El documento describe los métodos para realizar un recuento bacteriano. Explica que el recuento bacteriano cuantifica las células viables mediante la formación de colonias en placas de Petri. Las colonias se cuentan y expresan como Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por mililitro o gramo de muestra. El documento también detalla dos métodos comunes para el recuento - extensión en placa y vertido en placa - y cómo calcular los resultados finales de UFC.

1. RECUENTO BACTERIANODra. Natalia Izurieta CergneuxPRÁCTICA No. 4 – LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA Y MICOLOGIA

2. GENERALIDADESReplicación bacteriana: fisión binaria o bipartición.

3. De una célula madre se originan dos células hijas idénticas.

4. Crecimiento ordenado de todos los constituyentes y estructuras celulares.

5. Aumento exponencial en el número de células.TIPOS DE CRECIMIENTOCRECIMIENTO INDIVIDUALLa bacteria alcanza un tamaño y peso fijo. Constituye el paso previo a la división celular.CRECIMIENTO POBLACIONALEs el incremento en el número de células como consecuencia del crecimiento y división celular.RECUENTO BACTERIANO

6. CONTEO DE CÉLULAS VIABLESALIMENTOCAJA PETRIMICROSCOPIOLa célula viable es aquella capaz de dividirse y formar una colonia en el medio de cultivo.

7. Se basa en que cada colonia surge de una simple célula.

8. Cada colonia contiene una sola especie bacteriana.CONTEO DE CÉLULAS VIABLESEl número de bacterias viables por muestra se expresa en:UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC)Representa cada colonia contada y su número total representa el número total de bacterias viables en la muestra.

10. CONTEO DE CÉLULAS VIABLESMÉTODO DE EXTENDIDO EN PLACAEs el método de elección para anaerobios facultativos y cultivo de microaerófilos.CONTEO DE CÉLULAS VIABLESMÉTODO DE VERTIDO EN PLACA.Esta técnica se usa generalmente para bacterias aerobias obligatorias.

11. CONTEO DE CÉLULAS VIABLESÚtil para la técnica de vertido en placa o extensión en placa.Se siembran volúmenes conocidos de cada diluciónLuego se incuba a 35 – 37 0C durante 24 – 48 horas.

12. TÉCNICAS DE RECUENTOFinalizado el tiempo de incubación, se realiza el recuento. Se toman en cuenta únicamente aquellas cajas Petri que tengan entre 30 y 300 colonias. Este número de colonias es estadísticamente representativo. Aquellas placas que tengan más de 300 colonias se reportan como “INCONTABLES”.

13. TÉCNICAS DE RECUENTOPara el recuento bacteriano se puede usar cuentacolonias.

14. RECUENTO CON CUENTACOLONIASPuede ser contada toda la placa o por cuadrantes. Cuando la carga bacteriana es alta, se toma en cuenta un cuadrante con carga alta, un cuadrante con carga media y un cuadrante con carga baja. Se realiza la sumatoria de los tres cuadrantes y se saca el promedio.Finalmente el promedio se multiplica por 65No. Colonias = (CA + CM + CB /3) * 65

15. CA = 32CM = 19CB = 10SumatoriaΣ = 61Promedio61/3 = 20.33Factor= 20.33*65= 1322

16. OBTENCIÓN DE RESULTADOSTerminado el conteo por cualquier método, se debe aplicar la siguiente fórmula para obtener el No. de UFC/ ml o UFC/g.UFC/ml ó UFC/g = No. de colonias por placa X el factor de dilución * ml de la muestra sembrada*Factor de dilución: inversa de la dilución.

17. EJEMPLOSEJEMPLO 2No. de colonias: 56Dilución: 10 -4Volumen de siembra: 0.2 mlUFC/ ml = 56 X 10000 /0.2UFC/ ml= 2 800.000EJEMPLO 1No. de colonias: 280Dilución: 10 -3Volumen de siembra: 1 mlUFC/ ml = 280 X 1000 /1UFC/ ml= 280.000

18. Cuando se realiza más de una dilución para cada uno de los parámetros se garantiza los resultados obtenidos. Este método disminuye el margen de error y abaliza la calidad de las pruebas. Para obtener los resultados por duplicado se aplica la siguiente fórmula:UFC / ml parámetro = UFC / ml dilución A + UFC / ml dilución B 2

19. EJEMPLOSEjemplo 1Dilución A: 5 600.0000Dilución B: 6 000.000Resultado : 5 600.000 + 6 000.000 / 2 = 5 800.000 UFC / ml FLORA TOTALEjemplo 2Dilución A: 1 245.647Dilución B: 2 340.500Resultado: 1 245.647 + 2 340.500 / 2 = 1 793.074 UFC / ml FLORA COLIFORME