Este documento presenta información sobre la acción de los antibióticos sobre el crecimiento bacteriano. Explica los diferentes mecanismos de acción de los antibióticos como la inhibición de la síntesis de la pared celular, daño a la membrana, inhibición de la síntesis de proteínas y ácidos nucleicos. También describe métodos microbiológicos como Kirby-Bauer y la determinación de la concentración mínima inhibitoria.

1. INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Unidad Santo Tomas
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
Microbiología General
ACCIÓN DE LOS ANTIBIOTICOS SOBRE
EL CRECIMIENTO BACTERIANO
==
GRUPO:
3QV2

2. ⸭ ERLICH: Bala mágica y concepto de quimioterapia.
⸭ WOODS: Descubre mecanismo de acción.
⸭ FLEMING: Descubre la acción de la penicilina.
⸭ CHAIN Y FLOREY: Descubren mecanismo de acción
de la penicilina.

3.  ANTIMICROBIANO: Sustancia inhibidora del crecimiento microbiano
 ANTIBIÓTICO: Sustancia producida por un MO, que es modificada o
sintetizada artificialmente, para inhibir el crecimiento microbiano.
Penicillium Penicilina

4. AGENTES BACTERICIDAS: Causan la muerte de la bacteria.
AGENTES BACTERIOSTÁTICOS: Inhiben el desarrollo y
reproducción del microorganismo.
Obtienen una clasificación de acuerdo a su función a nivel celular.
MECANISMO DE
ACCIÓN
EJEMPLOS
Inhibición de la síntesis de la
pared celular
Penicilinas, cefalosporinas,
vancomicina, bacitracina,
oxacilina, nafcilina
Daño a la membrana plasmática
Polimixina, nistatina, anfotericina
B
Inhibición de la síntesis de
proteínas
Aminoglucósidos, cloranfenicol,
eritromicina, tetraciclina
Inhibición de la síntesis de ácidos
nucleicos
Rifamicina, actinomicina D, ácido
nalidíxico, ciprofloxacina,
norfloxacina

6. MECÁNISMO DE ACCIÓN EN PARED CELULAR
җ Actúan a distintos niveles de la biosíntesis del peptidoglucano, el daño se
produce por la pérdida de la rigidez de la célula bacteriana que puede
causarle la muerte.
җ Agentes bactericidas.
җ La síntesis del peptidoglucano se lleva a cabo en tres etapas y los
distintos antimicrobianos pueden afectar cada una de ellas.
җ Penicilinas y cefalosporinas.
Penicillium sp
Cephalosporium
acremonium

8. ※ Numerosos agentes catiónicos y aniónicos pueden causar la
desorganización de la membrana.
※ Su acción es desorganizar la permeabilidad de la membrana
ocasionando la salida de cationes de la célula bacteriana. Las
polimixinas.
※ Produce desacoplamiento de la fosforilación oxidativa y la formación
de poros por donde puede haber pérdida del contenido citoplasmático
de la bacteria. gramicidina
MECÁNISMO DE ACCIÓN EN LA MEMBRANA
CITOPLÁSMICA

9. Paenibacillus polymyxa.
Polimixida
Bacillus brevis.
Gramicidina

10. MECÁNISMO DE ACCIÓN EN LA SÍNTESIS DE ÁCIDOS
NUCLEICOS.
⸭ Inhibir la síntesis de nucleótidos o causar una interconversión de
nucleótidos.
⸭ Interferir con polimerasas involucradas en la replicación y transcripción del
ADN.
⸭ Quinolonas y fluoroquinolonas
⸭ Su producción es sintética
Ácido nalidíxico Ciprofloxacino.

11. MECÁNISMO DE ACCIÓN EN LA SÍNTESIS DE PROTEÍNAS.
• Inhibición de reconocimineto de RNA t, hacia el sitio A del ribosoma.
• Introducción de errores en la lectura del RNA m (30s).
• Inhibe la formación de enlaces peptídicos (50s).
ANTIBIOTICOS QUE INHIBEN LA SUBUNIDAD RIBOSOMAL
50S
 Familia de Macrólidos, Lincomicina, Clindamicina, Cloranfenicol
ANTIBIOTICOS QUE INHIBEN LA SUBUNIDAD RIBOSOMAL
30S
 Familia de Aminoglucósidos
 Tetraciclinas.

12. Saccharopolyspora erythraea
Macrólido
Tetraciclina

13. REALIZAR ALGUNAS DE LAS TÉCNICAS
MICROBIOLÓGICAS EMPLEADAS PARA
EVALUAR LA ACCIÓN DE CIERTOS
ANTIBIÓTICOS SOBRE DETERMINADAS
CEPAS DE LABORATORIO.

14. MÉTODO DE KIRBY-BAUER
Es un método en el cual se mide cualitativamente la sensibilidad que
tienen algunos microorganismos a diferentes antibióticos. Este
método permite categorizar a los microorganismos en susceptibles,
intermedios o resistentes cuando se enfrentan a un agente
antimicrobiano específico.

15. FUNDAMENTO: El disco impregnado de antibiótico hace
contacto con la superficie húmeda del agar. El agua es
absorbida por el papel de filtro y el antibiótico difunde hacia
el medio circundante. El resultado es una zona de inhibición
del desarrollo con bordes bien delineados.

16. MÉTODO DE DIFUSIÓN DEL ANTIBIÓTICO EN AGAR
EMPLEANDO MULTIDISCO (MÉTODO DE KIRBY-BAUER)

17. Incubar 37ºC
24 hrs

18. FACTORES QUE INTERVIENEN EN ESTE MÉTODO:
o Concentración del antibiótico
o Sensibilidad del microorganismo
o Tiempo y temperatura de incubación
o Ph del medio
o Tamaño del inóculo

19. Ventajas Desventajas
 Los resultados están en
poco tiempo
 La cantidad de
antibióticos es mayor
 Ocupa poco espacio
x Solo puede trabajarse
con una cepa
x Solo es cualitativo
x No es aplicable para
anaerobios, ni para
microorganismos de
crecimiento lento.

20. MÉTODO DE LA DILUCIÓN DEL ANTIBIÓTICO EN AGAR Y
DETERMINACIÓN DE LA CMI.
x 10
Marcar tubos
del 1-10
TUBO 1
3.6 ml H2O destilada
+
6.4 ml ampicilina 2000 µg/ml
TUBOS 2 - 9
3 ml H2O destilada
Efectuar diluciones 1:2
Volumen de transferencia 3 ml
x 10
Marcar cajas 1 - 10
Transferir 2ml de cada solución a
la caja correspondiente

21. Transferir 18 ml de gelosa simple
Trazar 5 sectores en
cada caja
Sembrar una asada de cada cepa
por estria abierta
Incubar 37ºC
24 hrs
Observar y anotar
resultados de CMI

22. DETERMINACIÓN DE LA CMI Y CMB DE UN ANTIBIÓTICO,
POR EL MÉTODO DE LAS DILUCIONES SERIADAS.
x 11 4 ml de caldo
nutritivo
0.5 ml ampicilina
5000 µg/ml
Efectuar diluciones 1:9
Inocular una asada
Micrococcus luteus
Incubar 37ºC
24 hrs
Observar turbidez

23. Tomar asada del tubo con la
concentración menor donde hubo
crecimiento
Resembrar en tubo con 4 ml de
caldo nutritivo
Incubar 37ºC
24 hrs
Observar aparición de
crecimiento

24. Ampicilina concentración de 2000
μg/mlPLACA
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Vol.
Antibiótico(ml.) 6.4 - - - - - - - - -
Vol. de
diluyente (ml.) 3.6 3 3 3 3 3 3 3 3 3
Vol. de
transferencia
(ml.)
- 3 3 3 3 3 3 3 3 3
Dilución
individual
1:1.56
25
1:2 1:2 1:2 1:2 1:2 1:2 1:2 1:2 1:2
Dilución
acumulada
1:1.56
25
1:3.1
25
1:6.25 1:12.5 1:25 1:50 1:100 1:200 1:400 1:800
Concentración
del antibiótico
en tubo (μg/ml)
1280 640 320 160 80 40 20 10 5 2.5
Concentración
del antibiótico
en placa (μg/ml)
128 64 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25

25. Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Vol.
Antibiótico(ml.) 0.5 - - - - - - - - -
Vol. de
diluyente (ml.) 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
Vol. de
transferencia
(ml.)
- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Dilución
individual 1:9 1:9 1:9 1:9 1:9 1:9 1:9 1:9 1:9 1:9
Dilución
acumulada
1:9 1:81 1:729 1:6561 1:59049 1:531441 1:4782969 1:43046721 1:387420489 1:3486784401
Concentración
del antibiótico
en tubo (μg/ml)
555.55 61.72 6.858 7.6X10^-1 8.4X10^-2 9.4X10^-3 1X10^-3 1.1X10^-4 1.29X10^-5 1.43X10-6
Ampicilina concentración de 5000 μg/mlTUBO

26. Equipo Laboratorio E. coli S. aureus K. Pneumoniae M. luteus E. Coli R
1
3 8 μg/ml <0.25 μg/ml >128 μg/ml 16 μg/ml >128 μg/ml
4 8 μg/ml 1 μg/ml >128 μg/ml 8 μg/ml >128 μg/ml
2
3 4 μg/ml 1 μg/ml >128 μg/ml 4 μg/ml >128 μg/ml
4 8 μg/ml 0.5 μg/ml >128 μg/ml 16 μg/ml >128 μg/ml
3
3 8 μg/ml <0.25 μg/ml >128 μg/ml 16 μg/ml >128 μg/ml
4 8 μg/ml 8 μg/ml >128 μg/ml 8 μg/ml >128 μg/ml
4
3 8 μg/ml 8 μg/ml >128 μg/ml 4 μg/ml >128 μg/ml
4 4 μg/ml <0.25 μg/ml >128 μg/ml 8 μg/ml >128 μg/ml
5
3 4 μg/ml <0.25 μg/ml >128 μg/ml 4 μg/ml >128 μg/ml
4 8 μg/ml 4 μg/ml >128 μg/ml 8 μg/ml >128 μg/ml
6
3 >4 μg/ml >4 μg/ml >4 μg/ml >4 μg/ml >4 μg/ml
4 16 μg/ml 4 μg/ml >128 μg/ml 16 μg/ml >128 μg/ml
7
3 16 μg/ml <0.25 μg/ml >128 μg/ml 4 μg/ml >128 μg/ml
4 8 μg/ml 4 μg/ml >128 μg/ml 8 μg/ml >128 μg/ml
8
Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) μg/ml

27. Equipo Testigo Dilución Concentración μg/ml Bactericida/Bacteriostático
1
L3 + 9 10 1.2X10-5 1.4X10-6 Bacteriostático Bacteriostático
L4 + 5 6 8.4X10-2 9.4X10-3 Bactericida Bactericida
2
L3 + 6 7 9.4X10-3 1X10-3 Bacteriostático Bacteriostático
L4 + 8 9 1.1X10-4 1.2X10-5 Bactericida Bactericida
3
L3 + 2 3 61.72 6.8587 Bactericida Bactericida
L4 + - - - - - -
4
L3 + 8 9 1.1X10-4 1.2X10-5 Bacteriostático Bacteriostático
L4 + 8 9 1.1X10-4 1.2X10-5 Bacteriostático Bacteriostático
5
L3 + 9 10 1.2X10-5 1.4X10-6 Bacteriostático Bactericida
L4 + 9 10 1.2X10-5 1.4X10-6 Bacteriostático Bactericida
6
L3 + 5 6 8.4X10-2 9.4X10-3 Bactericida Bactericida
L4 + 8 9 1.1X10-4 1.2X10-5 Bacteriostático Bacteriostático
7
L3 + - - - - - -
L4 + 9 10 1.2X10-5 1.4X10-6 Bacteriostático Bacteriostático
8
L3 + 6 7 9.4X10-3 1X10-3 Bacteriostático Bacteriostático
L4 + 8 10 1.1X10-4 1.4X10-6 Bacteriostático Bacteriostático
Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y Concentración Mínima Bactericida (CMB) μg/ml

28. ANTIBIOTICO Halo diámetro de inhibición (mm.)
K. pneumoniae INTERPRETACIÓN S. Aureus INTERPRETACIÓN
AM 0 Resistente 18 Sensible
E 10 M. Sensible 44 Sensible
CAZ - - - -
CF 0 Resistente 46 Sensible
PE 0 Resistente 18 Sensible
DC 0 Resistente - -
PEF - - 40 Sensible
CXM - - 24 Sensible
GE 15 M. Sensible - -
CTX - - 12 M. Sensible
SXT 20 Sensible 40 Sensible
TE - - - -
CL 15 M. Sensible - -
ENX 30 Sensible - -
NET 20 Sensible - -
CRO 25 Sensible - -
AK 20 Sensible - -
MÉTODODEKIRBY-BAUER

29. 6. Con base a los resultados anteriores, determine la CMI para cada una de las cepas, y
coloque los valores en la tabla siguiente:
7. Anote los resultados de crecimiento de M. luteus, obtenidos en los tubos con diferente
concentración de antibiótico.
8. ¿Cuál fue la CMI del antibiótico sobre M. luteus?
R. 1.2X10-5 μg/ml.
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Crecimiento - - - - - - - - - + +
S. aureus E.Coli K. pneumoniae M. luteus E. Coli pUC18
CMI μg/ml <0.25 4 >128 8 >128