Este documento trata sobre cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC). Explica los diferentes tipos de cromatografía líquida y los componentes clave de un sistema HPLC como las columnas y la aptitud del sistema. También define conceptos cromatográficos importantes como factores de retención, resolución, platos teóricos y relación señal/ruido que son necesarios para evaluar el rendimiento cromatográfico.

1. HPLC
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA
EFICACIA
HIGH PERFORMANCE LIQUID
CHROMATOGRAPHY

2. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA
EFICACIA
TIPOS DE CROMATOGRAFÍA LIQUIDA:
• CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN (LIQUIDO-
SOLIDO)
• CROMATOGRAFÍA DE REPARTO/ADSORCIÓN (FASES
LIGADAS QUÍMICAMENTE)
• CROMATOGRAFÍA FASE NORMAL
• CROMATOGRAFÍA FASE INVERSA
• CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
• CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR

3. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE
ALTA EFICACIA

4. COLUMNAS PARA HPLC
• FUNCIONAMIENTO REPRODUCIBLE DE COLUMNA A
COLUMNA.
• SUFICIENTES PLATOS TEÓRICOS PARA CADA ANÁLISIS.
• EMPAQUE Y TAMAÑO DE UNIFORME

5. COLUMNAS PARA HPLC
LAS CARACTERISTICAS DE LA COLUMNA INFLUYEN
SOBRE SUCAPACIDAD DE SEPARACION:
• DIAMETRO INTERNO
• LONGITUD
• CONEXIONES
• RELLENO
• TAMAÑO DE PARTICULA

6. COLUMNAS PARA HPLC

7. COLUMNAS PARA HPLC

8. CAUSAS DE FALLA EN UNA
COLUMNA
• CIERTAS FASES MÓVILES PUEDEN QUITAR LA
FASE ENLAZADA DE LA SUPERFICIE DE LA
PARTÍCULA DE SILICONA
• PH, SI SON NECESARIOS USAR COLUMNAS
DISEÑADAS PARA SOPORTAR PH EXTREMOS
• COMPUESTOS EN MUESTRAS QUE SON
FUERTEMENTE ATRAÍDOS A LA FASE
ENLAZADA.
ATAQUE QUÍMICO

9. CAUSAS DE FALLA EN UNA
COLUMNA
• NO A DEJE CAER
• GUARDAR CON CUIDADO EN SU EMPAQUE
ORIGINAL PARA SU PROTECCIÓN
• FASE MÓVIL EJERCE UNA FUERZA SOBRE LA
EMPAQUE DE LA COLUMNA.
• NO GUARDAR LA COLUMNA SIN LAVAR
• DEJAR ENFRIAR
FÍSICAS

10. APTITUD DEL SISTEMA
APTITUD DEL SISTEMA EN TÉCNICAS
ANALÍTICAS CROMATOGRÁFICAS

11. APTITUD DEL SISTEMA
• LAS PRUEBAS DE APTITUD DEL
SISTEMA SON UNA PARTE
INTEGRAL DE LOS MÉTODOS DE
CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS Y
DE GASES. ESTAS PRUEBAS SE
USAN PARA VERIFICAR QUE EL
SISTEMA CROMATOGRAFÍCO ES
ADECUADO PARA EL ANÁLISIS
QUE SE PRETENDE EFECTUAR.
• DETERMINA LA EFICIENCIA DEL
SISTEMA CROMATOGRAFÍCO.

12. FACTORES QUE PUEDEN AFECTAR EL
COMPORTAMIENTO
CROMATOGRAFICO
• PH FASE MÓVIL
• TEMPERATURA
• VELOCIDAD FLUJO
• PRESIÓN
• DIMENSIÓN DE LA COLUMNA
• COMPOSICIÓN FASE ESTACIONARIA
• TAMAÑO DE PARTÍCULA

13. CROMATOGRAMA
• PICO.
• TIEMPO DE RETENCIÓN.
• TIEMPO MUERTO.
• VOLUMEN MUERTO.
• TIEMPO DE RETENCIÓN
RELATIVO.

14. PLATOS TEORICOS
• MEDIDA DE LA EFICIENCIA DE LA
COLUMNA.
• DEPENDE DE LA SUSTANCIA, ASÍ
COMO COMO DE LAS
CONDICIONES
CROMATOGRÁFICAS:

15. FACTOR DE RETENCIÓN K´
• FACTOR DE CAPACIDAD
• RELACIÓN ENTRE EL TR DEL ANALITO Y EL TIEMPO
MUERTO.

16. FACTOR DE SIMETRÍA
• EVALÚA LA SIMETRÍA DEL PICO
COMPARANDO LAS
DISTANCIAS DE LOS BORDES
CON EL MÁXIMO DEL PICO.
• AS = B / A
• AS = W 0.05 /2ª
• MÁXIMO 2.0

17. RESOLUCIÓN
• SEPARACIÓN DE DOS COMPONENTES DE UNA MUESTRA.
• COMPARA LOS ANCHOS Y TIEMPOS DE RETENCIÓN DE LAS
RESPUESTAS DE LOS ANALITOS.
• MÍNIMO 1.5

18. RELACIÓN SEÑAL/RUIDO S/N
• S/N = 2H/H
• H ALTURA DE LA SEÑAL
• H ALTURA DEL RUIDO

19. ESPECIFICACIONES
• 5 INYECCIONES REPETIDAS DEL ESTÁNDAR SE
COMPARAN ENTRE SI PARA DETERMINAR SI CUMPLEN
CON LOS REQUISITOS DE PRECISIÓN.
• %RSD MÁXIMO 2
• O SEGÚN MONOGRAFÍA

20. NINGÚN ANÁLISIS DE MUESTRA ES ACEPTABLE A MENOS
QUE SE HAYA DEMOSTRADO APTITUD DEL SISTEMA

21. 𝑊 𝑆𝑇𝐷 ∗ 𝐴𝑅𝐸𝐴 𝑀𝑇𝐴 ∗ 𝑉𝑂𝐿1 𝑀𝑇𝐴 ∗ 𝐴𝐿𝐼 𝑆𝑇𝐷 ∗ 𝑉𝑂𝐿 2 𝑀𝑇𝐴 ∗ 𝐶𝐴𝑁𝑇 𝐷𝐸𝐶 ∗ 𝑃𝑇 𝑆𝑇𝐷
𝑊 𝑀𝑇𝐴 ∗ 𝐴𝑅𝐸𝐴 𝑆𝑇𝐷 ∗ 𝑉𝑂𝐿1 𝑆𝑇𝐷 ∗ 𝐴𝐿𝐼 𝑀𝑇𝐴 ∗ 𝑉𝑂𝐿 2 𝑆𝑇𝐷 ∗ 𝐶𝑂𝑁𝑇 𝑇𝐸𝑂
CÁLCULO DE ACTIVO EN %

22. PREGUNTA
S