El documento describe un método para aislar bacterias mediante la técnica de siembra por agotamiento en cajas de Petri. Se tomó una muestra de aire y se cultivó en agar nutritivo y McConkey para identificar si contenía bacterias Gram positivas o Gram negativas. Solo hubo crecimiento en el agar nutritivo, indicando la presencia de bacterias Gram positivas o Gram negativas en la muestra de aire. La técnica permitió aislar algunas colonias para su posterior estudio y caracterización.

1. PRACTICA N°2
MÉTODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO
Andrés Felipe González De Vivero1
1. Estudiante de medicina de cuarto semestre de la universidad de Sucre.
RESUMEN
Para efectuar el estudio de microorganismos, se han diseñado diversos
métodos que permiten cultivar bajo condiciones artificiales, en los que es
posible cultivar bajo condiciones experimentales y manejar uno o varios tipos
de microorganismos. En el siguiente informe se presenta la realización de un
cultivo bacteriano, en el que se transfirió una muestra microbiológica de un
ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que permitió obtener cultivos
microbianos aislados. La aplicación de estos procedimientos hizo posible aislar
bacterias y de esta manera obtener cultivos puros, facilitando de este modo, el
estudio, caracterización, aplicación y control de los mismos.
PALABRAS CLAVE: Cajas de Petri, bacterias, aislamiento, agar.

2. OBJETIVOS
-Lograr reconocer algunos de los
medios de cultivo empleados en el
aislamiento e identificación
bacteriana.
-Familiarizarse con el manejo de
microorganismos y con las técnicas
de aislamiento en placa de Petri.
-Adquirir practica al momento de
realizar una siembra bacteriana
mediante la técnica de agotamiento
que se utiliza para obtener colonias
aisladas, que permiten determinar
sus características como tamaño,
forma y color.
-Observar algunas de las
reacciones que producen los
microorganismos cuando se
cultivan.
MARCO TEORICO
Un medio de cultivo es el material
alimenticio en que crecen los
microorganismos y el crecimiento de
los mismos constituye el cultivo. 1
El medio de cultivo debe reunir una
serie de condiciones: temperatura
adecuada, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuado, así
como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Un medio de cultivo
debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y
debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.1
Los medios de cultivo se clasifican
según diferentes criterios, los más
importantes son:
1. Según su estado físico:
a. Medios líquidos: se
presentan en este estado,
se denominan caldos.
b. Medios solidos: se
preparan a partir de
medios líquidos,
agregándoles un agente
geltrificante, el más usado
es el agar.
2. Según su utilización:
a. Medios básicos: son
aquellos que poseen los
componentes mínimos
para que pueda
producirse el crecimiento
de bacterias que no
necesiten requerimientos
especiales.
b. Medios enriquecidos: son
aquellos que además de
las sustancias nutritivas
normales, incorporan una
serie de factores
indispensables para el
crecimiento de
microorganismos
exigentes.
c. Medios selectivos: son
utilizados para favorecer
el crecimiento de una
población microbiana
específica contenida en
una población
polimicrobiana.
d. Medios diferenciales: se
utilizan para poner en
evidencia características
bioquímicas que ayuden a
diferenciar géneros o
especies.2
Para el estudio de los
microorganismos es necesario
tenerlos como cultivos puros (aquel

3. que contiene un solo tipo de
microorganismo y que procede
generalmente de una sola bacteria),
para la obtención de estos es
necesario la realización de diversas
técnicas de aislamiento, como la
técnica de siembra por agotamiento,
con el cual se consigue una buena
extensión de la muestra,
permitiendo el aislamiento de las
colonias y su aislamiento. 1
MATERIALES
 Cultivos puros de
microorganismos y cultivos
desconocidos.
 Cultivo de muestra de aire.
 Cultivo de muestra de agua
 Cultivo de muestra de suelo
 S. aureus
 E.choli
 Cajas de Petri con medios de
cultivo sólidos
 agar nutritivo
 McConkey
 Mecheros de gas.
 Asas
 redondas
 rectas.
PROCEDIMIENTO
La técnica empleada para realizar la
siembra bacteriana a partir de
diferentes cultivos que se
encontraban previamente en el
laboratorio, fue el método de
siembra por agotamiento. Para su
realización se llevaron a cabo los
siguientes pasos:
1. El asa se esterilizo en el
mechero hasta estar al rojo
vivo.
2. Se tomó una muestra del
cultivo de microorganismos
(desconocidos) y se depositó
sobre el agar donde se
realizar la siembra.
3. El asa se esterilizó
nuevamente y con esta se
extendió la muestra sobre un
área del agar formando
estrías juntas.
4. El asa se esterilizó por
tercera vez, y de las estrías
previamente realizadas se
tomó una muestra del cultivo
y se realizaron nuevas
estrías a un lado de las
primeras.
5. El paso 4 se realizó 2 veces
más, manteniendo un orden
de mayor a menor
concentración de muestra,
por último se realizó una
estría en el centro del agar.
6. Las cajas fueron incubadas a
37º por 24 horas.
7. Finalizada la incubación se
procedió a observar y evaluar
las colonias presentes en el
cultivo.
El procedimiento anteriormente
descrito se realizó de igual
manera en 2 tipos de agar, el
agar nutritivo y el McConkey
*Luego de esterilizar el asa, esta se enfriaba colocándolo sobre
el agar que no contenía microorganismos.

4. RESULTADOS
Figura 1. Se puede apreciar el cultivo de una
muestra desconocida tomada del aire y el
crecimiento realizado por esta.
Figura 2. Se puede apreciar la forma y las
características físicas de la colonia a simple vista.
Figura 3. Según el aspecto de las colonias se
encontraron similitudes con las características
señaladas en la tabla.
ANÁLISIS DE RESULTADOS
En la muestra del aire, no se sabía
de qué tipo de bacterias se
encontraban en la muestra, por lo
tanto se decidió realizar el cultivo en
ambos tipos de agar para lograr
identificar si eran de tipo Gram
positivo o Gram negativo. Entonces
se realizó el cultivo en agar
McConkey que está indicado para
bacterias Gram negativas y no se
evidencio un crecimiento de ningún
tipo en la caja de Petri, por lo tanto
descartamos la presencia de
bacterias Gram negativas en la
muestra.
Por otro lado en el medio de cultivo
nutritivo que es indicado Para
crecimiento de bacterias Gram
positivas, Gram negativas y
Mantenimiento de cepas, se pudo
evidenciar un crecimiento muy
marcado de las colonias de
bacterias, aunque esto haya sido
así no se puede identificar
específicamente la identidad del
microorganismo.
Para el estudio, caracterización e
identificación de los distintos
microorganismos necesitamos
tenerlos como cultivos puros y
debido a que en la naturaleza los
encontramos como poblaciones
mixtas es necesario utilizar métodos
como el de siembra por
agotamiento, que permite una
buena separación de las colonias y
aislarlas fácilmente, para su
realización es fundamental el uso de
una buena técnica, la muestra debe
diseminarse de manera tal que los
diferentes microorganismos queden

5. lo suficientemente separados sobre
la superficie del medio de cultivo, de
manera que luego de la incubación
ellos formen colonias visibles
aisladas.2,3
En los cultivos realizados en la
práctica se obtuvieron resultados
regulares, no hubo contaminación
del cultivo y aunque se lograron
aislar algunas colonias, el extendido
de la muestra no fue del todo bueno
y puede mejorar. Estos resultados
se explican debido a los errores en
el procedimiento, que tienen su
fundamento en la inexperiencia al
realizar estos procedimientos.
CAUSAS DE ERROR
La contaminación del cultivo puede
deberse a la exposición de la
superficie del medio de crecimiento
al aire, que representa un riesgo de
contaminación por microorganismos
transportados por el mismo, también
puede deberse a una esterilización
deficiente del asa, así como a una
contaminación por hablar cerca del
medio de cultivo y/o utilizar guantes
sucios.
CONCLUSIONES
 Es necesario recurrir a
medios de cultivo para
estudiar en profundidad las
características bacterianas.
 La técnica del agotamiento
es la ideal si se quiere
obtener colonias aisladas que
permitan el estudio de las
mismas
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1http://www.microinmuno.qb.fcen.ub
a.ar/SeminarioMedios.htm
2PEDRIQUE, Magaly. Obtención de
cultivos puros. [en línea].Disponible
en:
<http://www.ucv.ve/fileadmin/user_u
pload/facultad_farmacia/catedraMicr
o/10_Obtenci%C3%B3n_de_cultivo
s_puros.pdf>
3DOWNS, Canaan. Posibles
fuentes de contaminación en
preparaciones de agar y caldo
nutritivo. [en línea].Disponible en:
<http://www.ehowenespanol.com/po
sibles-fuentes-contaminacion-
preparaciones-agar-caldo-nutritivo-
info_184956/>