Microbiologia Sanitaria

1. Preparación-Dilución de Muestras.
Numeración de Microorganismos aerobios
mesófilos viables.
INFORME DE LABORATORIO N°3
Universidad Nacionalde Ingeniería
Facultad de Ingeniería Ambiental
Escuela ProfesionalIngeniería Sanitaria
MICROBIOLOGÍA SANITARIA I
Integrantes:
Barahona Chunga Carlos 20134166E Esp:Ing. Sanitaria
Toribio Tapia Junior 20130360A Esp:Ing. Sanitaria
Profesor:
Martínez Vila, Álvaro Martín
Fecha:
Sábado,24 de enero del2015

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Ingeniería Microbiología Sanitaria I
Facultad de Ingeniería Ambiental INFORME DE LABORATORIO N°3
1Preparación-Dilución de Muestras. Numeración de Microorganismos
TITULO: Preparación-Dilución de Muestras. Numeración de Microorganismos
aerobios mesófilos viables.
INTEGRANTES:
 Barahona Chunga Carlos
 Toribio Tapia Junior
OBJETIVOS
Objetivos Generales:
Determinar la carga microbiana asociada a una muestra ambiental para evaluar su
calidad higiénica sanitaria.
Objetivos específicos:
 Valorar la importancia de la toma de muestras.
 Aplicar en la práctica las técnicas de preparación y dilución de muestras para
conseguir un adecuado recuento de microorganismos aerobios mesófilos.
 Aprender el procedimiento de numeración de microorganismos mediante los
métodos de Recuento en Placa por Siembra en profundidad y en superficie.
 Utilizar recipientes estériles de polietileno.
FUNDAMENTO TEORICO
TÉCNICAS DE RECUENTO BACTERIANO
Para el recuento de microorganismos presentes en una muestra de agua, suelo, aire, alimento,
cultivos, entre otros, existen diferentes métodos o técnicas:Algunas técnicas son directas y
permiten un recuento de todas las células, tanto las vivas como las muertas. Las medidas
directas incluyen los recuentos directos al microscopio o recuento electrónico,el recuento en
placa, o el cálculo del número más probable (NMP).
Otras son medidas indirectas y miden una propiedad de la masa de las células como son la
turbidez, el peso seco,o una actividad metabólica.
Recuento de colonias o recuento estándar en placa:
Se basa en contar las colonias de microorganismos que se desarrollan después de inocular en
un medio de cultivo adecuado e incubar a una temperatura y tiempo determinados un volumen
determinado de muestra. Se utiliza para determinar el número de células aisladas o

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microorganismos unicelulares viables como bacterias,levaduras, también se utiliza para el
conteo de esporas fúngicas presentes en la muestra.
La muestra a inocular debe ser homogénea y no contener conglomerados de células. Después
de la incubación cada microorganismo o célula viable formará una masa visible de organismos, o
sea una colonia. De esta manera el número de colonias permitirá a su vez determinar el número
de organismos viables en la muestra sembrada. Se pueden utilizar sistemas de siembra en
superficie, o en profundidad.
Generalmente la muestra original se diluye para que el número de colonias desarrolladas en la
placa se encuentren entre 30 y 300 colonias y así permitir un óptimo crecimiento y facilitar la
lectura. Cuando la muestra se diluye el cálculo del resultado se realiza contando las colonias en
aquellas placas que tengan entre 30 y 300, se promedia y se multiplica por el factor de dilución.
Los resultados se expresan en colonias por ml. Los resultados también pueden expresarse en
unidades formadoras de colonias (UFC), el valor de UFC es un valor que expresa el número
relativo de microorganismos de un taxón determinado en un volumen de un metro cúbico de
muestra.
En el caso de alimentos el resultado se considera como un indicador de las características
higiénicas generales del alimento.

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VI. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
-Materiales, medios de cultivo, equipos
 Licuadora ( 20 000 RPM)
 Vaso Licuadora 1lt.
 Balanza Analítica
 Pinzas, Tijeras, Espátula, Cuchillo
 Pipetas Bacteriológicas 10ml y 1ml
 Refrigeradora 25°C
 Diluyente-Agua peptonada para diluciones

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MÉTODO 1: Recuento Estándar en Placa o Recuento en Placa por Siembra en
profundidad o incorporación (Difusión)
Materiales y Equipos:
 Placas Petri
 Pipetas Bacteriológicas 1ml y 10ml
 Baño Agua (Baño María) regulado 14°C-46°c
 Incubadora: 28°-31°C
 Contador de colonias
 Agar Plate Count
Muestra (carne
molida) 10 gr.
Homogenizar
Dilución 10-1
10-2 10-410-3 10-5
1ml 1ml 1ml
9 ml de diluyente
90 ml de
Agua
Peptonada

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Incorporar 15-18ml de APC licuado a 46°C y mezclar:
Control de Esterilidad (C.E.)
Incubar: 31°C x 2 días (placas invertidas)
10-2
10-410-3
10-510-1
1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
Con APC(sin
muestra)
Con APC+ 1ml de AP

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MÉTODO 2: Recuento en Placa de Siembra por extensión en Superficie o
Diseminación (se aplica a conteo>3000gr)
Materiales y Equipos:
 Los indicados en el Método 1
 Estufa: 50°C
 Espátula Drigalsky
 Pipetas de 1ml
Placas Petri con APC solidificado.
Sembramos por extensión, diseminación con espátula Drigalsky
Dejar secar la superficie de placa por 15 minutos. Incubar placas invertidas por 72
horas (3 días).
10-2 10-410-3 10-5
10-1
0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml
Con APC(sin
muestra)
Con APC+ 0.1ml de AP

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VII. RESULTADOS EXPERIMENTALES
MÉTODO 1: Recuento Estándar en Placa o Recuento en Placa por Siembra en
profundidad o incorporación (Difusión)

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MÉTODO 2: Recuento en Placa de Siembra por extensión en Superficie o
Diseminación (se aplica a conteo>3000gr)

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13Preparación-Dilución de Muestras. Numeración de Microorganismos
VIII. DISCUSION-OBSERVACIONES
Al tomar la muestra de carne molida de la licuadora con las pipetas, un pedazo
de carne obstruyó la salida de líquido, para lo cual se tuvo que volver a tomar
la muestra, ya que hubo líquido que no se recogió debido a la obstrucción.
IX. CONCLUSIONES
El recuento de colonias se realiza después de la inoculación del medio de
cultivo y de una incubar a temperatura adecuada.
X. RECOMENDACIONES
Utilizar los guantes de asbesto para tomar las muestras calentadas y evitar
quemaduras.
Esterilizar las pipetas para tomar las muestras y así evitar contaminación por
otros microorganismos que no se quieren analizar.
XI. BIBLIOGRAFIA
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/12-
metodos%20de%20recuento.htm

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http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201504/contLinea/leccin_30_tcnicas_d
e_recuento_bacteriano.html
Biología de los Microorganismos. Autor: Michael T. Madigan
XII. ANEXOS (Fotos, Gráficos, Cuadros, Listas, Normas, Diagramas, Esquemas)

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