In vitro evidence of chain transfer to tetraethylene glycolsin enzymatic polymerizationof polyhydroxyalkanoate

1. In vitro evidence of chain transfer
to tetraethylene glycolsin
enzymatic polymerization of
polyhydroxyalkanoate
Josu Azkune Cordón

2.  Introducción
 Materiales y métodos
 Resultados
 Discusión
 Bibliografía
Índice

3.  Polihidroxialcanoatos (PHA)
 Bioplásticos
 Posibles sustitutos de los pasticos convencionales
 Interés industrial
 Interés biotecnológico
 Muy versátiles
 Gran variedad
 Numerosos estudios
Introducción

4.  Los P(3HB)
Introducción
Sintesis in vitro de P(3HB) utilizando como precursores β-butirolactona y CoA
utilizando PhaC (PHA sintasa de D. acidovorans), FadB1x (S-hidratasa de P. putida) y
PhaJ (R-hidratasa de A. caviae)

5.  Obtención del plasmido
 D. acidovorans, A. caviae y P. putida en E. coli
 Preparar los enzimas
 Ensayos enzimático
Materiales y métodos
Análisis de SDS-PAGE de las enzimas
preparas en este estudio.

6.  Polimerización in vitro de P(3HB) utilizando
β-butirolactona
 Análisis de HPLC
 Caracterización del polímero
 Relación P(3HB)=Nβ/N3HB
 Donde N=W/Mn
Materiales y métodos

7.  Actividades específicas de PhaCDa , PhaJAc y FadB1x
Resultados
Composición de derivados de CoA después de las reacciones enzimáticas.

8. Resultados
a: Reactivos de polimerización a 30ºC en 24h en 4ml con 100mM KPi (pH8.0)
con 50mM de y/o 5mM (R)-3HB-CoA
b: Todas las concentraciones enzimáticas son de 1U/ml
c: Número relativo de cadenas del polímero utilizando como control el
experimento de (R)-3HB-CoA plus PhaCDa)
d: Conversion molar de β-butirolactona en P(3HB)
Polimerización in vitro de P(3HB) a partir de β-butirolactona y/o (R)-3HB-CoA

9.  Efecto de los TEGs y los PEGs en la polimerización in
vitro de los P(3HB)
Resultados
Polimerización in vitro de P(3HB) dese β-butirolactona con suplementación de
TEGs o PEGs
a: número relativo de polímeros de cadena utilizando como control la tabla 2
b: conversión molar de β-butirolactona en P(3HB)

10.  TEGs y PEGs capaces de reaccionar con β-
butirolactona
 PHA sintasa capaz de reaccionar con los TEG
 Polimerización enzimática de PHA
 Primera evidencia de reacciones de transferencia de
cadena in vitro
Discusión

11.  https://biotechspain.com/es/tema.cfm?iid=bioplasticos
 Chemical Society Reviews 38(8):2434-46 · September 2009
Guo-Qiang Chen ; A microbial polyhydroxyalkanoates
(PHA) based bio- and materials industry
 Appl Microbiol Biotechnol (2013) 97:4821–4829
DOI 10.1007/s00253-013-4798-9 In vitro evidence
of chain transfer to tetraethylene glycols in
enzymatic polymerization of
polyhydroxyalkanoate
Bibliografía