Microbiologia 5.

MEDIOS DE CULTIVO, SIEMBRA, AISLAMIENTO, TÉCNICA ASÉPTICA Y TRANSFERENCIA DE
MICROORGANISMOS
PRÁCTICA DE MICROBIOLOGÍA GENERAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
E.A.P. INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

INTEGRANTES:
•

Cortijo Palacios Kiara.

•

Gamboa Cruzado Wagner.

•

Taboada Rosales Yacky.

•

Villaca Terrones Walter.

2011

MEDIOS DE CULTIVO, SIEMBRA, AISLAMIENTO, TÉCNICA ASÉPTICA Y
TRANSFERENCIA DE MICROORGANISMOS

I.

INTRODUCCIÓN

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos.
La diversidad metabólica de los microorganismos es muy amplia; por ello, la variedad de
medios de cultivo es también muy grande, no existiendo un medio de cultivo universal
adecuado para todos ellos.
Los microorganismos se cultivan en agua, a la que se han añadido los nutrientes apropiados,
dando una solución acuosa que se denomina medio de cultivo. Los nutrientes existentes en un
medio de cultivo dan a la célula microbiana todos los ingredientes requeridos para que se
produzca más células semejantes a ella misma. Además de las fuentes de energía, que puedan
ser sustancias orgánicas e inorgánicas o luz, el medio de cultivo debe tener fuentes de
carbono, nitrógeno y otros macro y micronutrientes importantes para el desarrollo de los
microorganismos.
Para el cultivo, aislamiento e identificación de un microorganismo en el laboratorio, es
necesario realizar técnicas de siembra de la muestra en un respectivo medio de cultivo. Estas
técnicas varían según el estado físico del medio o las necesidades gaseosas de los
microorganismos (aeróbicos, anaeróbicos, etc.). Una condición básica de la siembra es que
debe realizarse bajo rigurosas reglas de asepsia, evitando el crecimiento de contaminantes.

II.

OBJETIVOS
•

Describir los pasos en la preparaci0n de medios de cultivo, indicando los componentes
básicos necesarios en su formulación.

•

Obtener colonias de bacterias en cultivo puro mediante la inoculación (siembra por
estría en superficie)

•

Aplicar las técnicas de trabajo aséptico y de su manipulación de microorganismos.

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III.

FUNDAMENTO TEÓRICO

CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
•

AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. El
componente predominante en el agar bacteriológico es un polisacárido al que
acompañan algunas impurezas y que se obtiene de ciertas algas marinas. Un gel de
agar al 1-2 % en agua licua hacia los 100°C y se gelifica alrededor de los 40°C,
dependiendo de su grado de pureza. Con la excepción de algunos microorganismos
marinos, el agar no es empleado como nutriente por las bacterias.

•

EXTRACTOS. Son extraídos, con agua y calor, de ciertos órganos o tejidos animales o
vegetales (p.e.: carne, hígado, semillas...) y posteriormente concentrados hasta la
forma final de pasta o polvo.
Se utilizan de forma deshidratada.

•

PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales
minerales que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o
vegetales (soja, carne, gelatina, caseína...). Son muy ricas en péptidos y aminoácidos.

•

SISTEMAS AMORTIGUADORES. Son incorporados al medio de cultivo para mantener el
pH dentro del rango óptimo de crecimiento bacteriano.

•

INDICADORES DE pH. Son compuestos que presentan una coloración diferente según
la acidez basicidad del medio. Cada indicador presenta colores diferentes además de
un rango propio de valor de pH al cual cambia de color. Se añaden a menudo a los
medios de cultivo para detectar variaciones de pH.

•

AGENTES REDUCTORES. Se añaden al medio para crear condiciones que permitan el
desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaeróbicos.

•

AGENTES SELECTIVOS. Permiten el crecimiento de determinados microorganismos e
impiden el crecimiento de otros; p.e. sales biliares, antibióticos, etc.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo pueden ser sólidos o líquidos. La composición de estos medios puede
ser definida (medio sintético) o no definida (medio complejo). No todos los medios de cultivo

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son iguales, ni todos los microorganismos pueden crecer en todos los medios de cultivo.
Hablamos de medio mineral o basal cuando se trata de un medio que sólo contiene
compuestos inorgánicos. Con la adición de una fuente de carbono orgánica a este medio
mineral obtendremos lo que se llama medio mínimo. Un medio rico es aquel medio con todos
los tipos de requerimientos nutritivos (fuente de carbono, nitrógeno, fósforo, azufre, sales
minerales y factores de crecimiento) que permiten el crecimiento de la mayoría de
microorganismos heterótrofos. Aún así no hay un medio universal que sirva para aislar los
diferentes tipos de microorganismos que existen. Un medio general es aquel que permite el
desarrollo de una gran variedad de microorganismos.
A veces antes de hacer el aislamiento sobre un medio determinado, cuando la población del
microorganismo que queremos aislar es mucho más baja que la del resto de microorganismos,
previamente se hace crecer la muestra en un medio de enriquecimiento líquido. Este medio
favorece el crecimiento de un determinado tipo de microorganismos (sin llegar a inhibir
totalmente el crecimiento del resto) de forma que al final de la incubación la población del
microorganismo que queremos aislar es mucho más grande que la de los otros.
Cualquier medio de cultivo que favorece el crecimiento de un tipo o grupo de microorganismo,
e inhibe el crecimiento del resto de la flora microbiana presente en el inóculo, se llama medio
selectivo.
Generalmente estos medios contienen productos inhibidores que no afectan el crecimiento
del microorganismo o grupo de microorganismos que queremos aislar, pero sí al resto de la
biota. Los medios selectivos son de mucha utilidad en los hospitales para aislar o hacer
recuentos de microorganismos patógenos. A veces la selectividad del cultivo viene dada por las
condiciones de crecimiento (anaerobiosis, temperatura, etc.).
Aquellos medios cuya composición permite poner de relieve ciertas propiedades metabólicas
de los microorganismos, y por tanto diferenciarlos en base a estas propiedades, se denominan
medios diferenciales. Las diferencias entre los microorganismos se pueden poner de
manifiesto por la morfología o coloración colonial, coloración del medio de crecimiento,
aparición de burbujas, precipitación de algún componente del medio, etc.
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
El proceso de aislamiento consiste en disponer de la descendencia de un individuo (célula)
inmovilizada sobre la superficie de un medio sólido y separada del resto de individuos
presentes en el cultivo mixto. Esta célula, en las condiciones de crecimiento adecuadas dará
lugar a una descendencia (clon) que resultará macroscópicamente visible y que se llama
colonia. Cada colonia contiene millones o miles de millones de células idénticas y con el mismo
origen y propiedades. Se puede demostrar que prácticamente cada colonia procede de una
sola célula o de un grupo de células del mismo tipo si el microorganismo forma agregados. Por
ello lo más correcto es hablar de unidades formadoras de colonias (UFC) al referirnos al origen
de una colonia. El cultivo descendiente de una misma colonia es un cultivo puro.

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En los primeros tiempos de la Microbiología se utilizaban como sustratos sólidos para
inmovilizar los microorganismos patatas o pan, con el inconveniente de la opacidad de estos
sustratos. En el laboratorio de Robert Koch se desarrollaron técnicas para solidificar un medio
líquido con composición conocida añadiendo una sustancia sin opacidad y con la posibilidad de
modificar la composición del medio líquido según los requerimientos nutricionales del
microorganismo a aislar.
La gelatina fue el primer agente solidificante utilizado por Koch, sin embargo, presentaba el
inconveniente de que algunos microorganismos son capaces de utilizarla para su crecimiento.
Entonces la gelatina fue sustituida por el agar; introducido por Fanny Eilshemius (1881). El agar
es un polisacárido que se obtiene de algunas algas rojas y para pasar de sólido a líquido se
debe calentar por encima de los 100°C y una vez fundido es mantiene líquido hasta enfriarse a
44°C.
INÓCULO Y SIEMBRA
Inoculó es la masa microbiana que se utiliza para sembrar el medio de cultivo. Para evitar
contaminaciones a la hora de inocular el medio de cultivo, habitualmente se trabaja al lado de
la llama del mechero Bunsen. Para la toma del inóculo a partir de una muestra a examinar a
partir de un medio sólido o de un tubo con líquido, se recomiendan las maniobras siguientes:
1.- Colocar frente al mechero la muestra a analizar y el resto del material necesario (tubos,
placas...) de manera que sea fácilmente accesible.
2.- Tomar el asa de siembra o la pipeta. La pipeta debe estar previamente esterilizada. Se debe
flamear el asa de siembra hasta que el filamento alcance un rojo incandescente y después
enfriar en la proximidad de la llama (unos 10 segundos).
3.- Tomar con la otra mano el recipiente (tubo, placa...) que contiene la muestra a analizar:
A. Si la muestra está en un tubo, quitar el tapón y flamear la boca del tubo.
B. Si la muestra está en una placa de Petri, colocar la placa invertida sobre la mesa y
levantar la parte de la placa que contiene el crecimiento bacteriano. Situar en la
proximidad de la llama del mechero.
4.- Trabajando en todo momento en la proximidad de la llama, tomar la alícuota o inoculó:
A. Si el medio es líquido agitar ligeramente el tubo e introducir la pipeta o el asa de
siembra en la cual quedará adherida una gota por tensión superficial.
B. Si el medio es sólido, rozar con el asa de siembra una pequeña porción de colonia.
C. Si la muestra se encuentra en la profundidad del agar, hundir el filamento dentro del
medio hasta tomar una pequeña porción.
5.- Transferir el inoculó a otro medio de cultivo estéril, tomando las mismas precauciones en
su manejo (flameando la boca del tubo, trabajando en la proximidad de la llama...)
A. Si la transferencia va a ser a un caldo líquido, descargar el inoculó mediante agitación
del asa de siembra en aquél o la expulsión del volumen pipeteado.

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B. Si la transferencia se va a realizar a un tubo de agar inclinado, introducir el asa con el
inoculó y sembrar en zigzag sobre la superficie del agar o bien sembrar en picadura en
la profundidad del medio.
C. Si la transferencia se va a hacer sobre un medio sólido en placa de Petri, existen
diferentes tipos de siembra: extensión de una gota con asa de vidrio, siembra en masa
y por agotamiento en placa.
6.- Una vez realizada la transferencia:
A. En el caso de los tubos, flamear la boca antes de colocar el tapón. Identificar los tubos
e incubar a temperatura adecuada durante el tiempo necesario para que crezcan los
microorganismos.
B. En el caso de la placa de Petri, tapar la placa. Identificar las placas marcándolas en la
base e incubar en posición invertida para evitar que e agua de condensación se
deposite sobre la superficie del agar, lo cual impediría la obtención de colonias
aisladas.

TÉCNICAS DE AISLAMIENTO
•

Técnica de aislamiento por estría escocesa o agotamiento en placa

La siembra por estría escocesa es un método cualitativo de aislamiento de microorganismos
por agotamiento en placa a partir de una muestra natural o de un cultivo de laboratorio. Este
método está basado en arrastrar, mediante un asa de siembra, un número cada vez más
pequeño de individuos.
Es un método rápido y simple de agotamiento progresivo y continuo del inóculo sobre un
medio sólido contenido en una placa de Petri. El objetivo es obtener, a partir de un elevado
número de bacterias, un número reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la
superficie de la placa.
Al incubar la placa, y dejar crecer las bacterias distribuidas sobre ella, cada una de las bacterias
originará una colonia.
•

Técnica de aislamiento por banco de diluciones y recuento de células viables

El aislamiento de microorganismos mediante banco de diluciones es un método tanto
cualitativo como cuantitativo. Es cualitativo porque permite diferenciar las diferentes
morfologías coloniales y también es cuantitativo porque permite conocer el número de
microorganismos que hay en una suspensión.
Consiste en realizar diluciones sucesivas de la muestra en condiciones de esterilidad, de
manera que se va reduciendo el número de microorganismos de la suspensión inicial, con el
objeto de sembrar después cantidades conocidas de las diluciones en placas de Petri.
Evidentemente, el número de microorganismos en algunas de las diluciones será tal que al
distribuir una parte de ella en una placa originará colonias separadas en un número óptimo
para su recuento.

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Las diluciones se realizan en tubos que contienen una disolución mineral isotónica (solución
Ringer 1/4) que mantiene la viabilidad de las células pero no permite la división celular. De los
tubos de las diluciones se siembra un volumen conocido, 0.01 ó 0.1 ml (10 ó 100 μl), sobre una
placa de
Petri.
Conociendo el número de colonias (UFC), la cantidad sembrada y la dilución correspondiente,
esta técnica permite evaluar el número de microorganismos viables en la muestra original.
IV.

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales biológicos:
•

Cultivo puro de Escherichia coli (A)

•

Cultivo puro de Bacillus subtilis (B)

•

Suspensión bacteriana mixta (A + B)

•

Suspensión de Saccharomyces cerevisiae

Materiales de laboratorio:
•

Frascos de agar agar, extracto de carne, peptona, NaCl y agar MacConkey

•

Placas petri con agar nutritivo

•

Placas con agar oxitetraciclina glucosa extracto de levadura (OGY)

•

Tubos con agar oxitetraciclina glucosa extracto de levadura (OGY)

•

Matraz Erlenmeyer con 20ml de SSF estéril

•

Estufa o incubadora

•

Mechero de alcohol

•

Asa bacteriológica calibrada y en codo

•

Fósforos

•

Plumón de tinta indeleble

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V.

PROCEDIMIENTO

V.1.

Técnicas de siembra y aislamiento

V.1.A. Siembra por estria en superficie e agar nutritivo
•

Marcar la base de la placa petri donde se depositará el inóculo y donde comenzarán
las estrías.

•

Esterilizar el asa calibrada por flameado en el mechero y dejar enfriar.

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•

Primero con una asad tomar una muestra de agua contaminada y colocaralo en la
superficie del primer cuadrante dela placa.

•

Tomar una asada de la suspensión bacteriana de bacillus y colocarlo en la superficie
del primer cuadrante de la placa con agar nutritivo, agotar la muestra y realizar las
estrias continuas en cuatro cuadrantes. La siembra de los siguientes cuadrantes se
inicia a partir de la porción final de la anterior estría.

TSA

•

Rotular las placas y tubos e incubarlos a 37°C por 24 horas. Los tubos de agar OGY
incubar a temperatura ambiente por 5 a 7 días.

•

Realizar un análisis de las características culturales (de las colonias aisladas).

4.2.2. Siembra por suspensión en caldo nutritivo
•

Esterilizar el asa calibrada por flameado en el mechero y dejar enfriar

•

Tomar una muestra de cultivo puro bacteriano (A) en frascos con agar nutritivo.

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•

Coger el tubo conteniendo el medio líquido, destapar el medio y flamear a la llama del
mechero ligeramente en las paredes del tubo el inóculo, llevarlo en posición vertical el
tubo y agitar ligeramente.

•

Esterilizar el asa de siembra.

•

Repetir lo anterior utilizando el cultivo de Escherichia coli (B)

•

Rotular los tubos e incubarlos a 37°C por 24 horas.

•

Realizar un análisis de la forma de incubamiento en medio líquido. Esquematizar lo
observado.

Siembra en caldo con Escherichia coli

Siembra en caldo con Bacillus
VI.

RESULTADOS:

MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO:
•

Agua contaminada

Observamos la aparición de colonias en la placa, distribuidas en los
cuatro cuadrantes. Estos microorganismos que se encuentran en la placa
están muy aislados. En un cuadrante se encuentra una colonia en gran
Página
proporción.
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•

Se cultivaron Bacillus Subtilis, el cual es una bacteria, en placas con agar sólido TSA
(agar soja triplicasa). Incubamos a 37°C por 24 horas.

Observamos la aparición de colonias en la placa, distribuidas en los
cuatro cuadrantes. En el último cuadrante se pueden apreciar colonias
más separadas. Los colores de las colonias son de color crema, además
podemos añadir que el nutriente utilizado fue efectivo para la muestra de
Bacillus subtilis.

MEDIO DE CULTIVO EN CALDO
•

Cultivamos Bacillus en una medio de cultivo en caldo, y se obtuvo el siguiente
resultado:

Se logra apreciar la turbidez en la parte inferior del tubo de ensayo,
dándonos una respuesta de que el Bacillus es anaeróbico y contrastando
con daros bibliográficos, esta bacteria puede ser aerobia o también
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anaerobia facultativa.


•

Cultivamos Escherichia coli en un medio de cultivo en caldo, obteniendo el siguiente
resultado:

Se aprecia una turbidez en la parte inferior del tubo, pero en mayor
concentración a diferencia del resultado obtenido anteriormente.
Entonces, decimos también que la Escherichia coli también es anaeróbico.

VII.

DISCUSIONES
 Según, BROCK (2001): “Una vez que se ha preparado un medio de cultivo, puede
ser inoculado (es decir, se le añaden organismos) y a continuación incubado en
condiciones que favorezca el crecimiento bacteriano. En general, se tratará del
crecimiento de un cultivo axenico o puro, esto es, de un cultivo que contiene solo
un único tipo de microorganismo. Para obtener y mantener un cultivo axenico o
puro es esencial evitar la entrada en el, de otros organismos. Los organismos no
deseados, llamados contaminantes, son muy ubicuos, por lo que se han diseñando
técnicas microbiológicas para evitarlos. Un método importante para obtener
cultivos axenicos o puros y para asegurara la pureza de un cultivo es el uso de
medios sólidos en placas de Petri”.

 Según PELCZAR, REID Y CHAN (1995) refieren que: “Para mejorar las condiciones
de aislamiento de algunos tipos fisiológicos poco frecuentes de bacterias, los
procedimientos de siembra en placa deberán estar presedidos del desarrollo de las
bacterias en un cultivo de enriquecimiento. El principio de esto, es procurar un
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ambiente de cultivo diseñado (medio de composición conocida y condiciones
específicas de incubación) que pueda favorecer el desarrollo de cierto tipo
concreto de bacterias que necesitamos para que no sea adecuado para los demás.
Lo medios de enriquecimiento se usan generalmente cuando el tipo de bacteria
que queremos aislar se encuentra en muy pequeñas cantidades y se desarrolla con
mayor lentitud que muchas de las otras especies presentes en el inoculo”.

 Según BROCK: “Los medios de cultivo se preparan con frecuencia en forma
semisólida o solida mediante la adición al medio liquido de un agente solidificante.
Los medios sólidos inmovilizan a las células, permitiéndoles crecer y formar masas
aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias bacterianas pueden ser de forma y
tamaño variable dependiendo del organismo, las condiciones del cultivo, el
suministro de nutrientes (como la cantidad de oxigeno presente), y otros
parámetro fisiológicos. Algunas bacterias producen pigmentos que dan color a las
colonias. Independientemente de su posible pigmentación, las colonias permiten
al microbiólogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan más de
un tipo de colonia no fueron sembradas con cultivo axenico o puro. Los medios
sólidos se preparan igual que los líquidos salvo que antes de esterilizar los medios,
se les añade agar como gelificante, normalmente al 1.5%. El agar se funde durante
el proceso de esterilización y el medio fundido se vierte sobre placas de cristal o de
plástico, y se deja que solidifique antes de usarse.

 Según PELCZAR, REID Y CHAN refieren que: “las técnicas de siembra en placa por
estrías o por difusión se pueden hacer convenientemente y con un equipo mínimo;
estos son procedimientos de rutina que se efectúan para asilar bacterias en cultivo
puro. Aunque una de las limitaciones es que solo pequeñas cantidades de la
muestra pueden ser esparcidas sobre la superficie del medio de cultivo. El
principio de la técnica de la placa vertida es la dilución (adelgazamiento) de la
muestra en tubos con agar fundido y enfriado. Se necesita hacer diluciones en más
de un tubo para obtener colonias bien aisladas, si es que no se conoce la magnitud
de la población bacteriana de la muestra antes de manejarla. El medio se mantiene
al estado liquido a una temperatura de 45º C para permitir que el inoculo se
distribuya adecuadamente en el medio. Una vez sembrado se pone en cajas de
petri, se observaran colonias tanto en la superficie como entre el medio cuando
este solidifica. Las técnicas de siembra por estrías (o por diseminación) y las de
placa vertida para aislar cierta clase de bacterias, pueden mejorarse con medios de
cultivos selectivos o diferenciales. También es posible tratar el medio para eliminar
otro tipo de bacterias diferentes de las que se desea aislar, antes de sembrar en
las placas. Por ejemplo: supóngase que la tarea es aislar solamente bacterias
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formadoras de esporas. Como las esporas son muy resistentes al calor, la muestra
se someterá a temperaturas de más o menos 85ºC durante 5 minutos antes de
sembrar las placas. El tratamiento con calor destruirá toda o la mayoría de las
formas esporuladas, y cada colonia que se desarrolle será de las que formen
esporas”.

 Según BROCK: “el problema más común es la contaminación ambiental a través
del aire, ya que este siempre contiene polvo en suspensión que generalmente
lleva a una comunidad de microorganismos. Cuando las placas o tubos se abren
deben manejarse de tal modo que los contaminantes del aire no penetren. La
transferencia aséptica de un cultivo desde un tubo con medio a otro, se realiza
habitualmente con el asa o aguja de siembra previamente esterilizada a la llama
por incandescencia. Los cultivos en los que ha habido crecimiento se pueden
transferir luego a la superficie de placas con agar donde se desarrollaran colonias
como resultado del crecimiento y división de las células aisladas que han sido
sembradas”

VIII.

•

CONCLUSIONES

Los medios de cultivo satisfacen las necesidades nutritivas de los microorganismos y
pueden ser químicamente definido o complejo.

•

Los compuestos químicos presentes en una célula viva se forman a partir de
nutrientes.

•

Los microorganismos se pueden cultivar en medios de cultivos que contienen los
nutrientes necesarios. La obtención de cultivos puros requiere la puesta en práctica de
técnicas asépticas.

•

Cuando se trabaja con cultivos microbianos, la técnica aséptica se utiliza para prevenir
la introducción de organismos adicionales al cultivo. Se han aplicado procesos de
desinfección y esterilización para limitar o eliminar la presencia de microorganismos.

IX.

CUESTIONARIO

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1) ¿Que es un medio de cultivo?
“Un medio de cultivo consiste en una mezcla equilibrada de agua y los nutrientes necesarios
para lograr el crecimiento de un microorganismos.”
Un medio de cultivo se refiere a aquel lugar en el espacio en el que se reúnen las
características necesarias para el crecimiento y desarrollo, en este caso microbiano. Las
sustancias necesarias para el crecimiento de los microorganismos pueden ser proporcionadas
por un sistema vivo(in Vitro).
2) ¿Con que fin se realiza la siembra de estriación?
Método de estriación o siembra por estría en superficie: se utiliza con el fin de aislar bacterias
solas de un grupo con múltiples géneros.
Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de
siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la
superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri (a las placas Petri también se les
denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa, cada
vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A continuación, se
flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la
siembra con la misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo este
proceso varias veces se logra separar células individuales. A continuación, las placas se incuban
en un lugar adecuado, permitiendo que las células aisladas experimenten un número
suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente
representa un clon derivado de una sola célula, no podemos asegurarlo. Quizás, dos células
quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. Por tanto, para
asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a
partir de una colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la
segunda vez, serán, casi con toda seguridad, cultivos axénicos.
3) ¿Qué se entiende por cultivo puro y por cultivo mixto?
•

Cultivo axenico o puro:

Se refiere a un cultivo microbiano que contiene una única clase de microorganismo. Para
mantener u cultivo axenico o puro es esencial evitar la entrada en el de otros organismos.los

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organismos no deseados, llamados contaminantes, son muy ubicuos, por lo que se han
diseñado técnicas microbiológicas para evitarlos. Un método importante para obtener cultivos
puros o axenicos y para asegurar la pureza de un cultivo es el uso de medios sólidos en placas
petri.
•

Cultivo mixto:

Es cuando contiene más de una especie de microorganismos se denomina cultivo mixto.
Los cultivos puros se obtienen habitualmente de cultivos mixtos (que contienen varias
especies), por métodos que separan las células de modo que, cuando se multiplican, cada una
formará una colonia distinta, que luego puede usarse para establecer nuevos cultivos con la
seguridad de que tendrán sólo un tipo de organismo.

4) ¿Por qué se incuba a 37c la mayoría de los cultivos?
Porque es la temperatura más propicia para que las bacterias crezcan y se dividan más rápido y
así formar colonias en un tiempo máximo de 24 horas, por ese se les pone fuente nutritiva a
partir del agar, y así poder trabajar con ellas.

5) ¿En la figura siguiente describa los
pasos

de

la

técnica

aséptica

o

transferencia aséptica?

Técnica aséptica: técnica
Técnica aséptica: técnica
usada
usada para
para evitar
evitar la
la
Contaminación durante la
Contaminación durante la
manipulación de cultivos yy
manipulación de cultivos
de medios de cultivos
de medios de cultivos
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TRANSFERENCIA ASEPTICA
a) El asa de siembra se calienta hasta la incandescencia y se enfría brevemente al aire.
b) El tubo se destapa
c) Se pasa el extremo del tubo por la llama
d) Se extrae la muestra con el asa esterilizada
e) Tras tomar la muestra con el asa, se vuelve a flamear el extremo del tubo y la muestra se
deposita en un medio estéril
f) Se vuelve a tapar el tubo. El asa se recalienta de nuevo antes de finalizar su utilización.
X.

BIBLIOGRAFÍA

•

http://es.scribd.com/doc/14173131/5-Tecnicas-Basicas-Para-El-Cultivo-deMicroorganismos

•

BROCK –Biología de los microorganismos

•

http://html.rincondelvago.com/agar-agar.html

•

http://claudiazambrano.wordpress.com/category/bacterias/

•

Pelczar, reid y chan (1995)

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