agar chocolate

1. MEDIOS DE CULTIVO EN LA
MICROBIOLOGIA CLINICA
Lic. Tecnologo Medico
Harry Ramírez Hernández

3. INTRODUCCION
• Para cultivar (permitir el crecimiento de microorganismos en
laboratorio), es necesario un ambiente que posea las características
nutritivas necesarias para el microorganismo deseado, el cual se logra
con un medio de cultivo.
• Un medio de cultivo es el conjunto de nutrientes, factores de
crecimiento y otros componentes que crean las condiciones
nutricionales necesarias para el crecimiento de microorganismos.
• Ya que existen muchísimos microorganismos diferentes, se han
diseñado diferentes medios de cultivo que permiten complacer los
requerimientos nutricionales para los variados metabolismos
microbianos (aunque no todos los microorganismos son cultivables
en el laboratorio).

4. COMPONENTES BÁSICOS DE UN MEDIO DE CULTIVO
Una fuente de carbono. Normalmente son azúcares sencillos
como, por ejemplo, glucosa, lactosa, etc., pero existen también
algunos organismos que usan CO2.
Una fuente de nitrógeno. Se suelen usar proteínas parcialmente
hidrolizadas, peptonas.
Amortiguadores de pH (soluciones tampón o buffer). Son
sustancias que ayudan a mantener el pH del medio de cultivo dentro
de un rango adecuado para el crecimiento de los microorganismos.
Por ejemplo, suelen usarse como tampones los fosfatos disódicos o
monosódicos .
Otros componentes, como Na, K, Cl y vitaminas como C y N.

5. MEDIOS DE CULTIVO EN LA MICROBIOLOGIA
Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio con el objetivo de hacer
crecer un microorganismo como bacterias, virus y hongos, aunque
también se utilizan para el crecimiento de células o tejidos.
Principalmente consta de una superficie sólida, semisólida o de una
solución liquida con nutrientes y condiciones favorables
de pH y temperatura para el crecimiento de lo que queramos.
También es necesario controlar la presencia o no de oxígeno o el grado
de humedad.

6. • El agar es un elemento solidificante muy empleado para la
preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados.
• Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo
artificial debe reunir una serie de condiciones como son:
temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado,
así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.

7. • Los medios de cultivo son sustancias que se utilizan para cultivar y
mantener microorganismos en el laboratorio con el objetivo de
hacer crecer microorganismo como bacterias, virus y hongos,
especialmente.
• Los medios de cultivo proporcionan los nutrientes necesarios para
que los microorganismos se multipliquen y crezcan.
• Estos nutrientes pueden incluir carbohidratos, proteínas, sales
minerales y vitaminas.

8. RAZONES POR LOS QUE LOS MEDIOS DE CULTIVO SON IMPORTANTES
• La importancia de los medios de cultivo para microbiología radica
en que son creados con las condiciones idóneas para el crecimiento
y desarrollo de determinadas bacterias. Entre esas condiciones se
encuentran: el grado de humedad, la presión de oxígeno y la
temperatura adecuada
• Lo que llamamos agar es el elemento que permite la solidificación
del medio de cultivo, este es altamente útil en el campo de la
microbiología porque no influye ni interfiere en el crecimiento de las
bacterias.

9. Son importantes en la producción de alimentos y
medicamentos
• Son fundamentales en la producción de alimentos
y medicamentos. Por ejemplo, se utilizan para la
producción de yogur, queso, cerveza, entre otros
productos fermentados. También se emplean para
la elaboración de medicamentos, como los
antibióticos y las vacunas.
Permiten la detección de microorganismos
patógeno
• Pueden ser creados específicamente para detectar
la presencia de microorganismos patógenos que se
encuentran en diferentes muestras como
alimentos, agua y muestras clínicas.
• Esto es de gran relevancia para la prevención y el
control de enfermedades infecciosas.

11. Los medios de cultivo se pueden clasificar en varias formas:
Según su consitencia, Según su función/uso y su origen o
naturaleza
1.- Medios líquidos: Como se
presentan en ese estado son
llamados también caldos Nutritivos
Acostumbran a tener gran variedad
de nutrientes y no tienen agentes
gelificantes. Se utilizan para hacer
crecer los microorganismos.
Esta compuesto de extracto de
carne, peptona y agua.
Se utiliza fundamental mente
cuando se pretende la obtención de
una suspensión bacteriana de una
denominada concentración.

12. 2.- Medios sólidos: Se preparan a través de medios líquidos
agregándoles un agente gelificante. Los más utilizados con la gelatina y
el agar.
La gelatina es una proteína animal obtenida de los huesos. Tiene la
limitación de que es hidrolizada por muchas bacterias y porque su
punto de fusión es bajo.
Contiene Agar a concentración 1.5 – 2%. Es la forma más conocida de
medio de cultivo, que se pone en las Placas de Petri.
Es común utilizar este tipo de medio para aislar colonias o analizar las
características de las colonias.

13. 3.- Medios semisólidos: Se
preparan a partir de los medios
líquidos agregándoles un agente
solidificante en una proporción
menor que para preparar medios
sólidos.
Uno de sus principales usos es
para la investigación de la
movilidad de los
microorganismos como las
bacterias . Poseen 0.3 % de agar.

15. SEGÚN SU FUNCIÓN/USO
• Medio selectivo
Tipo de medio con algunos elementos o nutrientes específicos. La función de este
tipo de medio es que crezcan solo un tipo determinado de microorganismos. Por
ejemplo, si queremos que crezca una especie que es resistente a
un antibiótico como ampicilina, se puede añadir este antibiótico para impedir que
crezcan otros microorganismos.
• Medio diferencial
Medio donde se permite identificar y/o diferenciar (como su nombre indica) una
especie de otra, ambas en el mismo medio. Puede ser debido a su metabolismo, su
crecimiento, etc… acostumbran a llevar un indicador que permite ver esta
diferenciación.
• Medio de enriquecimiento o nutritivo
Contiene nutrientes necesarios para permitir el crecimiento de una amplia
variedad de microorganismos. Se utiliza para conseguir que proliferen la máxima
variedad de microorganismos posibles. Acostumbran a ser los extractos de carne o
levadura con peptonas.

17. Son empleados para detectar
reacciones bioquímicas, con carácter
diferencial de grupos, géneros o
especies microbianas, mediante el
viraje de color del indicador
presente en el medio, demostrando
algunas de sus características.
Estos medios son el TSI, Citrato de
Simmons, SIM y Caldo úrea.
MEDIOS
DIFERENCIALES

18. Medios diferenciales
UREA
LIA

19. TSI (Triple Sugar Iron)
•
•
•
•
 Color: rojo ladrillo
 Inhibidores: no tiene
 Indicador: rojo de fenol
 Sustratos principales: lactosa, sacarosa y Glucosa
 Sustratos secundarios: tiosulfato sódico,
peptona, citrato férrico, amoniaco y extractos.
Es un medio de diferenciación para organismos
entéricos gram negativos basada en su capacidad para
fermentar dextrosa, lactosa y sacarosa y para producir
sulfuro.

20. LIA (Lysine Iron Agar)
• Color: lila
• Inhibidores: no tiene
•
•
•
• Indicador: Púrpura de bromocresol-xilasa
• Sustratos principales: lisina y glucosa
• Sustratos secundarios: peptona, tiosulfato de
sodio, extracto de levaduras.
• Se siembra por picadura profunda con aguja y luego por
estrías en el pico

22. Citrato de Simmons
•
•
•
•
•
 Color: Verde
 Inhibidor: No tiene
 Indicador: Azul de bromotimol
 Sustrato principal: Citrato de sodio
 Sustratos secundarios: fosfato
dipotásico, cloruro de sodio, sulfato de
magnesio y fosfato monoamónico.
• Se siembra por picadura profunda con
aguja y luego por estrías en el pico.

24. SIM (Sulfuro-Indol-Motilidad)
•
•
•
•
•
Color: crema
Inhibidores: No tiene
Indicador: No tiene Sustrato
principal: Peptona
Sustrato secundario: Tiosulfato sódico, hierro y
Amonio.
Este medio se utiliza para comprobar la motilidad,
la formación de H2S( acido sulfhidrico) y la producción
de indol por parte de la bacteria.
Se siembra por picadura

29. Caldo Úrea
Úrea +
Ejm.: Proteus
mirabilis
Ejm.: Klebsiella
pneumoniae

30. Según su origen
Naturales
Son preparados a partir de sustancias naturales como extractos de
tejidos, levadura. Son infusiones cuya composición química no se
conoce exactamente.
Sintéticos
Tienen una composición química definida cualitativa y
cuantitativamente. De este modo es posible obtener resultados
reproducibles
Semisintéticos
Se trata de un cultivo complejo en el que se le añade a un extracto
orgánico, factores de crecimiento aislados debido a la dificultad de
conseguirlos en compuestos naturales.

31. TIPOS DE AGARES DE CULTIVO QUE SE USA EN LA
MICROBIOLOGIA CLINICA
Un medio de cultivo se refiere al conjunto de nutrientes, factores de
crecimiento y algunos otros componentes que ayudan a crear las
condiciones necesarias para el desarrollo de microorganismos.
Estos tienen una gran diversidad metabólica por lo que existen también
diversos medios de cultivo, ya que no podemos tener un medio de
cultivo universal que englobe y cubra las necesidades de cada uno de los
microorganismos existentes.

33. Sangre Agar Base
Es un medio enriquecido y diferencial. Es la combinación de un
agar nutritivo con sangre de mamiferos (normalmente de
cordero, aunque también hay de conejo o humanos) a una
concentración de 5-10%.
Se usa para aislar principalmente microorganismos del
género Streptococcus (S. pyogenes y S. aureus como más
comunes).

34. FUNDAMENTO
• La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un
alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad
de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agares el agente
solidificante.
• El agregado de 5-10 % sangre ovina desfibrinada estéril, promueve el
desarrollo de bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales
y la adecuada observación de las reacciones de hemólisis.
Características del medio
• Medio preparado: ámbar.
• Medio preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza.

35. Agar Chocolate
Es un tipo de agar sangre, en este caso la
sangre se le ha aplicado un tratamiento de
calor para lisar los glóbulos rojos dándole
una coloración más marrón, como de
chocolate.
El agar chocolate es un medio de cul8vo
enriquecido y no selectivo, destinado
principalmente al cultivo y aislamiento de
microorganismos exigentes como
gonococos, meningococos, Streptococcus y
Haemophilus.
Al aplicar este tratamiento calorífico se
liberan factores de crecimiento de los
glóbulos rojos que necesitan estos
microorganismos.

36. AGAR NUTRITIVO
Nutrient Agar (agar nutriente) es un medio de
uso general para el cultivo de una amplia
variedad de organismos bacterianos. En este
medio pueden crecer microorganismos
exigentes como algunas especies de Brucella,
Corynebacterium, Listeria, Neisseria y Vibrio.
El agar nutritivo es un medio de cultivo usado
normalmente como rutina para
todo tipo de bacteria. Es muy útil porque
permanece sólido incluso a relativamente altas
temperaturas. Además, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la superficie,
por lo que se distinguen mejor
las colonias pequeñas.

37. Agar Mac Conkey
• Es un medio selectivo y diferencial para el aislamiento de organismos
coliformes, Shiguelosis, E. Coli, Helicobacter pilory y las Enterobacterias
intestinales a partir de diversas muestras clínicas patógenas.
• Es un medio selectivo y diferencial. En este medio crecen bacterias Gram negativas
tanto aerobias como anaerobias facultativos incluyendo todas las especies de la
familia Enterobacteriaceae. Contiene sales biliares y cristal violeta inhibiendo el
crecimiento de Gram positivas.

39. Agar Sabouraud
Es un medio utilizado para
cultivar hongos. Tiene una
concentración de dextrosa alto y un
pH bajo (5.6) que inhibe el
crecimiento de la mayoría de las
bacterias.
Además, tiene el antibiótico
gentamicina que inhibe
específicamente las bacterias Gram
negativas.

40. Levine (EMB) Agar con (Eosina y Azul de Metileno)
Medio selectivo y diferencial gracias
a los colorantes Eosina y Azul de
Metileno. Estos compuestos son
tóxicos para los Gram positivos .
Es selectivo a partir de la
fermentación de la Lactosa (L+, L-).
Las L- son incolores y las L+ son
negro-azulada y pueden tenir brillo
metálico que a veces es verdoso.

41. Agar Manitol Salado (MSA)
Medio de cultivo selectivo y
diferencial. Contiene una alta
concentración de sal (7.5 –
10%) haciéndolo selectivo
para Staphylococcus.
Además es diferencial por la
fermentación de manitol,
formando los microorganismos
fermentadores (S. aureus)
colonias de color amarillo con o
sin halo amarillo y las no
fermentadores (otras especies
de Staphylococcus) colonias del
color del medio o rojizas.

43. Agar Cysteine lactose electrolyte deficient
(CLED)
Es un medio de cultivo diferencial para
aislamiento, diferenciación y conteo de las
bacterias presentes en la orina.
Favorece el crecimiento de los
microorganismos patógenos urinarios
aunque, debido a la ausencia de electrolitos,
impide la indebida proliferación de especies
de Proteus.
El agar es semitransparente y por acción
de azul de bromofenol, las colonias de
bacterias fermentadoras de lactosa producen
colonias amarillas; y las no fermentadoras de
lactosa dan colonias azules

44. Agar Müller-Hinton
Es un medio nutritivo, no selectivo
con infusión/extracto de carne,
triptona y almidón. Permite el
crecimiento de una gran mayoría de
microorganismos.
Se utiliza para hacer pruebas con
antimicrobianos y antibióticos.
Al no tener una concentración muy
elevada de agar, permite la difusión
de los antimicrobianos con facilidad.

45. Tripteína Soya Agar
Medio utilizado para propósitos generales, favorece el desarrollo y aislamiento de
una gran variedad de microorganismos aerobios, y anaerobios facultativos y estrictos.
Al ser suplementado con sangre permite el crecimiento de microorganismos
exigentes y la clara visualización de reacciones de hemólisis. aunque no es el medio
de preferencia para las bacterias anaerobias.
Este medio de cultivo, universalmente utilizado, contiene peptona de soja y peptona
de caseína en proporciones comprobadas para soportar el crecimiento de una gran
variedad de microorganismos, incluso algunos de los más exigentes, como Neisseria,
Listeria, Brucella y la candidiasis.

46. Agar-Hierro-Triple-Azucar ( TSI)
Es un medio de cultivo nutritivo y diferencial para Gramnegativos. Se usa en
tubos de ensayo con agar inclinado. La diferenciación se basa en si son
capaces de fermentar (o no) la glucosa, la lactosa y/o la sacarosa, además
de si producen (o no) gas y ácido sulfhídrico siendo los resultados lo
siguientes (FOTO):
• Si fermenta glucosa, se acidificará el medio por la parte del fondo y se
volverá amarillo, sinó seguirá rojo
• Si fermenta lactosa y/o sacarosa se volverá amarillo la superfície del
medio
• Si produce ácido sulfhídrico el medio se volverá negro. Esto también
implica que la bacteria es capaz de fermentar glucosa
• Si aparecen roturas del medio es que el microorganismo es productora
de gas.

47. Ejemplos de tubos con TSI.

48. AGAR HEKTOEN ENTÉRICO (HE).
• Es un medio selectivo y diferencial para el aislamiento y diferenciación de especies
del género Salmonella y Shigella. Entre otros componentes, tiene sales biliares y
colorantes como fucsina ácida y azul de bromotimol; estos retrasan el crecimiento
de otras bacterias, favoreciendo el desarrollo de especies Enteropatógenos
• Hektoen Enteric Agar es un medio moderadamente selectivo y de diferenciación
para el aislamiento y el cultivo de microorganismos gram negativos entéricos, y
especialmente para el aislamiento de especies de Shigella y Salmonella a partir de
muestras fecales.

49. AGAR VOGEL-JOHNSON.
Es un medio de cultivo sólido diseñado para el aislamiento de Staphylococcus
aureus, una bacteria que puede causar muchos tipos de infecciones distintas,
incluyendo intoxicaciones alimentarias. Inhibe el crecimiento de todas las gram
negativas y el de algunas gram positivas.
El agar Vogel-Johnson permite la detección temprana del Staphylococcus aureus a
partir de alimentos y muestras clínicas muy contaminados mediante la selección e
identificación de cepas de coagulasa positiva y de fermentación de manitol.

50. LEGIONELLA AGAR BCYE.
El agar BCYE(agar de carbón tamponado y extracto de levadura) es un medio de
cultivo sólido especialmente diseñado para el aislamiento de Legionella y Nocardia,
dos géneros de bacterias responsables de una neumonía grave (potencialmente
mortal) y de una infección pulmonar; en las industrias se utiliza para la confirmación
de Legionella spp. y Legionella pneumophila en agua (agua destinada al consumo
humano, agua caliente para uso sanitario, agua para uso industrial, aguas minerales
naturales para uso termal, agua para actividades recreativas, etc.).

51. AGAR VERDE BRILLANTE.
• El verde brillante es una sustancia inhibidora que impide el crecimiento
de todas las bacterias gram positivas y de la mayoría de gram negativas.
En este sentido, el agar verde brillante es un medio de cultivo sólido
utilizado para el aislamiento de distintas especies de Salmonella ssp
• Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de
Salmonella spp Enterica., excepto Salmonella typhi y Salmonella
paratyphi a partir de muestras clínicas, alimentos, y otros materiales de
importancia sanitaria.

52. AGAR BAIRD-PARKER.
• Es un medio de cultivo sólido
diseñado para el aislamiento
de Staphylococcus aureus, aunque
en este caso permite el crecimiento
de otras especies de estafilococos,
siempre que sean coagulasa
positivos.
• El Baird Parker Agar (Medio base)
es un medio de cultivo selectivo
para la detección y enumeración
de estafilococos en muestras
alimentarias y ambientales.

53. Cómo se diferencia la prueba positiva de la coagulasa de la
negativa
Si sale positivo (por ejemplo, la colonia problema es S. aureus), el
suero coagulará,​ dando como resultado un coágulo (a veces el coágulo
esta tan desarrollado que el líquido se solidifica completamente). Si
sale negativo, el plasma permanece líquido.

54. Brain Heart Infusion (BHI) Agar
• BD Brain Heart Infusion (BHI) Agar es un medio de uso general adecuado
para el cultivo de una amplia variedad de tipos de organismos, incluidos
las bacterias, levaduras y hongos filamentosos, a partir de muestras
clínicas.
• El agar de infusión de cerebro y corazón (BHI) es un medio de cultivo
clásico muy utilizado en microbiología clínica para el cultivo de
organismos exigentes, como estreptococos, neumococos, meningococos e
incluso hongos patógenos.

55. GRACIAS POR TU ATENCION