1. Cell-Cycle Inhibition by Helicobacter pylori L-Asparaginase Claudia Scotti, et al DANIEL VANEGAS ISAZA TATIANA ZAPATA CORREA

2. INTRODUCTION HELICOBACTER Gram-negativebacteria. Helixshape. Microaerobic conditions at 37°C. Doesn´t need hydrogen.

3. INTRODUCTION HELICOBACTER PYLORI Livesonthegastricepithelium. Damagethe mucus layer gastricacid. Ulceration and possiblygastriccancer. L- asparaginase.

4. INTRODUCTION L-ASPARAGINASE Destroys asparagine outside the cells. Onlyintacellularreserve. Proliferationincreasestheasparaginedemand.

5. INTRODUCTION L-ASPARAGINASE – CELL CYCLE Relation l-asparaginase/ asparaginesynthetase. Inhibition of cellcycle. Fibroblastic and gastriccell.

6. GENERAL OBJETIVE Demonstrate that H. pylori L-asparaginase plays an important role in cell-cycle inhibition induced by BCF on cultured cells, and show that this inhibition is more pronounced in cells with low expression levels of the enzyme asparaginesynthetase

7. MATERIALES Y METODOS ETICA

8. MATERIALES Y METODOS CULTIVO Peptones, fluidos corporales , sistemas amortiguadores. Fuentes de carbono y sales, Agar. Cepas de H. pylori CCUG 17874, 60.190, G21, G27 y suero fetal bovino Indicadores PH, agentes reductores.

9. MATERIALES Y MÉTODOS PREPARACIÓN MUTANTE 1. Sembrar y cultivar bacterias de una cepa salvaje virulenta sobre un medio que contiene una cantidad de antibiótico. 2. Cultivar por resiembra de las colonias de bacterias resistentes establecidas en 1.

10. MATERIALES Y METODOS PREPARACION MUTANTE 3. La siembra y el cultivo de las bacterias dependientes derivadas de 2. sobre un medio libre de antibiótico hasta la aparición de colonias inversas así escogidas.

12. Proliferación celular in vitro.

13. Formación de una monocapa.

16. Identificar cantidades y componentes.

18. MATERIALES Y METODOS ENSAYO ENZIMATICO Sustrato  enzima  producto. Mide la cantidad de producto por unidad de tiempo. Actividad catalítica.

19. MATERIALES Y METODOS ANTICUERPOS MONOCLONALES Producción de anticuerpos homogéneos. Un solo tipo de célula. Afinidad especifica por un antígeno.

20. MATERIALES Y METODOS WESTERN BLOT Variación del southernblot. Proteínas separadas por electroforesis en gel según tamaño. Transfieren a un filtro incuban con anticuerpos  detectan la unión Ag-Ac.

21. MATERIALES Y METODOS LISIS CELULAR Destrucción de la membrana celular. Liberar proteínas y otros componentes intracelular. Lisis usando: Glucosa DetergentesSln orgánicas

22. MATERIALES Y METODOS ELISA EIA heterogéneo. Fosfatasa alcalina y peroxidasa de rábano. Tres tipos: sándwich competitivo indirecto

23. RESULTADOS FIGURA 1B

24. RESULTADOS FIGURA 4 A

25. RESULTADOS 1. Pre-lytic fraction 2. Periplasmic fraction 3 y 4. Soluble and insoluble spheroplastfractions FIGURA 5 A

26. DISCUSSION

27. DISCUSSION

28. CONCLUSIONS Helicobacter pylori affects 50% of world people, for this reason its important to know about it and identify some diagnostic method that helps in a early detection. This study is important because, it provides information on the behavior of H. pylori and that information can be used to studies to identify possible treatments.

29. CONCLUSIONS L-asparaginase is the responsible factor for cell-cycle inhibition of gastric cell lines for this reason it could be used on the diagnostic of H. pylori-relateddiseases. The L-asparaginase’s role as a potential pathogenic factor could be thoroughly analysed by studying its internalisation in cells of infected patients.

32. Thankyou!