Seminario

1. J U A N F E L I P E G O N Z A L E Z F.
E S T U D I A N T E D E M E D I C I N A
T E R C E R S E M E S T R E U P B

3. INTRODUCTION
• Salmonellosis
• Is an enteric infection due to Salmonella bacteria.
• Salmonellosis is a foodborne disease that represents one of the most important global
and public health threats.
• S.Typhimurion represents one of the main causes of salmonellosis worldwide.
• Various animals (especially poultry, pigs, cattle, and reptiles) can be reservoirs for
Salmonella.
• Humans generally become infected by eating poorly cooked, contaminated food.

4. INTRODUCTION
• The incubation period and the symptoms depend on
the amount of bacteria present in the food, the
immune status of the person and the type of
Salmonella.
• In general, 12 to 36 hours after the consumption of
contaminated food, a clinical picture characterized
by fever, diarrhea, abdominal pain, nausea and
vomiting may appear.
• Symptoms usually last for a few days.

5. SALMONELLA-GENERALITIES
• Salmonella
-Bacteria of the Enterobacteriaceae family.
-There are two species of Salmonella, Salmonella
bongori and Salmonella enterica.
-Salmonella enterica is further divided into six
subspecies and over 2500 serovars.
-Salmonella are found worldwide in both cold-blooded
and warm-blooded animals, and in the environment.
-Strains of Salmonella cause illnesses such as typhoid
fever, paratyphoid fever, and food poisoning
(Salmonellosis).

7. SALMONELLA-GENERALITIES
• Salmonella typhimurium is a pathogenic Gram-negative bacteria predominately
found in the intestinal lumen.
• Its toxicity is due to an outer membrane consisting largely of lipopolysaccharides
(LPS) which protect the bacteria from the environment.
• The LPS is made up of an O-antigen, a polysaccharide core, and lipid A, which
connects it to the outer membrane.
• Lipid A is made up of two phosphorylated glucosamines which are attached to fatty
acids. These phosphate groups determine bacterial toxicity.
• Animals carry an enzyme that specifically removes these phosphate groups in an
attempt to protect themselves from these pathogens.

8. CHINCHILLA
LANIGERA
C.lanigera:
Mammals which belong to the order
Rodentia and family Chinchillidae
native S.American Andes Mountains.
C.Lanigera Was domesticated and
now there are millions in captivity.
Chinchillas are raised and exhibited in
zoos and in farms used as exotic pets.

9. PFGE
• Pulsed-Field Gel Electroforesis:
-Method that uses rare cutting restriction
enzymes that generate a large number of
DNA fragments, whose patterns are
highly apecific for molecular subtyping
when separated by agarose gel
electrophoresis.
-PFGE represents one of the best
genotyping and subtyping methods for
members of the genus Salmonella.

10. GENERAL OBJETIVE
Was to characterize the
Typhimurium strains associated
to an outbreak that occurred on a
Chinchilla farm.

11. MÉTODOS-(OUTBREAK)
-Chinchillas adultas
sufrieron muerte súbita
en una granja comercial
ubicada en la Plata.
-Cada animal en una
jaula de acero
-Agua por manguera
-Condiciones higiénicas
deficientes
-Se encontraron heces
cerca de las jaulas
-Cinco de los 1.260 chinchillas muertos fueron
presentados a la Laboratorio de Diagnóstico de
Enfermedades de las Aves y los Pilíferos
-Para su necropsia y
diagnóstico estudio
diagnóstico.

12. MÉTODOS-AUTOPSIA
Se tomaron muestras en la necropsia se tiñeron con.....
• H & E y ácido periódico de Schiff (PAS).
-Hematoxilina: básica, tiñe estructuras acidas (núcleo) Morado.
-Eosina: acida, tiñe estructuras básicas (citoplasma) Rosado.
-PAS: utilizado en microscopia óptica (tiñe «membranas celulares» al oxidar G.OH y
formar Aldehídos y da color rojizo).
• Gram y Ziehl-Neelsen (Z-N):
-GRAM: bacterias gram positivas (color morado) / bacterias gram negativas (color rosa).
Según morfología (diferencias en la pared bacteriana-doble o sencilla-).
-Z-N: tinsion diferencial usada para la identificación de microorganismos patógenos.

13. MÉTODOS
• Las muestras de tejido también se inocularon en..... Medios de cultivo:
• Hektoen :
Sales biliares (inhiben el desarrollo de la flora), y 2 sistemas indicadores: (i)
1. Azul de bromotimol y fucsina ácida como indicadores de la fermentación de carbohidratos
2.Citrato de hierro como un indicador de la formación de SH2 a partir del tiosulfato.
• Mac Conkey:
Peptonas nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el CHO
fermentable mezcla de sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de gran parte de
la flora Gram positiva.
Microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
• Tripteina Soya Agar:
Favorece el desarrollo y aislamiento de una gran variedad de microorganismos aerobios, y
anaerobios facultativos y estrictos.
Permite la observación de reacciones de hemólisis.

14. MÉTODOS
• Agar Sabouraud:
-MC Alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH ácido, favorecen el
crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. (pueden agregarse otros agentes selectivos
de crecimiento).
• Kauffmann-White-LeMinor: para identificar especies, subespecies, serotipo
-Es un sistema que clasifica al genero salmonella en serotipos basado en los antígenos de
superficie.
Las cepas patógenas de Salmonella typhi, Salmonella paratyphi C, y Salmonella Dublín
llevan el antígeno "Vi" (Vi para la virulencia), que es un subtipo especial de antígeno K de la
cápsula.

15. METODOS-PFGE• Electroforesis:
-Método que utiliza una corriente de energía
controlada para separar moléculas según
tamaño (PM) y carga, a través de una matriz
gelatinosa donde estas migran hacia el ánodo o
hacia el cátodo.
-Fricción con solvente dificulta mov.
-Mov. Browliano.
-Molec. No migran uniformemente.
-El mov. De las molec. Se ve obstaculizado por
un medio que opone resistencia Gel.
Los aislamientos obtenidos de los
cinco chinchillas se determinaron
por PFGE mediante la aplicación
de la enzima XbaI, siguiendo el
protocolo estándar PulseNet en un
CHEF-DR III sistema de
electroforesis en campo pulsado.

16. METODOS-PFGE• Electroforesis en Gel de Campos
Pulsantes: PFGE
-Consigue separar grandes fragmentos de DNA,
induciendo su orientación mediante cambios
periódicos en el campo electico.
-La duración de los campos eléctricos aplicados se
denominan Duración del Pulso y determinan el
tamaño del DNA que se separa.
-Tanto los intervalos como los tamaños son muy
variables.
-Así los fragmentos de gran tamaño que no tuvieron
tiempo de reorientarse no se separan, se mueven
lentamente formando las zonas de compresión
(oscuras)
Los aislamientos obtenidos de los
cinco chinchillas se determinaron
por PFGE mediante la aplicación
de la enzima XbaI, siguiendo el
protocolo estándar PulseNet en un
CHEF-DR III sistema de
electroforesis en campo pulsado.

17. METODOS-PFGE• Electroforesis en Gel de Campos
Pulsantes: PFGE
• Separa fragmentos de DNA de mayor tamaño que la
Electroforesis convencional
• La transferencia a membranas no puede hacerse
directa por se mayores de 20kb.
• Puede ser utilizada para el mapeo genetico de
grandes regiones de DNA.
Los aislamientos obtenidos de los
cinco chinchillas se determinaron
por PFGE mediante la aplicación
de la enzima XbaI, siguiendo el
protocolo estándar PulseNet en un
CHEF-DR III sistema de
electroforesis en campo pulsado.

19. MICROSCOPIA
El examen microscópico de H & E
• Tejidos pulmonares mostró edema e infiltracion severa de celulas inflamatorias
mononucleares con distribución difusa en alveolos y congestion en vasos sanguíneos.
• Los hígados mostraron congestión de los vasos sanguíneos sinusoidales grandes,
pequeños focos de necrosis, y pequeñas áreas focales de celulas inflamatorias
mononucleares infiltradas con distribución difusa.
• Los bazos mostraron depleción linfoide moderado.
• Los estómagos tenían evidente edema en la lámina propia, e infiltracion de celulas
inflamatorias mononucleares severa en la membrana mucosa, con hiperplasia del
epitelio.
• Los intestinos mostraron edema en la lámina propia e infiltracion de celulas
inflamatorias mononucleares en la membrana mucosa, con abundantes colonias
bacterianas.

20. RESULTADOS
1. PAS y Z-N modificado dieron resultados negativos y no se observo crecimiento fúngico
en placas de Agar Sabouraud.
2. Los aislamientos obtenidos de los cinco chinchillas se identificaron como
S.Typhimurium.
3. Los 5 aislamientos se identificaron por Xbal-PFGE, mostrando un perfil electroforético
con 15 bandas definidas entre 670 y 20 kb.
4. El patrón Xbal-PFGE coincidió con un brote de origen alimentario en un hospital en la
Provincia de Buenos Aires en 2013 (Fig. 1).
5. Todos los aislamientos obtenidos en el estudio eran resistentes a la Tetraciclina, que
podría ser el resultado del uso excesivo de este agente agonista antimicrobiano contra
otras infecciones bacterianas.
6. Los resultados apoyan la hipótesis de que los animales adquirieron la infección de la
misma fuente infecciosa.
7. Posibles vías de transmisión pueden estar asociadas con las heces de estos roedores
domésticos, el consumo de alimentos o agua contaminada, ponerse en contacto con
portadores humanos o animales o combinaciones de estos factores.

21. Author
• Caffer M.
etal
Said
• Yes
Yes-No
• The macroscopic and
microscopic lesions
observed
• in our study were
associated with acute
salmonellosis,
• as previously reported in
this animal
species2,7,9,15.

22. Author
• Misirlioglu D. etal
Said
• No
Yes-No
• The S. Typhimurium strains
isolated in our study showed
low levels of antibiotic
resistance, in accordance
with the low levels of
antibiotic resistance
previously observed in
Argentine and Turkish S.
Typhimurium strains isolated
from farmed chinchillas in
1999 and 2002,
respectively2,7,

23. PERSONAL-CONCLUSIONS
1. Many previous studies reported salmonellosis in different
mammals and pets, and several have been focused on
salmonellosis in chinchillas but this is the first study to use
molecular methods for analysis.
2. Molecular methods such as PFGE allow the diagnosis and
subsequent research, so they must be implemented.
3. Animals like chinchillas and other mammals can pose a public
health risk because they can be reservoirs of salmonella, they
could pass it and spread in the same way as humans.
4. Among the animals affected by salmonella are the most
consumed meat by humans so they are a potential source of
infection, taking into account consumption of poorly cooked meat.