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Universidad Autónoma de Guerrero
     Unidad Académica de Ciencias Químico Biológicas


             Bacteriología Medica

“Enterobacterias: E. coli, Shigella, Salmonella y
                  Klebsiella”

                 Arizandy Marcelo Marcelo
                   Isaías Reyes Zavaleta
                 María Lucia Monje Basurto
                Regina Rosalía Pérez Galindo
                   Víctor Magallon Tapia


                  Chilpancingo de Los Bravo a 20 de Enero del 2012
ENTEROBACTERIAS
   Los bacilos gram – pertenecientes a Enterobactericiae
    son las bacterias que se recuperan con mayor frecuencia
    en las muestras clínicas, para la identificación de estas
    se requiere una seria de pruebas bioquímicas.



   Con pocas excepciones, todos los miembros de las
    enterobacterias      demuestran       las       siguientes
    características:
El nitrato es reducido a nitrito     La citrocromo oxidasa es negativa




                                   Fermentan la glucosa
TAXONOMÍA DE ENTEROBACTERIACEAE

•Tribu   ESCHERICHIAE
•Losdos géneros dentro de esta tribu son Escherichia y
Shigella.
   los miembros de esta tribu se distinguen por lo siguiente:




                                     VP –




                                                       Citrato -

    Indol +     RM +
                                                           Sulfuro de
                                                           Hidrogeno
                                                                -

                            Urea -          PAD
                                             -
Género Escherichia
   E. coli es la especie de bacteria mas
    recuperada en muestras que llegan al
    laboratorio.

   Es     un     bacilo    que     reacciona
    negativamente a la tinción de Gram
    (gramnegativo), es anaerobio facultativo,
    móvil por flagelos peritricos (que rodean
    su cuerpo), no forma esporas, es capaz
    de fermentar la glucosa y la lactosa.

   Es uno de los m. o mas frecuentemente
    involucrados en la sepsis por Gram – y
    en el shock inducido por endotoxinas.

   Infecciones habituales: vias urinarias,
    heridas, neumonia, meningitis.
Pruebas bioquímicas:
                                                            +            -




                       VP –

 KIA: A/A + G
                                          Citrato -
                                Indol +                         Movilidad +
                RM +                                  PAD
                                                       -
                              Lis +
     Urea -                                                      H2S -
                                           ARG & ORN+/-
                                             (variable)
                                                                 ONPG
                                                                   +
 E.  coli se serotipifica sobre la base de sus
  antígenos de superficie: O, H y K.
 En la actualidad se conocen mas de 170
  serogrupos de antígenos O. La combinación de
  antígenos O y H define un serotipo de un aislado
  (E. coli O157:H7).


              E. Coli que producen gastroenteritis
 Ciertas cepas de E. coli pueden producir gastroenteritis o
  enteritis por seis mecanismos distintos, que conducen a
  seis síndromes clínicos diferentes:
   Escherichia coli: enteropatogéna (EPEC), enterotoxigénica
    (ETEC), enteroinvasiva (EIEC), enterohemorrágica
    (EHEC), enteroagregante (EAEC) y difusamente
    adherente (DAEC).



   Si bien existen ensayos para identificar todas las
    categorías de E. coli que producen gastroenteritis en la
    mayoría de los casos no es necesario.



   Con excepción de los ensayos para la detección de EHEC
    no se realizan en forma habitual ensayos fenotípicos ni
    serotipificacion de E. coli para el diagnostico de cepas
    diarreicogénicas.
 Escherichia coli enteropatogénica (ECEP):
Esta cepa causa diarrea en humanos, conejos, perros y caballos.
  Carece de fimbrias pero utilizan la proteína intimina, una
  adhesina, para adherirse a las células intestinales. Este serotipo
  posee una serie de factores de virulencia que son similares a
  los que se encuentran en Shigella, como la toxina shiga. La
  adherencia a la mucosa intestinal causa una reordenación de la
  actina en la célula hospedante, que induce una deformación
  significativa. Estas bacterias son moderadamente invasivas:
  penetran en las células hospedadoras provocando una
  respuesta inflamatoria. La causa principal de diarrea en los
  afectados por esta cepa son seguramente los cambios
  provocados en la ultraestructura de las células intestinales.

  Escherichia coli enterotoxigénica (ECET):
Se parece mucho a Vibrio cholerae, se adhiere a la mucosa del
  intestino delgado, no la invade, y elabora toxinas que producen
  diarrea. No hay cambios histológicos en las células de la
  mucosa y muy poca inflamación. Produce diarrea no
  sanguinolenta en niños y adultos.
Escherichia coli enteroagregativa (ECEA):
Sólo    encontrada      en     humanos.    Son     llamadas
 enteroagregativas porque tienen fimbrias con las que
 aglutinan células en los cultivos de tejidos. Se unen a la
 mucosa intestinal causando diarrea acuosa sin fiebre. No
 son invasivas. Producen hemolisina y una enterotoxina
 similar a la de las enterotoxigénicas.

   Escherichia coli de adherencia difusa (ECAD)

Se adhiere a la totalidad de la superficie de las células
 epiteliales y habitualmente causa enfermedad en niños
 inmunológicamente no desarrollados o malnutridos. No se
 ha demostrado que pueda causar diarrea en niños
 mayores de un año de edad, ni en adultos y ancianos.
   Escherichia coli enteroinvasiva (ECEI):
Invade el epitelio intestinal causando diarrea
 sanguinolenta en niños y adultos. Libera el calcio
 en grandes cantidades impidiendo la solidificación
 ósea, produciendo artritis y en algunos casos
 arterioesclerosis. Es una de las E. coli que causa
 más daño debido a la invasión que produce en el
 epitelio intestinal.
ESCHERICHIA COLI ENTEROHEMORRÁGICA
    (EHEC)
 No se conoció su importancia clínica
  hasta 1982 cuando se le asocio con
  la colitis hemorrágica y el síndrome
  urémico hemolítico.
 E. coli O157:H7 produce toxinas
  shiga      (verocitotoxinas),   algunas
  cepas solo producen Stx 1, otras Stx
  2, y otras ambas.
 Los genes para estas toxinas son
  codificados por bacteriofagos.
 Otros       factores    de    virulencia
  identificados en E. coli O157:H7
  incluyen el plásmido de virulencia de
  60 MDa (pO157) y el locus de
  borramiento del enterocito (LEE).
 Producen verocitotoxinas que actúan en el colon. Sus
  síntomas son: primero colitis hemorrágica, luego síndrome
  urémico hemolítico (lo anterior más afección del
  riñón, posible entrada en coma y muerte), y por
  último, púrpura trombocitopénica trombótica (lo de antes
  más afección del sistema nervioso central).
 Esta cepa no fermenta el sorbitol.

 No posee una fimbria formadora de mechones, en vez de
  esto posee una fimbria polar larga que usa para
  adherencia.
 No    se recomienda el uso de antibióticos como
  fluoroquinolonas,    trimetrotoprima-sulfametoxazol     y
  furazolidona, porque producen la inducción de
  bacteriófagos y pueden aumentar la expresión de toxinas
  shiga.
Manifestaciones clínicas
 Infecciónpor E. coli O157:H7 van desde la
 portación   asintomática    hasta diarrea no
 sanguiolenta, colitis hemorrágica, síndrome
 urémico hemolítico y muerte.

 El
   periodo de incubación varia de 1 a 8 días con
 un intervalo promedio de 3 días antes de la
 exposición y la enfermedad.
                Detección de EHEC
 El
   aislamiento de E. coli O157:H7 solo es posible
 durante la fase agua de la enfermedad y los m.o
 pueden no detectarse 5-7 días después del inicio.
Los métodos para la identificación se basan en:
 La detección de cepas productoras de toxinas shiga.
 Detección del serotipo O157:H7.


1.   Siembra en agar MacConkey y sorbitol (SMAC), cefixima-
     SMAC, SMAC complementado con cefixima y telurito (CT-SMAC) o
     medios que contienen5-bromo-5-cloro-3-indoxil-β-D-glucoronida o 4-
     metilumbeliferil-β-D-glucoronida. El Agar SMAC contiene D-sorbitol al
     1% en lugar de lactosa para diferenciar las cepas de E.coli sorbitol
     negativas. Luego los aislamientos sospechosos son confirmados con
     antisueros con antisueros O157:H7 específicos. Otros medios de
     detección son medios cromogénicos y métodos de ELISA.


2.   Separación inmunomagnetica utilizando esferas revestidas con Ac
     específicos de O157 seguido de cultivo bacteriológico.


3.   Ensayos para la detección del serotipo O157:H7 o toxinas shiga
     directamente de las heces.
Es una especie recién descrita de enterobacterias indol negativas, D-
sorbitol negativas y lactosa negativas aisladas en heces diarreicas de
niños.

E. Albertii se asemeja principalmente a E. coli inactiva, aunque no se
asemeja al grupo Alkalescens-Dispar debido a su capacidad para producir
gas a partir de D- glucosa.
Indol (-)                 Rojo de metilo             Voges – proskauer (-)
                          (+)




Citrato (-)             Lisina descarboxilasa (+)   Arginina dehidrolasa (-)




  Ornitina descarboxilasas (+)                  ONPG (+)
Lactosa (-)                           Manitol (+)
                  Adonitol (-)




                Pigmento amarillo (-)




Celobiosa(-)                             Sorbitol (-)
Se encuentra en sangre, vesícula biliar, orina y heces; sin embargo no se
ha establecido aun su importancia clínica.

Se diferencia de E. coli por las pruebas de sorbitol negativa y lactosa
negativa , pero andonitol positiva y celobiosa positiva.
Indol (+)                 Rojo de metilo             Voges – proskauer (-)
                          (+)




Citrato (V)             Lisina descarboxilasa (+)   Arginina dehidrolasa (-)




  Ornitina descarboxilasas (+)                  ONPG (v)
Lactosa (-)                                  Manitol (+)
                    Adonitol (+)




                  Pigmento amarillo (-)




Celobiosa(+)                              Sorbitol (-)
Se encontró principalmente en heridas, esputo y heces de humanos.

Esta bacteria puede producir una infección denominada cefalohematoma.

Las cepas de E. hermanii tienen pigmento amarillo y son indol positivas y
sorbitol negativas. Como E. hermanii son sorbitol negativas, parecen
bioquímicamente similares a E. coli.
Indol (+)                 Rojo de metilo        Voges – proskauer (-)
                          (+)




                                 Manitol (+)



Citrato (-)                                    Arginina dehidrolasa (-)




                                                  ONPG (+)
  Ornitina descarboxilasas (+)
Lactosa (V)                                Adonitol (-)




               Lisina descarboxilasa (-)




               Pigmento amarillo (+)




Celobiosa(+)                               Sorbitol (-)
Tiene alta propensión a producir infecciones en las heridas
humanas, sobre todo en los brazos y las piernas que pueden conducir a
osteomielitis.

Mas del 50 % de las cepas tienen pigmento amarillo y son tanto indol
negativas como sorbitol negativas.
Indol (-)                    Rojo de metilo     Voges – proskauer (-)
                               (+)




                                   Manitol (+)

   Citrato (-)                                   Arginina dehidrolasa (V)




Ornitina descarboxilasas (-)                       ONPG (+)
Lactosa (V)                               Adonitol (-)


                 Lisina descarboxilasa (V)




                 Pigmento amarillo (V)




Celobiosa(+)                                 Sorbitol (-)
Género: Salmonella
El genero salmonella recibe su

nombre el honor al microbiólogo

americano Daniel Elmer Salmon

(1850-1914), quien descubrió los

gérmenes       designados       como

salmonellas,          en        1885,

aislándolos      de    cerdos    con

cólera.
Clasificación Científica
Reino:                                    Bacteria
Filo:                                     Proteobacteria
Clase:                                    Gammaproteobacteria
Orden:                                    Enterobacteriales
Familia:                                  Enterobacteriaceae
Genero:                                   Salmonella



                                   Especies
•   Salmonella enterica
•   Subesopecie I. S. enterica subsp. enterica
•   Subespecie II. S enterica subsp. salamae
•   Subespecie III. S. enterica subsp. arizonae.
•   Subespecie IV. S enterica subsp. diarizonae
•   Subesopecie V. S. enterica subsp. houtenae
•   Subesopecie VI. S. enterica subsp. Indica

• Salmonella bongori : No constituye un patógeno para los humanos.
Patógenos del
 Salmonella           Aparato
                     Digestivo



Potencialmente       Parásitos
  patógenas        intercelulares
                   (Macrófagos)



                  - Fiebre entérica
Vía Linfática y
                  - Septicemia
 Sanguínea.
                  - Gastroenteritis
Es de suma importancia aclara que aunque existan solo dos especies de salmonellas según
su hibridación de DNA, tanto las especies como las subespecies mencionadas se
encuentran constituidas por mas de 2400 variedades serológicas.
La     estructura    antigénica    de   Salmonella     sp.   Es    similar   a    la   de   otras
enterobacterias, contando con la presencia de dos clases de antígenos principales:


•    Antígeno O (somáticos): de lipopolisacarido en la pared celular, termoestable y es la
     base de la clasificación en subgrupos.
•    Antígenos H (flagelares): de la proteína flagelina termolábil, es la base de la clasificación
     de especies.


En algunas cepas se encuentra un tercer tipo de Antígeno se superficie, análogo funcional a
los antígenos K (capsulares) de otros géneros. Al estar este antígeno relacionado con la
virulencia de las cepas se le denomina
•    Antígeno Vi: (Virulencia): termolábil, responsable de la     virulencia de varias especies
     patogénicas.
Factores que afectan su crecimiento,
           muerte y/o sobrevivencia.




Esta tabla muestra las condiciones óptimas de
temperatura, pH y aw (actividad del agua) que
favorecen el desarrollo de Salmonella.
Caracterización Morfológica y
                  Bioquímica

• Son bacilos Gram- negativos
• Con un tamaño de 0.7 – 1.5 x 2.0 - 5µm
• No fermentadores de lactosa
• Anaerobios facultativos
• No esporulados
• Generalmente móviles por flagelos peritricos con la
  excepción de Salmonella gallinarum y Salmonella
  pollorum.
• Poseen metabolismo fermentativo y oxidativo
Agares de Selección




La diferenciación de Salmonella de otros microorganismos es usualmente determinado
por los cambios de color del indicador que se detecta por cambio de pH y que
corresponde a la fermentación de lactosa o sacarosa; asimismo la producción de H2S
o la descarboxilación de lisina y de la ornitina.
Agar SS   Agar Mac Conkey
Pruebas Bioquímicas
• Fermentación de Glucosa con producción de acido y gas (excepto S. typhi)
• Oxidasa Negativo
• Catalasa Positivo
• Indol y Voges – Proskauer (VP) Negativo
• Rojo de Metilo y Citrato de Simmons Positivo
• Producen H2S
• Urea Negativo
• Lisina, Ornitina y Descarboxilasa positivo
• Reducción de Nitratos a Nitritos
• No desaminan la fenilalanina
Fermentación de Glucosa con producción de acido y gas
Citrato de Simmons y Rojo de Metilo Positivo
Oxidasa Negativo




                   Catalasa   Positivo
Indol y Voges Proskauer Negativo
No desaminan la fenilalanina
Reducción de Nitratos a Nitritos
Lisina, Ornitina y
Descarboxilasa positivo   Caldo Urea
GENERO: Shigella

   Existen 4 subgrupos mayores y 43 serotipos.




                             Shigella




    S.
                   S. Flexneri          S. Boydii
Dysenteriae                                         S.sonnei
                    (grupo b)           (grupo c)
 (gurpo a)



                   Similitudes
                   bioquimicas
GENERO: Shigella

•Las especies de shigella pueden sospecharse en cultivos (no
fermentadores de lactosa y bioquímicamente inertes).


•No producen gas a partir de hidratos de carbono (excepción de S.
flexneri que son aerogenos).
MORFOLOGIA EN MEDIOS.
               MEDIO                              INTERACCIONES

Salmonella-Shigella (SS)                Muestra inhibicion variable y colonias
                                        incoloras sin ennegrecimiento.
Agar enterico de Hektoen (HE)           Aparece mas verde que Salmonella y
                                        el color se borra hacia la periferia de
                                        la colonia
Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD)   No utilizan ninguno de los hidratos de
                                        carbono y producen colonias
                                        traslucidas.
Agar de MacConkey                       Producen colnias incoloras y
                                        transparentes.
Agar eosina azul de metileno (EMB)      Producen colonias transparentes.
PERFIL BIOQUÍMICO

•ALC/A (M.O fermenta glucosa y no           •RM POSITIVO.
lactosa)
•NO PRESENCIA DE GAS.                       (fermenta glucosa, por la
•SULFURO DE HIDROGENO (H2S)                 vía      mixta.     Con
NEGATIVO.                                   producción            de
(No reacciona con citrato de hierro ni      metabolitos).
amonio)




                                         MEDIO RM.
   AGAR
   KLIGER
•VP NEGATIVO.                     •INDOL POSITIVO
Es la busqueda de diacetil           /NEGATIVO.
= producto final del acetil-   Presencia de triptofanasa
metil-carbinol                           (+/-)




      MEDIO VP.
                                    MEDIO
                                    SIM.
•CITRATO              •FENIL ALANINA
NEGATIVO.             NEGATIVO.
(no utiliza sales     (capacidad de la bacteria
amonio como           para desaminar
fuente de nitrgeno)   aminoácido fenilalamina)




AGAR CITRATO DE       CALDO FENIL ALANINA-
   SIMONS.                MALONATO .
•   UREASA NEGATIVA   •   MOTILIDAD:   • LISINA NEGATIVA
(no poseen enzima         POSITIVA/
                                       (lisina no se
   ureasa)                NEGATIVA
                                            descarboxila)




     CALDO UREA           MEDIO SIM       MEDIO LIA
Tribu: Klebsiella

comprende cuatro géneros (Klebsiella, Enterobacter, Hafnia y Serratia).


                        Genero : Klebsiella

   Recibió ese nombre en honor a Edwin Klebs, microbiólogo alemán de
    fines del siglo XIX.


   Klebsiella esta compuesta por especies que forman tres grupos
    fileticos:
• K. pneumoniae subespecies pneumoniae,
                            Grupo I              rhinoscleromatis y ozaenae.
                                               • K.granulomatis



                                               •   K. ornithinolytica
                                               •   K. planticola
                                               •   K. trevisanii
                           Grupo II            •    K. terrígena.
                                               •    (este grupo es transferido al nuevo genero
                                                   Raoultella en honor al bacteriólogo
                                                   frances Didier Raoult).




                           Grupo III           • K. oxytoca




Las especies de Klebsiella y Raoultella están ampliamente distribuidas
en la naturaleza y en el tubo digestivo.
Cuando se recuperan colonias
grandes con una consistencia
mucoide en las placas de
aislamiento se debe de
sospechar que es una especie
de Klebsiella.


En agar      MacConkey, las
colonias      se presentan
grandes, mucoides y rojas, y
el pigmento rojo suele
difundirse en el agar lo que
indica    fermentación    de
lactosa.
   Las especies de aislamiento clínico frecuente son
    Klebsiella pneumoniae subespecie pneumoniae y
    K. oxytoca.



Klebsiella pneumoniae subespecie pneumoniae

    Gram negativo
    Anaerobio facultativo
    Encapsulado
    Inmóvil
    Fermentación de lactosa
    Se encuentra en la flora
    normal de la boca, la piel y los
    intestinos.
   Puede causar la neumonía
    enfermedad que causa cambios
    destructivos a la inflamación y la
    hemorragia pulmonar humano
    con la muerte celular (necrosis)
    que a veces produce, esputo
    con sangre, mucosa (esputo
    jalea de grosella).
   Al   igual   que   con   muchas     bacterias,    el    tratamiento
    recomendado ha cambiado ya que el organismo ha
    desarrollado resistencias. A menudo son resistentes a
    múltiples antibióticos. La evidencia actual implica un plásmido
    como la fuente de los genes de resistencia.

   Resistente a ampicilina, carbenicilina y ticarcilina.

   Debido ala producción de enzimas beta-lactamasas             hacen
    que sean resistentes a los agentes beta-lactamicos, incluidas
    las cefalosporinas de tercera generación.



   Sensible a amoxicilina-clavulánico y fluorquinolona
   PRUEBAS BIOQUIMICAS EN Klebsiella pneumoniae

              Indol (-)               Lisina (+)


                Voges-Proskauer (+)   Arginina (-)


                 Ureasa (+)            Ornitina (-)


                                      fermenta: lactosa
                                      sacarosa, sorbitol
                                      adonitol y arabinosa.


        Citrato (+)
Klebsiella Oxytoca

Klebsiella oxytoca es una especie
Gram-negativa,       estrechamente
relacionadas con K. pneumoniae de
la que se distingue por ser indol
positiva.

Casi el 50% de aislamiento ha sido
en heces y la siguiente fuente en
frecuencia es la sangre.
PRUEBAS BIOQUIMICAS

     Indol: (+)
       RM: (V)
      VP : (+)
     Ureasa: (+)
     Lisina: (+)
    Ornitina: (-)
    Malonato: (+)
    Motilidad: (-)
Diferenciación de especies en los géneros Klebsiella y Raoultella

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Enterobacterias

  • 1. Universidad Autónoma de Guerrero Unidad Académica de Ciencias Químico Biológicas Bacteriología Medica “Enterobacterias: E. coli, Shigella, Salmonella y Klebsiella” Arizandy Marcelo Marcelo Isaías Reyes Zavaleta María Lucia Monje Basurto Regina Rosalía Pérez Galindo Víctor Magallon Tapia Chilpancingo de Los Bravo a 20 de Enero del 2012
  • 2. ENTEROBACTERIAS  Los bacilos gram – pertenecientes a Enterobactericiae son las bacterias que se recuperan con mayor frecuencia en las muestras clínicas, para la identificación de estas se requiere una seria de pruebas bioquímicas.  Con pocas excepciones, todos los miembros de las enterobacterias demuestran las siguientes características:
  • 3. El nitrato es reducido a nitrito La citrocromo oxidasa es negativa Fermentan la glucosa
  • 4. TAXONOMÍA DE ENTEROBACTERIACEAE •Tribu ESCHERICHIAE •Losdos géneros dentro de esta tribu son Escherichia y Shigella.
  • 5. los miembros de esta tribu se distinguen por lo siguiente: VP – Citrato - Indol + RM + Sulfuro de Hidrogeno - Urea - PAD -
  • 6. Género Escherichia  E. coli es la especie de bacteria mas recuperada en muestras que llegan al laboratorio.  Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaerobio facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa.  Es uno de los m. o mas frecuentemente involucrados en la sepsis por Gram – y en el shock inducido por endotoxinas.  Infecciones habituales: vias urinarias, heridas, neumonia, meningitis.
  • 7. Pruebas bioquímicas: + - VP – KIA: A/A + G Citrato - Indol + Movilidad + RM + PAD - Lis + Urea - H2S - ARG & ORN+/- (variable) ONPG +
  • 8.  E. coli se serotipifica sobre la base de sus antígenos de superficie: O, H y K.  En la actualidad se conocen mas de 170 serogrupos de antígenos O. La combinación de antígenos O y H define un serotipo de un aislado (E. coli O157:H7). E. Coli que producen gastroenteritis  Ciertas cepas de E. coli pueden producir gastroenteritis o enteritis por seis mecanismos distintos, que conducen a seis síndromes clínicos diferentes:
  • 9. Escherichia coli: enteropatogéna (EPEC), enterotoxigénica (ETEC), enteroinvasiva (EIEC), enterohemorrágica (EHEC), enteroagregante (EAEC) y difusamente adherente (DAEC).  Si bien existen ensayos para identificar todas las categorías de E. coli que producen gastroenteritis en la mayoría de los casos no es necesario.  Con excepción de los ensayos para la detección de EHEC no se realizan en forma habitual ensayos fenotípicos ni serotipificacion de E. coli para el diagnostico de cepas diarreicogénicas.
  • 10.  Escherichia coli enteropatogénica (ECEP): Esta cepa causa diarrea en humanos, conejos, perros y caballos. Carece de fimbrias pero utilizan la proteína intimina, una adhesina, para adherirse a las células intestinales. Este serotipo posee una serie de factores de virulencia que son similares a los que se encuentran en Shigella, como la toxina shiga. La adherencia a la mucosa intestinal causa una reordenación de la actina en la célula hospedante, que induce una deformación significativa. Estas bacterias son moderadamente invasivas: penetran en las células hospedadoras provocando una respuesta inflamatoria. La causa principal de diarrea en los afectados por esta cepa son seguramente los cambios provocados en la ultraestructura de las células intestinales.  Escherichia coli enterotoxigénica (ECET): Se parece mucho a Vibrio cholerae, se adhiere a la mucosa del intestino delgado, no la invade, y elabora toxinas que producen diarrea. No hay cambios histológicos en las células de la mucosa y muy poca inflamación. Produce diarrea no sanguinolenta en niños y adultos.
  • 11. Escherichia coli enteroagregativa (ECEA): Sólo encontrada en humanos. Son llamadas enteroagregativas porque tienen fimbrias con las que aglutinan células en los cultivos de tejidos. Se unen a la mucosa intestinal causando diarrea acuosa sin fiebre. No son invasivas. Producen hemolisina y una enterotoxina similar a la de las enterotoxigénicas.  Escherichia coli de adherencia difusa (ECAD) Se adhiere a la totalidad de la superficie de las células epiteliales y habitualmente causa enfermedad en niños inmunológicamente no desarrollados o malnutridos. No se ha demostrado que pueda causar diarrea en niños mayores de un año de edad, ni en adultos y ancianos.
  • 12. Escherichia coli enteroinvasiva (ECEI): Invade el epitelio intestinal causando diarrea sanguinolenta en niños y adultos. Libera el calcio en grandes cantidades impidiendo la solidificación ósea, produciendo artritis y en algunos casos arterioesclerosis. Es una de las E. coli que causa más daño debido a la invasión que produce en el epitelio intestinal.
  • 13. ESCHERICHIA COLI ENTEROHEMORRÁGICA (EHEC)  No se conoció su importancia clínica hasta 1982 cuando se le asocio con la colitis hemorrágica y el síndrome urémico hemolítico.  E. coli O157:H7 produce toxinas shiga (verocitotoxinas), algunas cepas solo producen Stx 1, otras Stx 2, y otras ambas.  Los genes para estas toxinas son codificados por bacteriofagos.  Otros factores de virulencia identificados en E. coli O157:H7 incluyen el plásmido de virulencia de 60 MDa (pO157) y el locus de borramiento del enterocito (LEE).
  • 14.  Producen verocitotoxinas que actúan en el colon. Sus síntomas son: primero colitis hemorrágica, luego síndrome urémico hemolítico (lo anterior más afección del riñón, posible entrada en coma y muerte), y por último, púrpura trombocitopénica trombótica (lo de antes más afección del sistema nervioso central).  Esta cepa no fermenta el sorbitol.  No posee una fimbria formadora de mechones, en vez de esto posee una fimbria polar larga que usa para adherencia.  No se recomienda el uso de antibióticos como fluoroquinolonas, trimetrotoprima-sulfametoxazol y furazolidona, porque producen la inducción de bacteriófagos y pueden aumentar la expresión de toxinas shiga.
  • 15. Manifestaciones clínicas  Infecciónpor E. coli O157:H7 van desde la portación asintomática hasta diarrea no sanguiolenta, colitis hemorrágica, síndrome urémico hemolítico y muerte.  El periodo de incubación varia de 1 a 8 días con un intervalo promedio de 3 días antes de la exposición y la enfermedad. Detección de EHEC  El aislamiento de E. coli O157:H7 solo es posible durante la fase agua de la enfermedad y los m.o pueden no detectarse 5-7 días después del inicio.
  • 16. Los métodos para la identificación se basan en:  La detección de cepas productoras de toxinas shiga.  Detección del serotipo O157:H7. 1. Siembra en agar MacConkey y sorbitol (SMAC), cefixima- SMAC, SMAC complementado con cefixima y telurito (CT-SMAC) o medios que contienen5-bromo-5-cloro-3-indoxil-β-D-glucoronida o 4- metilumbeliferil-β-D-glucoronida. El Agar SMAC contiene D-sorbitol al 1% en lugar de lactosa para diferenciar las cepas de E.coli sorbitol negativas. Luego los aislamientos sospechosos son confirmados con antisueros con antisueros O157:H7 específicos. Otros medios de detección son medios cromogénicos y métodos de ELISA. 2. Separación inmunomagnetica utilizando esferas revestidas con Ac específicos de O157 seguido de cultivo bacteriológico. 3. Ensayos para la detección del serotipo O157:H7 o toxinas shiga directamente de las heces.
  • 17. Es una especie recién descrita de enterobacterias indol negativas, D- sorbitol negativas y lactosa negativas aisladas en heces diarreicas de niños. E. Albertii se asemeja principalmente a E. coli inactiva, aunque no se asemeja al grupo Alkalescens-Dispar debido a su capacidad para producir gas a partir de D- glucosa.
  • 18. Indol (-) Rojo de metilo Voges – proskauer (-) (+) Citrato (-) Lisina descarboxilasa (+) Arginina dehidrolasa (-) Ornitina descarboxilasas (+) ONPG (+)
  • 19. Lactosa (-) Manitol (+) Adonitol (-) Pigmento amarillo (-) Celobiosa(-) Sorbitol (-)
  • 20. Se encuentra en sangre, vesícula biliar, orina y heces; sin embargo no se ha establecido aun su importancia clínica. Se diferencia de E. coli por las pruebas de sorbitol negativa y lactosa negativa , pero andonitol positiva y celobiosa positiva.
  • 21. Indol (+) Rojo de metilo Voges – proskauer (-) (+) Citrato (V) Lisina descarboxilasa (+) Arginina dehidrolasa (-) Ornitina descarboxilasas (+) ONPG (v)
  • 22. Lactosa (-) Manitol (+) Adonitol (+) Pigmento amarillo (-) Celobiosa(+) Sorbitol (-)
  • 23. Se encontró principalmente en heridas, esputo y heces de humanos. Esta bacteria puede producir una infección denominada cefalohematoma. Las cepas de E. hermanii tienen pigmento amarillo y son indol positivas y sorbitol negativas. Como E. hermanii son sorbitol negativas, parecen bioquímicamente similares a E. coli.
  • 24. Indol (+) Rojo de metilo Voges – proskauer (-) (+) Manitol (+) Citrato (-) Arginina dehidrolasa (-) ONPG (+) Ornitina descarboxilasas (+)
  • 25. Lactosa (V) Adonitol (-) Lisina descarboxilasa (-) Pigmento amarillo (+) Celobiosa(+) Sorbitol (-)
  • 26. Tiene alta propensión a producir infecciones en las heridas humanas, sobre todo en los brazos y las piernas que pueden conducir a osteomielitis. Mas del 50 % de las cepas tienen pigmento amarillo y son tanto indol negativas como sorbitol negativas.
  • 27. Indol (-) Rojo de metilo Voges – proskauer (-) (+) Manitol (+) Citrato (-) Arginina dehidrolasa (V) Ornitina descarboxilasas (-) ONPG (+)
  • 28. Lactosa (V) Adonitol (-) Lisina descarboxilasa (V) Pigmento amarillo (V) Celobiosa(+) Sorbitol (-)
  • 30. El genero salmonella recibe su nombre el honor al microbiólogo americano Daniel Elmer Salmon (1850-1914), quien descubrió los gérmenes designados como salmonellas, en 1885, aislándolos de cerdos con cólera.
  • 31. Clasificación Científica Reino: Bacteria Filo: Proteobacteria Clase: Gammaproteobacteria Orden: Enterobacteriales Familia: Enterobacteriaceae Genero: Salmonella Especies • Salmonella enterica • Subesopecie I. S. enterica subsp. enterica • Subespecie II. S enterica subsp. salamae • Subespecie III. S. enterica subsp. arizonae. • Subespecie IV. S enterica subsp. diarizonae • Subesopecie V. S. enterica subsp. houtenae • Subesopecie VI. S. enterica subsp. Indica • Salmonella bongori : No constituye un patógeno para los humanos.
  • 32. Patógenos del Salmonella Aparato Digestivo Potencialmente Parásitos patógenas intercelulares (Macrófagos) - Fiebre entérica Vía Linfática y - Septicemia Sanguínea. - Gastroenteritis
  • 33. Es de suma importancia aclara que aunque existan solo dos especies de salmonellas según su hibridación de DNA, tanto las especies como las subespecies mencionadas se encuentran constituidas por mas de 2400 variedades serológicas. La estructura antigénica de Salmonella sp. Es similar a la de otras enterobacterias, contando con la presencia de dos clases de antígenos principales: • Antígeno O (somáticos): de lipopolisacarido en la pared celular, termoestable y es la base de la clasificación en subgrupos. • Antígenos H (flagelares): de la proteína flagelina termolábil, es la base de la clasificación de especies. En algunas cepas se encuentra un tercer tipo de Antígeno se superficie, análogo funcional a los antígenos K (capsulares) de otros géneros. Al estar este antígeno relacionado con la virulencia de las cepas se le denomina • Antígeno Vi: (Virulencia): termolábil, responsable de la virulencia de varias especies patogénicas.
  • 34. Factores que afectan su crecimiento, muerte y/o sobrevivencia. Esta tabla muestra las condiciones óptimas de temperatura, pH y aw (actividad del agua) que favorecen el desarrollo de Salmonella.
  • 35. Caracterización Morfológica y Bioquímica • Son bacilos Gram- negativos • Con un tamaño de 0.7 – 1.5 x 2.0 - 5µm • No fermentadores de lactosa • Anaerobios facultativos • No esporulados • Generalmente móviles por flagelos peritricos con la excepción de Salmonella gallinarum y Salmonella pollorum. • Poseen metabolismo fermentativo y oxidativo
  • 36. Agares de Selección La diferenciación de Salmonella de otros microorganismos es usualmente determinado por los cambios de color del indicador que se detecta por cambio de pH y que corresponde a la fermentación de lactosa o sacarosa; asimismo la producción de H2S o la descarboxilación de lisina y de la ornitina.
  • 37. Agar SS Agar Mac Conkey
  • 38. Pruebas Bioquímicas • Fermentación de Glucosa con producción de acido y gas (excepto S. typhi) • Oxidasa Negativo • Catalasa Positivo • Indol y Voges – Proskauer (VP) Negativo • Rojo de Metilo y Citrato de Simmons Positivo • Producen H2S • Urea Negativo • Lisina, Ornitina y Descarboxilasa positivo • Reducción de Nitratos a Nitritos • No desaminan la fenilalanina
  • 39.
  • 40. Fermentación de Glucosa con producción de acido y gas
  • 41. Citrato de Simmons y Rojo de Metilo Positivo
  • 42. Oxidasa Negativo Catalasa Positivo
  • 43. Indol y Voges Proskauer Negativo
  • 44. No desaminan la fenilalanina
  • 46. Lisina, Ornitina y Descarboxilasa positivo Caldo Urea
  • 47. GENERO: Shigella Existen 4 subgrupos mayores y 43 serotipos. Shigella S. S. Flexneri S. Boydii Dysenteriae S.sonnei (grupo b) (grupo c) (gurpo a) Similitudes bioquimicas
  • 48. GENERO: Shigella •Las especies de shigella pueden sospecharse en cultivos (no fermentadores de lactosa y bioquímicamente inertes). •No producen gas a partir de hidratos de carbono (excepción de S. flexneri que son aerogenos).
  • 49. MORFOLOGIA EN MEDIOS. MEDIO INTERACCIONES Salmonella-Shigella (SS) Muestra inhibicion variable y colonias incoloras sin ennegrecimiento. Agar enterico de Hektoen (HE) Aparece mas verde que Salmonella y el color se borra hacia la periferia de la colonia Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD) No utilizan ninguno de los hidratos de carbono y producen colonias traslucidas. Agar de MacConkey Producen colnias incoloras y transparentes. Agar eosina azul de metileno (EMB) Producen colonias transparentes.
  • 50. PERFIL BIOQUÍMICO •ALC/A (M.O fermenta glucosa y no •RM POSITIVO. lactosa) •NO PRESENCIA DE GAS. (fermenta glucosa, por la •SULFURO DE HIDROGENO (H2S) vía mixta. Con NEGATIVO. producción de (No reacciona con citrato de hierro ni metabolitos). amonio) MEDIO RM. AGAR KLIGER
  • 51. •VP NEGATIVO. •INDOL POSITIVO Es la busqueda de diacetil /NEGATIVO. = producto final del acetil- Presencia de triptofanasa metil-carbinol (+/-) MEDIO VP. MEDIO SIM.
  • 52. •CITRATO •FENIL ALANINA NEGATIVO. NEGATIVO. (no utiliza sales (capacidad de la bacteria amonio como para desaminar fuente de nitrgeno) aminoácido fenilalamina) AGAR CITRATO DE CALDO FENIL ALANINA- SIMONS. MALONATO .
  • 53. UREASA NEGATIVA • MOTILIDAD: • LISINA NEGATIVA (no poseen enzima POSITIVA/ (lisina no se ureasa) NEGATIVA descarboxila) CALDO UREA MEDIO SIM MEDIO LIA
  • 54. Tribu: Klebsiella comprende cuatro géneros (Klebsiella, Enterobacter, Hafnia y Serratia). Genero : Klebsiella  Recibió ese nombre en honor a Edwin Klebs, microbiólogo alemán de fines del siglo XIX.  Klebsiella esta compuesta por especies que forman tres grupos fileticos:
  • 55. • K. pneumoniae subespecies pneumoniae, Grupo I rhinoscleromatis y ozaenae. • K.granulomatis • K. ornithinolytica • K. planticola • K. trevisanii Grupo II • K. terrígena. • (este grupo es transferido al nuevo genero Raoultella en honor al bacteriólogo frances Didier Raoult). Grupo III • K. oxytoca Las especies de Klebsiella y Raoultella están ampliamente distribuidas en la naturaleza y en el tubo digestivo.
  • 56. Cuando se recuperan colonias grandes con una consistencia mucoide en las placas de aislamiento se debe de sospechar que es una especie de Klebsiella. En agar MacConkey, las colonias se presentan grandes, mucoides y rojas, y el pigmento rojo suele difundirse en el agar lo que indica fermentación de lactosa.
  • 57. Las especies de aislamiento clínico frecuente son Klebsiella pneumoniae subespecie pneumoniae y K. oxytoca. Klebsiella pneumoniae subespecie pneumoniae Gram negativo Anaerobio facultativo Encapsulado Inmóvil Fermentación de lactosa Se encuentra en la flora normal de la boca, la piel y los intestinos.
  • 58. Puede causar la neumonía enfermedad que causa cambios destructivos a la inflamación y la hemorragia pulmonar humano con la muerte celular (necrosis) que a veces produce, esputo con sangre, mucosa (esputo jalea de grosella).
  • 59. Al igual que con muchas bacterias, el tratamiento recomendado ha cambiado ya que el organismo ha desarrollado resistencias. A menudo son resistentes a múltiples antibióticos. La evidencia actual implica un plásmido como la fuente de los genes de resistencia.  Resistente a ampicilina, carbenicilina y ticarcilina.  Debido ala producción de enzimas beta-lactamasas hacen que sean resistentes a los agentes beta-lactamicos, incluidas las cefalosporinas de tercera generación.  Sensible a amoxicilina-clavulánico y fluorquinolona
  • 60. PRUEBAS BIOQUIMICAS EN Klebsiella pneumoniae  Indol (-) Lisina (+)  Voges-Proskauer (+) Arginina (-) Ureasa (+) Ornitina (-) fermenta: lactosa sacarosa, sorbitol adonitol y arabinosa. Citrato (+)
  • 61. Klebsiella Oxytoca Klebsiella oxytoca es una especie Gram-negativa, estrechamente relacionadas con K. pneumoniae de la que se distingue por ser indol positiva. Casi el 50% de aislamiento ha sido en heces y la siguiente fuente en frecuencia es la sangre.
  • 62. PRUEBAS BIOQUIMICAS Indol: (+) RM: (V) VP : (+) Ureasa: (+) Lisina: (+) Ornitina: (-) Malonato: (+) Motilidad: (-)
  • 63. Diferenciación de especies en los géneros Klebsiella y Raoultella