El documento describe los conceptos básicos de los medios de cultivo para microorganismos. Explica que los medios de cultivo contienen nutrientes y sustancias que permiten el crecimiento de poblaciones de microorganismos. El agar es un elemento común utilizado para solidificar los medios, y se añaden colorantes para detectar procesos como la formación de ácido. Además, factores como la temperatura, humedad y oxígeno afectan el desarrollo de los microorganismos en los cultivos.

2. CONCEPTOS:
 Dado el pequeño tamaño de los microorganismos, la cantidad de
información que puede obtenerse de un individuo es muy limitada. Por
ello es necesario el estudio de poblaciones, que contienen miles o
millones de individuos. Estas poblaciones se obtienen al hacer crecer
los microorganismos bajo condiciones más o menos bien definidas, se
conocen como cultivos.
 La mezcla de sustancias, naturales, sintéticas o ambas, que permite el
crecimiento y la reproducción de microorganismos o bien que permite
mantener su viabilidad es lo que conocemos como Medio de Cultivo
 El agar es un elemento solidificante muy empleado para la
preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados.
Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las
bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.
Medio
de
cultivo
Cultivo

3. AGAR
DISUELTO
AGAR
PRESIPITADO
( SIN DISOLVER)

4.  También se añaden colorantes que actúan como
indicadores para detectar, por ejemplo, la
formación de ácido o como inhibidores del
crecimiento de unas bacterias y no de otras (el
Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo
en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de
Genciana se usa como inhibidor ya que impide el
crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-
positivas).

5. CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO
DE MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en
un medio de cultivo se ve afectado por una serie de
factores de gran importancia y que, en algunos
casos, son ajenos por completo al propio medio.
TEMPERATUR
A
GRADO DE
HUMEDAD
PRESIÓN DE
OXÍGENO
ACIDEZ O
ALCALINIDAD
NUTRIENTES
Y FACTORES
DE
CRECIMIENTO

6. DISPONIBILIDAD DE
NUTRIENTES
ADECUADOS
• Un medio de cultivo adecuado ha de contener como mínimo, carbono,
nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas, vitaminas y otras sustancia
inductoras del crecimiento; sustancias adecuadas para ejercer de donantes o
captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.
• Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los
medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente
asequible de nitrógeno y carbóno
CONSISTENCIA
ADECUADA DEL
MEDIO
• Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo
productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en
estado semisólido
• Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, su inconveniente es que muchos microorganismos no se desarrollan
adecuadamente sino a temperaturas inferiores al punto de fusión de este
solidificante
PRESENCIA (O
AUSENCIA) DE
OXÍGENO Y OTROS
GASES
• Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de
oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán
adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio,
los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas
parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los
anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de
las citadas condiciones.

7. MEDIODE CULTIVOSOLIDO MEDIODE CULTIVO LIQUIDO
MEDIODE CULTIVO SEMI
SOLIDO

8. CONDICIONES
ADECUADAS DE
HUMEDAD
• Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen
desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de
estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de
agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque
el medio.
LUZ AMBIENTAL
• La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar.
Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos
pH
• La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La
mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren
medios más o menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que
no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metabólicos normales
TEMPERATURA
• Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los
psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En
líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor
de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.
ESTERILIDAD
DEL MEDIO
• Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de
vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los
especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el
autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)

9. TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
* MEDIOS DE
CULTIVO
GENERALES.
• Permiten el
crecimiento deuna
gran variedad de
microorganismos.
Pertenecen a esta
categoría las
infusiones de
extractos de carne
y peptona, una
mezcla de
composición similar
a la de los líquidos
orgánicos, que se
utiliza para muchas
bacterias patógenas
* MEDIOS DE
CULTIVO
SELECTIVOS.
•llevan incorporadas
determinadas
sustancias que
inhiben el
crecimiento de un
microorganismo y
facilita el
crecimiento del
microorganismo
que nos interesa.
Pertenecen a esta
categoría el caldo
lactosa bilis verde
brillanteo el agar
Salmonella-
Shigella.
M EDIOS DE
CULTIVO
DIFERENCIALES.
• incorpora
determinadas
sustancias que nos
permiten
diferenciar entre
dos tipos de
microorganismos.
Ej. El agar de sal y
manitol: nos
permite diferenciar
en el caso de los
staphylococos, los
que utilizan el
manitol en su
metabolismo de los
que no.
MEDIOS DE
ENRIQUECIMIENTO.
•son aquellos medios
en los cuales a un
medio base se le
añaden determinadas
sustancias nutritivas
que son necesarias
para el crecimiento de
un microorganismo
exigente.. Por ejemplo
el caldo selenito
cistina o el caldo agar
sangre.

10. ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
Los medios de cultivo deshidratados se deben
almacenar en envases sellados bajo las
condiciones que señale el fabricante.
Generalmente se almacenan en un lugar fresco
(entre 15 y 25°), con poca humedad y protegidos
de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar
cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor
o vapor.
Cada lote de medio de c
ultivo, una
vez preparado, esteriliza
do, revisado
y en su presentación
final, se identifica
mediante una etiqueta
con el nombre del medio
de
cultivo correspondiente,
el número de lote y la fe
cha de caducidad. Se
almacenan en frigorífico

11. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

12. REVISIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Es importante comprobar que el medio se comporta correctamente.
Las pruebas que debes hacer para tener seguridad son:
Revisión macroscópica: Se examina el medio a simple vista,
atendiendo a su color, a su opalescencia y transparencia, a la
humedad en las placas ya preparadas y a la posible aparición
de precipitados.
Vigilancia de Ph: Porque la mayoría de los microorganismos se
desarrollan mejor en medios con un pH neutro.
Vigilancia de la esterilidad: Se lleva a cabo incubando a 30 ºC
durante 72 horas una pequeña porción, representativa del lote
de medio preparado, para comprobar que allí no crecen
gérmenes.
Prueba de la eficacia: En una pequeña porción representativa del
medio preparado, se
inocula un microorganismo normalmente el propio fabricante a
conseja el más adecuado y se cultiva. Así se comprueba si en
el medio de cultivo preparado ese microorganismo se
desarrolla correctamente.

14. MÉTODO DE SIEMBRA POR ESTRÍA
 Se toma una muestra de la población mixta
 Se hacen estrías sobre la superficie de un
medio sólido preparado en una placa Petrí.
Conforme se van haciendo estrías en zigzag
con el asa, cada vez se van depositando en la
superficie del medio menos microorganismos.
 Se flamea el asa, se toca en la región donde se
han realizado las últimas estrías y se continúa
la siembra con la misma técnica, en la
superficie de medio sin sembrar aún.
Repitiendo este proceso varias veces se logra
separar células individuales.
 Se incuba a temperatura adeucuada

16. MÉTODO DE SIEMBRA EN PROFUNDIDAD
 A partir de las diluciones seriadas preparadas
tomamos 1mL de cada una de ellas y lo
depositamos en distintas placas de Petri
vacías y estériles.
 Después añadimos un determinado volumen
del medio de cultivo (10-20 mL) que tenemos
en un baño María para evitar que se
solidifique.
 Dejamos solidificar y luego incubamos en la
estufa durante 24 horas a 37ºC.
 Transcurrido el tiempo realizamos el recuento

18. El medio de cultivo ya está solidificado en
la placa.
Preparamos las diluciones seriadas y
añadimos a cada placa 1 mL
Para extender sobre la superficie de la
placa la muestra se utiliza un asa de vidrio
MÉTODO DE SIEMBRA EN SUPERFICIE

19. RECUENTO
MICROBIANO

20. Para el recuento de microorganismos
presentes en una muestra de agua,
suelo, aire, alimento, cultivos, entre
otros, existen diferentes métodos o
técnicas: Algunas técnicas son directas
y permiten un recuento de todas las células,
tanto las vivas como las muertas.
Las medidas directas incluyen los recuentos directos al
microscopio o recuento electrónico, el recuento en
placa, o
el cálculo del número más probable (NMP).
Otras son medidas indirectas y miden una propiedad
de la
masa de las células como son la turbidez, el peso seco,
o una

21. RECUENTOS DIRECTOS AL
MICROSCOPIO
Se basa en colocar un volumen determinado de células y
realizar el conteo utilizando un microscopio. Para ello se
utiliza la cámara de recuento de Petroff-Hauser o de
Neubauer: consistente en un portaobjetos con una
excavación de 0.02 mm de profundidad en un área de 1
milímetro cuadrado, con una rejilla dividida en 25 cuadrados
grandes los cuales a su vez se subdividen en 16 cuadrados
de 4X4 o sea que la muestra se distribuye en 400 celdillas.
El recuento celular se calcula así: n x 25 x 50 x 1000 =
concentración de células/ml

22.  Generalmente la muestra original se diluye para que el
número de colonias no exceda las 300 unidades
 Cuando la muestra se diluye el cálculo del resultado se
realiza contando las colonias en aquellas placas que
tengan entre 30 y 300, se promedia y se multiplica por el
factor de dilución; Los resultados se expresan en
unidades formadoras de colonias (UFC), el valor de
UFC es un valor que expresa el número relativo de
microorganismos de un taxón determinado en un
volumen de un metro cúbico de muestra.
RECUENTOS EN PLACA

23. PARA EL RECUENTO DE
COLONIAS SE EMPLEAN
EQUIPOS QUE CONSISTE EN
UNA PANTALLA
ILUMINADA LA CUAL POSEE
UNA GRAN LENTE DE
AUMENTO; PUEDEN SER:
CONTADORES DE
COLONIAS EN LOS CUALES
LA CAJA DE PETRI SE
AJUSTA EN UNA
PLATAFORMA Y SE
ILUMINA POR DEBAJO Y AL
MISMO TIEMPO LA LENTE
AUMENTA 1.5 VECES EL
TAMAÑO DEL OBJETO.CUENTA
COLONIAS

24. Utilizados cuando el número de bacterias es bajo. Son
filtros con un poro de 0,45 mm que retienen las bacterias.
Se filtra un volumen dado y se coloca el filtro sobre una
placa del medio de cultivo apropiado.
RECUENTOS EN FILTROS DE MEMBRANA

25. Basado en un método estadístico. Dependiendo del
número de m.o que sospechamos que puede tener
la muestra existen distintas tablas de trabajo de
números más probables. Se utiliza sobre todo en la
industria, para el análisis de agua.
RECUENTO DE NUMERO MAS PROBABLE