Técnica histologíca

1. CÁTEDRA DE
HISTOLOGÍA MÉDICA
Y BIOLOGÍA CELULAR
TÉCNICA
HISTOLÓGICA
2022
DR. ADEMAR ERIK VEGA ROJAS

2. ELEMENTOS
LABORATORIO
EQUIPADO
TEJIDOS/FLUIDOS
CORPORALES
MATERIAL E INSTRUMENTAL
(TINCIONES – MICROTOMO)

3. PASOS
GENERALES DE LA
TÉCNICA
HISTOLÓGICA

5. DEFINICIÓN
SE DENOMINAN ASÍ AL CONJUNTO DE
PROCEDIMIENTOS APLICADOS A UN
TEJIDO (ANIMAL O VEGETAL) CON LA
FINALIDAD DE ESTUDIAR SUS
COMPONENTES MORFOLÓGICOS A
TRAVÉS DE LOS MICROSCOPIOS
FOTÓNICOS Y ELECTRÓNICOS
TÉCNICA HISTOLÓGICA
Es una serie secuencial y
ordenada de pasos a través de
los cuales una muestra de tejido
llega a transformarse en
delgados cortes coloreados
capaces de ser observados al
microscopio.

6. PASOS DE LA TECNICA
HISTOLOGICA
1.-
OBTENCIÓN
DE LA DE
MUESTRA
2.-
FIJACIÓN
3.-
DESHIDRAT
ACIÓN
4.-
ACLARAMIE
NTO
5.-
INCLUSIÓ
N
6.- CORTE
7.-
TINCIÓN
8.-
MONTAJE

7. 1. OBTENCION DE LA MUESTRA
• LAS BIOPSIAS • LAS NECROPSIAS

8. OTRAS
• BROCHAJE
• FROTIS
• DESGASTE
• DESCALCIFICACIÓN:
- ÁCIDO CLORHÍDRICO
- ÁCIDO NÍTRICO
- AGUA DESTILADA

9. 2.- FIJACIÓN.
• TRATAMIENTO DEL TEJIDO CON
SUSTANCIAS QUÍMICAS QUE EVITAN
LA DEGENERACIÓN Y CAMBIOS EN
LAS CÉLULAS, CONSERVANDO SU
CONFIGURACIÓN NORMAL.
PROPIEDADES DE LOS FIJADORES.- LOS FIJADORES NECESITAN DE
CIERTAS CUALIDADES, TALES COMO:
• PODER DE PENETRACIÓN.- ES DECIR QUE PENETRE EL FIJADOR LO
MÁS PROFUNDO POSIBLE EN TODA LA SUSTANCIA ORGÁNICA,
LLENANDO TODOS LOS INTERSTICIOS DE DICHA PIEZA.
• PODER DE CONSERVACIÓN.- ESTE PODER ES NECESARIO PARA QUE
LA PIEZA SE CONSERVE EL MAYOR TIEMPO POSIBLE, EVITANDO SU
DESTRUCCIÓN O SU PUTREFACCIÓN.
• PODER DE ENDURECER.- ESTE PODER FACILITA LOS CORTES ULTE-
RIORES EVITANDO LAS DEFORMACIONES.
• PODER DE INSOLUBILIZAR.- A FIN DE QUE SE MANTENGA LA PIEZA
SIN SUFRIR LOS EFECTOS DE LA SOLUBILIZACIÓN EN LAS
MANIPULACIONES POSTERIORES.
• PODER MORDIENTE.- TIENE POR OBJETO FACILITAR LA PENETRA-
CIÓN DE LOS COLORANTES Y ADEMÁS EL DE FIJARLOS.
Se debe matar a las células, evitar la autolisis
postmortem y la invasión de microorganismos

10. FIJADORES SIMPLES
FIJADORES COMPUESTOS
CLASIFICACIÓN DE LOS FIJADORES
FÍSICOS
QUÍMICOS
DESECACIÓN
CALOR SECO
CALOR HÚMEDO
CONGELACIÓN

11. EJEMPLOS DE FIJADORES QUÍMICOS
Solución de Zenker (dicromato de potasio, cloruro de mercurio y acido acético)
 Fijadores simples:
formol 10%, alcohol etílico absoluto o al 96%, alcohol metílico, ácido ósmico
1-2%, dicromatode potasio 3-5%
 Fijadores compuestos:
Solución de Bouin (ácido pícrico, formol, ácido acético)
Solución de Helly (dicromato de potasio, cloruro de mercurio y formol)

12. CARACTERÍSTICAS DE UN BUEN AGENTE FIJADOR
 Accesible-económico
 Que actúe con rapidez, matando y fijando a las células
antes de que aparezcan los cambios degenerativos
 Alto poder de penetración
 Conservar, en lo posible, las características del
tejido
 Que permita manipular los tejidos fijados

13. 3. DESHIDRATACIÓN
• CONSISTE EN QUITAR EL AGUA DE LA PIEZA YA
FIJADA. PRIMERAMENTE SE LAVA EN AGUA PARA
QUITAR EL EXCESO DE FORMOL, LUEGO SE PASA LA
PIEZA AL PRIMER ALCOHOL DE 70 A 75% (75
PARTES DE ALCOHOL POR 25 DE AGUA). SE DEJA EN
ESTE ALCOHOL POR 24 HORAS. LUEGO SE PASA AL
SEGUNDO ALCOHOL QUE ES DE 85% DURANTE 24
HORAS. SE PASA LUEGO AL TERCER ALCOHOL, DE
95% POR 12 O 24 HORAS. EL ÚLTIMO DE LOS
ALCOHOLES ES EL ABSOLUTO (100%).
CONSIDERANDO QUE LA PIEZA HA PERDIDO LA
TOTALIDAD DE AGUA.

14. 4. ACLARACIÓN
• SE PASA LA PIEZA AL LÍQUIDO ACLARANTE
QUE EL XILOL DURANTE ALGUNAS HORAS,
PARA COMPROBAR SI LA MATERIA
ORGÁNICA TIENE ALGO DE AGUA. POR EL
XILOL, LA PIEZA SE VUELVE TRANSPARENTE,
PERO SI LA PIEZA SE ENTURBIA, SIGNIFICA
QUE LA PIEZA NO ESTÁ BIEN DESHIDRA-
TADA, POR LO TANTO, HAY QUE VOLVER A
LOS ALCOHOLES.

15. 5. INCLUSIÓN
• E1 SIGUIENTE PASO ES LA INCLUSIÓN EN
PARAFINA. PARA LO CUAL SE PROCEDE DE LA
MANERA SIGUIENTE: PRIMERAMENTE SE REALIZA
LA DESHIDRATACIÓN DE LA PIEZA POR MEDIO DE
LOS ALCOHOLES COMO LO EXPLICADO
PÁRRAFO ARRIBA, LUEGO PASAMOS A LA
PRIMERA PARAFINA, FUNDIDA Y CONTENIDA EN
UN POCILLO QUE DEBE CAMBIARSE TRES VECES
CADA DOS HORAS, LUEGO SE LA COLOCA EN LA
ESTUFA HISTOLÓGICA A 55 °C A FIN DE QUE LA
PARAFINA PENETRE A TODOS, LOS INTERSTICIOS
DE LA PIEZA. SE LA COLOCA LUEGO EN OTRA
PARAFINA, LLAMADA SEGUNDA PARAFINA

16. 6.- CORTES
• SE REALIZA EL CORTE CON
MICRÓTOMO
• LOS CORTES TIENEN UN ESPESOR
DE DE 5 A 8 MICROMETROS.
Llamado también Micrótomo de MINOT, posee una platina
donde se sujeta el taco de Parafina, la cual viene al encuentro de
una cuchilla mediante un sistema de ruedas dentadas.

17. 7. TINCIÓN
• CONSISTE EN DAR COLOR A LA
PREPARACIÓN, LO CUAL SE LOGRA
MEDIANTE LA UTILIZACIÓN DE LOS
COLORANTES Y SE CONSIGUE ASÍ QUE LAS
PIEZAS ORGÁNICAS OBTENGAN EL MISMO
ÍNDICE DE REFRACCIÓN QUE LOS
COLORANTES, MODIFICANDO LA LONGITUD
DE ONDA DE LA LUZ.

18. COLORANTES Y REACCIONES HISTOLOGICAS
COLORANTES RESULTADO
Hematoxilina Azul: núcleo; regiones acidas del citoplasma; matriz de
cartílago
Eosina Rosa: regiones básicas del citoplasma; fibras de
colágena
Tricromica de Masson
Azul oscuro: núcleo; Rojo: musculo; queratina;
citoplasma.
Azul claro: musinogeno; colagena
Colorante de orceina para fibras elásticas Pardo: fibras elásticas
Colorante de Weigert para fibras elasticas Azul: fibras elásticas
Tinciones Argenticas Negro: fibras reticulares
Hematoxilina ferrica Negro: estriaciones de musculo; núcleos; eritrocitos
Acido peryodico de Schiff Magenta: Moléculas ricas en glucógeno y carbohidratos.
Colorantes de Wright y Giemsa
Se utiliza para Tinciones diferenciadas de células
hematicas
Rosa: Eritrocitos, gránulos de eusinofilos.
Purpura; núcleos de leucocitos, gránulos basofilos.
Azul:citoplasma de monocitos y linfocitos.

19. ARTEFACTOS
• ENCOGIMIENTO
 ESTE PUEDE SER PRODUCIDO
POR LAS DIFERENTES
SUSTANCIAS QUÍMICAS CON QUE
SE TRATAN LOS TEJIDOS,
PRINCIPALMENTE FIJADORES, O
POR EL CALOR DE LA PARAFINA
DERRETIDA. TIENDE A SER
IRREGULAR, LO QUE PRODUCE LA
SEPARACIÓN DE PORCIONES DE
TEJIDO QUE EN VIDA ESTABAN
CONTIGUAS Y LA APARICIÓN DE
ESPACIOS VACIOS.
• PRECIPITADOS
• SI EL FIJADOR SE AMORTIGUA
DE MANERA INADECUADA O NO
SE QUITA A LA PERFECCIÓN DE
LOS TEJIDOS, SUS CRISTALES
SE PUEDEN PRECIPITAR Y
PERMANECER EN LA
PREPARACIÓN.
• Debido a las técnicas usadas en la preparación, los cortes pueden hacer representaciones
precisas. Estas alteraciones producidas por la manipulación; se llaman artefactos entre ellos
tenemos:

20. • PLIEGUES Y ARRUGAS
• LOS CORTES SON TAN
DELGADOS QUE CON
FRECUENCIA SE PLIEGAN O SE
ARRUGAN AL HACERSE EL
CORTE O AL COLOCARLOS EN
LAS LAMINILLAS,
APARECIENDO UNA
COLORACIÓN MAS OSCURA.
• MANEJO POCO CUIDADOSO
• EL MANEJO POCO
CUIDADOSO DEL TEJIDO
FRESCO AL EXTIRPARLO DE
UN ANIMAL, COMO EL
PELLIZCAMIENTO POR LAS
PINZAS O EL
APLASTAMIENTO POR
TIJERAS DESAFILADAS,
PRODUCE MUTILACIÓN DEL
MISMO.
Defectos en la cuchilla del
micrótomo.
• Si el filo de la cuchilla esta mellado, esto
crea defectos en el corte que aparecen
como líneas rectas de color pálido a través
de el

21. 8. MONTAJE
• ESTE PROCEDIMIENTO SE REALIZA PONIENDO
UNA GOTA DE BÁLSAMO-DEL CANADÁ, SOBRE
LA PIEZA Y APLICA POR ENCIMA EL CUBRE-
OBJETOS PARA LUEGO, DESPUÉS DE QUE SER
SECADO PROCEDER A LA OBSERVACIÓN POR
MEDIO DEL MICROSCOPIO. UNA PLACA
HISTOLÓGICA DESPUÉS DE REALIZADO EL
MONTAJE, PUEDE SER MANTENIDA POR
TIEMPO INDEFINIDO SIN DETERIORARSE NI
SURGIR CAMBIOS DE NINGUNA ÍNDOLE.

22. 9. OBSERVACIÓN
• CONSISTE EN OBSERVAR NUESTRO TEJIDO
PROCESADO CON EL USO DEL
MICROSCOPIO.

23. TINCIONES ESPECIALES
ANEXOS
ANEXOS