= Conc. Stand / ads stan
Valores de referencia › 200 mg/dl
21. PROCEDIMIENTO (para cuantificar de HDL colesterol)
1. En un tubo medir 0.5 mL (500μL) de muestra, y agregar 50μL de
reactivo precipitante
2. Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 30 -
40 minutos en refrigerador (4 – 10ºC) o 15 minutos en baño de agua a la
misma temperatura (No colocar en congelador)
3. Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m. y usar el sobrenadante líquido
como muestra
4. En tres tubos de fotocolorímetro marcados B, S y D colocar:
B S D
Sobrenadante - - 100μL
Standard - 20μL -
Reactivo de trabajo 2 mL 2 mL 2 mL
Absorbancia , 505 nm 0.0
22. • Mezclar e incubar 5 minutos a 37 ºC si se usa el reactivo de trabajo de
colestat enzimático AA/liquida o 15 minutos a 37 ºC cuando se usa el
de colestat enzimático. Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 nm en
espectrofotómetro con filtro verde, llevando a cero con el blanco.
• CALCULO DE RESULTADOS
• HDL Colesterol (g/L) = D.O. desconocido * f ,
f = 0.762/S
• Valores de referencia: 0.40 – 0.60 g/L
23. PROCEDIMIENTO (para cuantificar de LDL colesterol)
En un tubo colocar 200 μL de muestra y 100 μL del reactivo precipitante
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 15 minutos
en un baño de 20 – 25ºC.
Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m. separar inmediatamente el
sobrenadante
Usar el sobrenadante como muestra para el ensayo colorimétrico.
En tres tubos de fotocolorímetro marcados B, S y D colocar:
B S D
Sobrenadante - - 100μL
Standard - 20μL -
Reactivo de trabajo 2 mL 2 mL 2 mL
Absorbancia , 505 nm
24. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 ºC si se usa el reactivo de trabajo de colestat enzimático AA/liquida
o 15 minutos a 37 ºC si se usa el de colestat enzimático. Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 nm en
espectrofotómetro con filtro verde, llevando a cero con el blanco.
CALCULO DE RESULTADOS
LDL Colesterol (g/L) = Colesterol total (*) – (D x f)
f = 0.624/S
(*) Valor obtenido con colestat enzimático o colestat enzimático AA/ liquida.
Valores de referencia
The National Cholesterol Education Program provee los siguientes valores de LDL colesterol:
Riesgo bajo o nulo: Menores a 1.29 g/L
Riego moderado a elevado: Valores entre 1.30 – 1.89 g/L
Riesgo muy elevado: ≥ 1.90 g/L
CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son las características importantes del colesterol?
2. Calcular la concentración del HDL y LDL colesterol en la muestra y compare estos valores
experimentales con los de referencia (autor, titulo, edición, capitulo y página)
3. ¿Explicar cuáles son las diferencias entre HDL, LDL y VLDL colesterol?
4. ¿Cuál de estas lipoproteínas es el que causa más riesgo en la salud? Explique.
