El documento trata sobre la hematimetría, que es el estudio cuantitativo y cualitativo de la sangre periférica a través de contadores automáticos, los cuales permiten medir parámetros como recuentos de glóbulos rojos, hemoglobina, hematocrito, volumen corpuscular medio, recuento de plaquetas y recuento diferencial de leucocitos. Estos análisis son importantes para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades hematológicas y no hematológicas.

1. HEMATIMETRIA: ESTUDIO DE LA SANGRE PERIFERICA CRISTINA CARRILLO RAMIREZ MEDICO RESIDENTE DE PATOLOGIA CLINICA HOSPITAL NACIONAL “LUIS N SAENZ” PNP

2. HEMATIMETRIA El estudio de la sangre periférica es de suma importancia en el diagnóstico y tratamiento de las enfermedades hematológicas (y no hematológicas). Tejido más fácilmente accesible.

3. HEMATIMETRIA Estudio cuantitativo (propiamente dicho). Estudio cualitativo. Permite: Diagnóstico de enfermedades específicas. Da perspectivas en la fisiopatología de determinado proceso. Medición de respuesta al tratamiento.

4. ¿Para qué? ¿Está produciendo la MO suficiente cantidad de células maduras para todas las estirpes celulares? ¿El desarrollo de cada una de las series es cualitativamente normal? Las medidas cuantitativas obtenidas por los contadores automáticos son bastante fiables y permiten de una manera eficiente identificar alteraciones groseras en la hematopoyesis.

5. Sin embargo… El estudio morfológico es esencial para confirmar ciertos hallazgos cuantitativos y cualitativos , e investigar cualitativamente las posibles diferenciaciones anormales de las estirpes celulares.  “ Guiado en el estudio morfológico, el médico puede concentrarse más en la médula ósea o en las enfermedades sistémicas que de forma secundaria afectan al sistema hematopoyético”

6. AUTOMATIZACION EN EL LABORATORIO DE HEMATOLOGIA Analizadores automáticos en Hematologia: 1950 “Principio de la electroconductividad” Wallace Coulter Surge por la necesidad de dar solución al número cada vez mayor de solicitudes recibidas y al aumento del número de sustancias a determinar , así como por la necesidad de controlar mejor todos los pasos y manipulaciones realizadas de forma manual y para que los resultados sean emitidos con mayor objetividad y fiabilidad

7. EVOLUCION DIAGNOSTICA Primera Generación: C.H. MANUAL (CAMARA NEUBAUER) Segunda Generación: C.H. SEMIAUTOMATICO Tercera Generación: C.H. AUTOMATIZADO, HISTOGRAMA ( GR,GB,PLT ) RECUENTO % GB Cuarta Generación: C.H. AUTOMATIZADO, PERFORACION TAPA, HISTOGRAMA ( GR, PLT ) DISPERSOGRAMA ( GB ) EN 5 PARTES

8. MEDIDAS CUANTITATIVAS DE LOS ELEMENTOS HEMATOPOYÉTICOS DE LA SANGRE (HEMATIMETRIA) CONTADOR AUTOMÁTICO TÍPICO: Sangre aspirada es dividida en dos: Una es lisada y diluida para permitir medir la concentración de hemoglobina y el recuento de leucocitos (RDL); La otra es diluida , pero sin lisis, para el recuento y medida de las células rojas y las plaquetas (también reticulocitos).

9. Componentes de los autoanalizadores Sistema de aspiración y dilución de la muestra : cantidad precisa y dilución en solución isotónica con capacidad conductora Sistema de bombeo y distribución de las muestras y reactivos : fraccionamiento, distribución, mezcla y conducción a dispositivos de medida

10. Componentes de los autoanalizadores Dispositivos de medida : parte fundamental. Diferentes métodos: conductividad eléctrica, dispersión de luz laser o campo oscuro, colorimétricos, espectrofotométricos, reacciones citoquímicas, tinciones, centrifugado, reconocimiento morfológico, etc.  EL DISPOSITIVO DE MEDIDA DEPENDE DEL TIPO DE PARAMETRO ANALIZADO Y SU DISEÑO A SU VEZ DEPENDE DEL MODELO DE AUTOANALIZADOR

11. Componentes de los autoanalizadores Sistema de transducción y discriminación de datos : Interpretación. Transforma señales en impulsos eléctricos clasificados Lector y registrado de datos : Procesamiento de datos por sistemas de transducción (procesador informático, pantalla, impresión)

12. Sistema de conductividad eléctrica (resistencia, impedancia eléctrica) “ El número de señales eléctricas generadas indica el numero de células, y la amplitud de la señal eléctrica es directamente proporcional al tamaño o volumen de las células”

13. Método de dispersión de luz: rayo de luz LASER “ El grado de interferencia es directamente proporcional al tamaño de la célula, y el número de interferencias indica el número de células presentes en la muestra”

14. Método de dispersión de luz: campo oscuro (luz halógena) “ El número de señales luminosas indica el número de células presentes en la muestra, y la intensidad de las dispersiones o desviaciones de los rayos luminosos es directamente proporcional al tamaño de las células”

15. Recuento de eritrocitos Recién nacido De 4 a 5 millones/ml A los 3 meses De 3,2 a 4,8 millones/ml Con 1 año De 3,6 a 5 millones/ml Entre los 3 y 5 años De 4 a 5,3 millones/ml Entre 5 y 15 años De 4,2 a 5,2 millones/ml Hombre adulto De 4,5 a 5 millones/ml Mujer adulta De 4,2 a 5,2 millones/ml

16. Parámetros normales de las células sanguíneas N° de hematíes: Hombre: 4,5 - 6,2 millones / mm3 Mujer: 4,2 - 5,4 millones / mm3 Hemoglobina: Hombre: 14 - 18 gr. /dl Mujer: 12- 16 gr. /dl Hematocrito Hombre: 42 - 52 % Mujer: 37 -48 %

17. Parámetros normales de las células sanguíneas VCM Hombre: 80-94 fL Mujer: 81 -99 fL HCM 27-3l pg CHCM 33-37gr. /dl IDH (RDW) INDICE DE ANISOCITOSIS 11,5 - 14,5

18. Parámetros normales de las células sanguíneas N° leucocitos 4 - 10,5 x 103 /mL Neutrófilos 30-70 % 1,3 - 7,4 x 103 mL Linfocitos 20-50 % 0,9-5,2 x 103 / mL Monocitos 2- 10% 0,16- 1,00 x 103 / mL Eosinófilos 1- 5 % 0,00-0,20 x l03 / mL Basófilos 0,0- 1,5 % 0,00-0,20 x 103 / mL

19. Parámetros normales de las células sanguíneas N° plaquetas 130 - 400 x l03 / Ml

20. CELULAS ROJAS  Medición directa: Recuento de eritrocitos VCM Hemoglobina Todos los parámetros de la serie roja son extraídos de estos (ej. Hto). Método : IMPEDANCIA ELÉCTRICA (sangre diluida por solución electrolítica, pase a través de orificio con impedancia cuantificable, salto de impedancia por bicapa lipídica, impedancia es proporcional al tamaño).

21. Hematocrito Hto = Hematíes x VCM/10 VCM falsamente elevados y recuento de hematíes disminuido cuando existen anticuerpos frente a hematíes y mantienen su capacidad de unión a temperatura ambiente (ej. Aglutininas frías)  agregación de hematíes. Antes: Hto medido directamente (centrífuga), pero este microhematocrito incluye plasma atrapado entre hematíes (2-3%).

22. Hematocrito Otros factores de error: Eritrocitos anormales (anemia falciforme, talasemias, ferropenia, esferocitosis): atrapamiento de plasma por la rigidez del hematíe. Sangre completamente oxigenada tiene Hto 2% menor que la totalmente desoxigenada. Policitemia (Hto>55%): mayor plasma atrapado.  Hto obtenido por centrifugación puede estar artefactualmente elevado (hasta 6%), por lo que se prefiere la medición directa de la hemoglobina.

23. HEMOGLOBINA Hb intensamente captada Hematies contienen una mezcla de: Hemoglobina, Oxihemoglobina, Carboxihemoglobina, Metahemoglobina, etc. Células son lisadas y las variantes de Hb son convertidas a un compuesto estable de cianohemoglobina para la cuantificación por absorción a 540 nm (menos la sulfhemoglobina). Mayor fuente de interferencia: Quilomicronemia.

24. INDICES ERITROCITARIOS VCM (principal). Principio de Coulter: “ el área transversal de una partícula no conductiva, sumergida en una solución electrolítica, es directamente proporcional al aumento de impedancia eléctrica provocado por la partícula cuando pasa por un orificio estrecho ”. VCM: diagnóstico diferencial de anemias. HCM, CHCM: menor valor clínico, pero si importancia, como aviso de potenciales interferencias en la medida del VCM y recuento de hematíes.

25. INDICES ERITROCITARIOS VCM, HC, CHCM: obtenidas como medias y pueden no detectar anomalías en poblaciones mixtas de hematíes (ej. Anemias sideroblásticas, transfundidos, etc). ADE/IDH/RDW: (Amplitud de Distribución Eritrocitaria): específicamente diseñado para reflejar las variaciones de tamaño de los hematíes  Amplitud de la curva de distribución del volumen de los hematíes.  ADE puede emplearse como indicador que permita seleccionar que muestras, de las remitidas para estudio automatizado, deberían ser revisados manualmente para el estudio de la morfología.

26. LEUCOCITOS Muestras de sangre diluidas con solución que lisa los hematíes (ácido o detergente) pero preserva la integridad leucocitaria. Los recuentos manuales están sujetos a más variabilidad técnica que los automatizados, debido a factores estadísticos o técnicos. Recuentos leucocitarios falsamente elevados : por crioglobulinas, criofibrinógeno, plaquetas agregadas o fibrina, agregación plaquetaria inducida por EDTA, hematíes nucleados o hematíes no lisados.

27. Recuento diferencial leucocitario (RDL) Parámetros para identificar y enumerar los 3, y luego 5, tipos morfológicos principales en sangre periférica (x dispersión de luz desde diferentes ángulos o ola conductividad eléctrica).

28. PLAQUETAS Son enumeradas electrónicamente al contar partículas de una muestra, no lisada, de una ventana a un volumen especificado (2-20fl). Mayor dificultad de automatizar por pequeño tamaño, tendencia de agregarse y potencial solapamiento con las células rojas más numerosas. Sin embargo, el conteo plaquetario, con los métodos automáticos actuales, es fiable y preciso , incluso en el rango trombocitopénico. Pueden estar falsamente disminuidos si la muestra no esta completamente anticoagulada (presencia de coágulos o fibrina).

29. PLAQUETAS Posibles interferencias: Fragmentación celular intensa, Microcitosis, “ Satelitismo plaquetario”.

30. EXAMEN MORFOLOGICO DE LA SANGRE PERIFERICA El examen microscópico de la extensión de sangre periférica sobre un portaobjetos ofrece información muy valiosa sobre todos los elementos formes de la sangre. Considerar daño mecánico de las células. Secado, fijación y tinción suponen exposición al agua y metanol. Evaluación de diferentes zonas del frotis. Área óptima de estudio es examinada con 40-100x.

31. IMPORTANCIA DEL FROTIS DE SANGRE PERIFERICA ENFERMEDAD HALLAZGOS FROTIS SP ANEMIA HEMOLITICA ADQUIRIDA COMPENSADA ESFEROCITOS, POLICROMATOFILIA, AGLUTINACIÓN ERITTROCITARIA (INMUNE) ESFEROCITOSIS HEREDITARIA ESFEROCITOS, POLICROMATOFILIA HEMOGLOBINA C/TALASEMIAS CELULAS DIANA ELIPTOCITOSIS ELIPTOCITOS INTOXICACIÓN POR PLOMO PUNTEADO BASÓFILO (NO ESP) MIELOMA MULTIPLE, MACROGLOBULINEMIA ROULEAUX MALARIA, BABESIOSIS PARASITOS EN HEMATIES COAGULOPATIA DE CONSUMO ESQUISTOCITOS (NO ESP) HEMOLISIS MECANICA ESQUISTOCITOS INFECCION SEVERA NEUTROFILIA CON NEUTROFILOS INMADUROS, CUERPOS DE DOHLE, VACUOLAS EN NEUTROFILOS MONONUCLEOSIS INFECCIOSA LINFOCITOS ATÍPICOS LEUCEMIA AGUDA (RECAIDA TEMPRANA) BLASTOS

36. CBC TRANFUSION

39. ANALIZADOR DE HEMATOLOGIA ADVIA 120

40. SISMEX XE 2100

41. TAMAÑO CELULAS SANGUINEAS Linfocitos: 50 – 100 fL Monocitos: 100 – 150 fL Granulocitos:150 – 380 fL Eritrocitos: 60 – 110 fL Plaquetas: 2 – 20 fL

42. RBC ( 3.80 – 5.80 ) HGB ( 11.0 – 16.5 ) HCT ( 35.0 – 50.0 ) MCV ( 80 – 97 ) MCH ( 26.5 – 33.5 ) MCHC ( 31.5 – 35.0 ) RDW ( 10.0 – 15.0 ) HISTOGRAMA GLOBULOS ROJOS

43. ADE: Ancho Distribución Eritrocitaria Heterogénea : A. Adquirida Homogénea : A. Genética VCM: Tamaño Macrocìtico Normocìtico Microcìtico HCM, CHCM: Cantidad Normocròmica Hipocròmica RBC, HTO, Hb: Poliglobulia Normalidad Anemia HISTOGRAMA G. ROJOS

44. LINFOCITOS CELULAS MONONUCLEARES GRANDES GRANULOCITOS SUBPOBLACIONES WBC LINFOCITOS: Variantes de Linfocitos y Linfocitos maduros CEL GRANDES MONONUCLEARES: Monocitos, Línea Mieloide, Promonocitos, Prolinfocitos GRANULOCITOS: Todos los PMN más cayados o segmentados Gráfica Normal según población predominante acorde a la edad: NIÑOS ( LINFOCITOS ) A DULTOS ( PMN )

45. HEMOGLOBINA+ reactivo HGB META HEMOGLOBINA CIANOMETA HB. ADVIA 120 HEMOGLOBINA El reactivo ADVIA 120 HGB contiene: - Cianuro de potasio, 20 mmol/L Oxido de Dimethilaurilamina, 2.0% Reacción: - Los eritrocitos son hemolizados para liberar la hemoglobina. - El grupo Hem se oxida de su forma ferrosa a férrica y se combina con el cianuro para formar: UFC Filtro +Fotodiodo Cámara de reacción de HGB Lámpara

46. Sysmex XE 2100

47. Sysmex

50. GRACIAS POR SU ATENCION…