El documento describe los pasos para preparar medios de cultivo y realizar la siembra y aislamiento de bacterias de manera aséptica. Explica que los medios de cultivo deben contener nutrientes apropiados para el crecimiento microbiano y que existen diferentes técnicas de siembra como la estría múltiple y los cuatro cuadrantes. El objetivo es obtener colonias puras de bacterias y aplicar técnicas asépticas para evitar contaminaciones. Se detallan los materiales, métodos y resultados de siembras realizadas con

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERÍA
E.A.P. INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
Medios de Cultivo, Siembra y Aislamiento,
Técnica Aséptica
CURSO:
Laboratorio deMicrobiología.
DOCENTE:
Blgo. Mblgo. Carlos Azañero Díaz
GRUPO:
“C”
ALUMNA:
Aburto Rodríguez Ruddy
2012

2. Medios de Cultivo, Siembra y Aislamiento, Técnica Aséptica 2
I.
INTRODUCCIÓN:
En la naturaleza, los microorganismos viven casi siempre en mezclas. No
obstante antes de poder determinar la mayor parte de las características
de un microorganismo en particular, este debe ser aislado en un cultivo
puro (cultivo de un solo tipo de microorganismo).el procedimiento
general consiste en usar un medio de cultivo (nutrientes apropiados) y
condiciones de incubación (ambientales) que estimulen el crecimiento del
organismo que se desea y que reduzca o afecten el crecimiento de otros
organismos. Una vez que el organismo deseado ha aumentado en
cantidad con respecto a otros, se purifica de modo que el cultivo
contenga organismos del tipo deseado.
Los microorganismos se cultivan en agua, a la que se han añadido los
nutrientes apropiados, dando una solución acuosa que se denomina
medio de cultivo.Los nutrientes existentes en el medio de cultivo dan a la
célula microbiana todos los ingredientes requeridos para que se
produzca más células semejantes a ella misma. Además de las fuentes de
energía, que pueden ser sustancias orgánicas e inorgánicas, o luz, el
medio de cultivo debe tener fuentes de carbono, nitrógeno y otros macro
y micronutrientes importantes para el desarrollo de los
microorganismos.
Para el cultivo, aislamiento e identificación de un microorganismo en el
laboratorio, es necesario realizar técnicas de siembra de la muestra en
respectivo medio de cultivo. Estas técnicas varían según el estado físico
del medio o las necesidades gaseosas de los microorganismos (aerobios,
anaerobios, etc.). Una condición básica de la siembra es que debe
realizarse bajo rigurosas reglas de asepsia, evitando el crecimiento de
contaminantes.
II.
OBJETIVO:
Describir los pasos en la preparación de medios de cultivo, indicando
los componentes básicos necesarios en su formulación.
Obtener colonias de bacterias en cultivo puro mediante la
inoculación (siembra por estría en superficie).
Aplicar las técnicas de trabajo aséptico y de manipulación de
microorganismos.

3. Medios de Cultivo, Siembra y Aislamiento, Técnica Aséptica 3
III.
FUNDAMENTO TEÓRICO:
MEDIO DE CULTIVO
Conjunto de sustancias esenciales para el crecimiento y desarrollo
microbiano.
Un medio de cultivo se refiere a aquel lugar en el espacio en el que se
reúnen las características necesarias para el crecimiento y desarrollo, en
este caso microbiano. Las sustancias necesarias para el crecimiento de los
microorganismos pueden ser proporcionadas por un sistema vivo (in
vitro).
Los medios de cultivo se pueden clasificar de la siguiente forma:
De acuerdo a su estado físico
Solido
Líquido
Semisólidos
De acuerdo a sus propiedades sobre el
crecimiento y desarrollo microbiano
para el crecimiento
enriquecidos
selectivos, indicadores o diferenciales
Medios Solidos: contienen aproximadamente 1.5% o más de agar (el
cual les confiere la característica de sólidos) se utilizan principalmente
para el crecimiento y aislamiento de bacterias.
Medios Líquidos:no contienen Agar, se conocen también como caldos,
se utilizan para el crecimiento de inóculos puros.
Medios Semisólidos:aunque en la naturaleza no existe el estado físico
de semisólido, en bacteriología se usa para definir a aquellos medios
que contiene agar pero en proporción menos de 1.5% principalmente
para estudios de movilidad.
Medios para Crecimiento: son los que contienen nutrientes que
permiten el desarrollo de la mayoría de los microorganismos no
exigentes, con su velocidad de crecimiento normal, y sin ofrecer a
ninguna ventaja especial. Eje. Agar nutritivo.
Medios Enriquecidos: son los medios a los que se adiciona algunos
componentes especiales con lo cual se busca solo el desarrollo de
microorganismos exigentes.
Medios Selectivos:Son aquellos a los que se les incorpora un inhibidor
del desarrollo bacteriano con lo cual busca solo el desarrollo de un tipo
especial de bacterias.

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Medios Indicadores:Son todos aquellos en las cuales se busca valorar
características metabólicas especiales de cada especie de bacteria.
MÉTODO DE INOCULACIÓN O DE SIEMBRA
Inoculo:
Carga de microorganismos presentes un sitio y momento determinado.
Una vez conociendo los medios de cultivo, hay que conocer los
métodos de inoculación o de siembra, los cuales estarán ligados al
objeto de la inoculación.
1. Método por estriación o siembra por estría en superficie.
Toma de muestras:
2. Técnica de siembra para aislamiento:
Estría múltiple:
Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una muestra
del cultivo de microorganismos y se extiende sobre un área pequeña de
la superficie de la placa con agar nutritivo, en forma de estrías muy
juntas, pero sin hacer presión para no dañar el agar.
Se flamea el asa, se enfría y después de rozar la siembra realizada
previamente, se extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo
nuevas estrías. Este proceso se repite sucesivamente, flameandoy
enfriando el asa al comienzo de las sucesivas siembras en estría. Se lleva
la placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre enposición
invertida.

5. Medios de Cultivo, Siembra y Aislamiento, Técnica Aséptica 5
Mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una
muestra que contenga un elevado número de gérmenes.
Ejemplo de estría múltiple crecida
3.
Técnica de los cuatro cuadrantes:
Se divide la placa en cuatro cuadrantes.Se toma el inoculo y se siembra
consecutivamente en 1-2-3-4.Incubar.En el cuarto cuadrante, al menos,
obtendríamos colonias aisladas.
4.
Siembra por agotamiento (o en superficie):
Se realiza una descarga y se realiza estría por toda la placa.

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IV.
MATERIALES:
Para la práctica de laboratorio con respecto a los medios de cultivo
utilizamos los siguientes materiales:
Material biológico:
Cultivo puro E. coli(A)
Cultivo puro de Bacillus subtilis(B)
Suspensión bacteriana mixta(A+B)
Material del laboratorio:
Frascos de agar, extracto de carne, peptona, NaCl, y agar
MacConkey.
Placas Petri con agar nutritivo
Placas con agar OGY
Matraz Erlenmeyer con 20 ml de SSF estéril
Estufa o incubadora
Asa bacteriológica calibrada y en codo
V.
METODOLOGÍA:
TECNICA DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO
5.1 Siembra por estría en superficie en agar nutritivo:

7. Medios de Cultivo, Siembra y Aislamiento, Técnica Aséptica 7
5.2Siembra por suspensión:
VI.
RESULTADOS:
6.Siembra por estría en superficie y suspensión en agar nutritivo:
A
B

8. Medios de Cultivo, Siembra y Aislamiento, Técnica Aséptica 8
VII.
DISCUSIÓN:
Según Brook–Biología de los Microorganismos:
Pág.: 162
Crecimiento de aerobios, anaerobios, facultativos, microaerófilos y
anaerobios aerotolerantes, puesto de manifiesto por la posición de
microcolonias (representada como puntos negros) en tubos con medio
de cultivos semisólido con tioglicolato. Se añade a los cultivos una
pequeña cantidad de agar para evitar perturbaciones en el medio
líquido y como indicador un colorante redox, resazurina, que es rosa
cuando se oxida e incoloro cuando se reduce. (a) El oxígeno penetra
sólo una corta distancia en el tubo, de modo que los aerobios estrictos
solocrecen en la superficie. (b) Los aerobios, como son sensibles al
oxígeno, solo crecen lejos de la superficie. (c) Los aerobios facultativos
son capaces de crecer tanto en presencia como en ausencia de oxígeno
y crecen por todo el tubo. (d) Los microaerófilos crecen apartándose
de la son más óxica. (e) Los anaerobios aerotolerantes crecen por todo
el tubo. No obstante, el crecimiento no es mejor cerca de la superficie
porque estos organismos solo son fermentadores. Por lo tanto se pudo
identificar que en la técnica por suspensión para el tubo A (cultivo
puro de Bacillus subtilis), tiene el tipo de crecimiento en el cual el
oxígeno penetra sólo una corta distancia en el tubo; sin embargo en el
tubo B(cultivo puro de Escherichia coli), se observó que esta bacteria es
anaerobia aerotolerante puesto que crece por todo el tubo.
a
b
c
d
e
Según Brook–Biología de los Microorganismos:
Pág.: 107-110
Los centenares de compuestos químicos presentes en una célula viva
se forman a partir de precursores llamados nutrientes. Los elementos
que se necesitan en grandes cantidades se denominan
macronutrientes, mientras que los metales y los compuestos orgánicos

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que se requieren en pequeñas cantidades se denominan
macronutrientes y factores de crecimiento, respectivamente.
Los medios de cultivo satisfacen las necesidades nutritivas de los
microorganismosy pueden ser químicamente definidos o complejos
(no definidos).
En el laboratorio, los microorganismos se pueden cultivar en medios de
cultivo que contienen los nutrientes necesarios. La obtención de
cultivos axénicos o puros requieren la puesta en práctica de técnicas
asépticas.
Según Encarta 2009:
Los métodos utilizados como es el caso de la técnica de siembra por
estría en superficie y la siembra por suspensión son muy estudiados no
solo en el laboratorio sino también por científicos y médicos que
llevan a cabo cultivos bacterianos y estudian sus características con el
fin de adquirir conocimientos respecto a las enfermedades bacterianas
y su prevención. La bacteria Escherichia coli en circunstancias normales
es inofensiva y habita en el intestino humano favoreciendo la
digestión, si bien pueden convertirse en patógenas y producir
infecciones del tracto urinario.
Según Brook–Biología de los Microorganismos:
Pág.: 109
Las técnicas de trabajo aséptico en el laboratorio, es necesaria para evitar
la contaminación durante la manipulación de los microorganismos y
de los medios de cultivos estériles. Su aprendizaje es esencial para
tener éxito en el laboratorio de microbiología y presenta uno de los
primeros métodos que tiene que dominar el microbiólogo. El
problema más común es la contaminación ambiental a través del aire,
ya que este siempre contiene polvo en suspensión que generalmente
lleva una comunidad de microorganismos. Cuando las placas o tubos
se abren deben manejarse de tal modo que los contaminantes del aire
no penetren.
1
2

10. Medios de Cultivo, Siembra y Aislamiento, Técnica Aséptica 10
VIII. CONCLUSIÓN:
La morfología de una colonia de bacterias en crecimiento en un
medio nutritivo determinado es importante para determinar de qué
tipo de bacteria se trata, pero no es infalible y se deben hacer otras
pruebas bioquímicas.
Mediante la técnica de siembra por estría en superficie, se obtienen
colonias aisladas.
En la técnica por suspensiónel cual se realizó en dos tubos de ensayo;
observamos que después de 10 horas de la siembra indica que síse
obtuvo crecimiento microbiano. Una de las cuales fue aerobia(A) y
otra aerotolerante (B).
Las técnicas de trabajo aséptico en el laboratorio, es necesaria para
evitar la contaminación durante la manipulación de los
microorganismos y de los medios de cultivos estériles. Si se practica
correctamente las técnicas de trabajo aséptico evitaremos que se
produzca algún accidente en el cual nuestro organismo podría
resultar seriamente afectado (con presencia de microbios).
IX.
CUESTIONARIO:
1. ¿Qué es un medio de cultivo?
Satisfacen las necesidades nutritivas de los microorganismos y
pueden ser químicamente definidos o complejos.
Para el cultivo correcto de una bacteria es necesario conocer sus
exigencias nutritivas.
Medio sintético o definido
Son medios en que se conocen todos los componentes.
Los medios definidos se emplean ampliamente en investigación
dado que con frecuencia se requiere conocer qué está
metabolizando el microorganismo.
Medios complejos
Son medios suficientemente ricos para satisfacer las necesidades
nutricionales de diversos microorganismos.
De gran utilidad cuando se desconoce los requerimientos
nutricionales de un microorganismo en particular.

11. Medios de Cultivo, Siembra y Aislamiento, Técnica Aséptica 11
2. ¿Con que fin se realiza la siembra de estriación?
Para observar el crecimiento de las bacterias a través de colonias.
3. ¿Qué se entiende por cultivo puro y cultivo mixto?
Cultivo puro: representa las condiciones artificiales para el
desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las
condiciones impuestas a los microorganismos mediante el manejo
del laboratorio.
Para determinar las características de especies concretas de
microorganismos.
El cultivo mixto de laboratorio es aquél en el que se contienen dos o
más cepas de organismos.
4. ¿Por qué se incuba a 37° la mayoría de cultivos?
Porque es la temperatura más propicia para que las bacterias
crezcan y se dividan más rápido y así formar colonias en un tiempo
máximo de 24 horas, por ese se les pone fuente nutritiva a partir del
agar, y así poder trabajar con ellas.
5. En la figura siguiente describa los pasos de la técnica aséptica o
transferencia aséptica:

12. Medios de Cultivo, Siembra y Aislamiento, Técnica Aséptica 12
a) Se calienta el asa de siembra hasta incandescencia y se
deja enfriar
b) El tubo se destapa
c) Se pasa el extremo del tubo por la llama
d) Se extrae la muestra con el asa esterilizada
e) Se vuelve a flamear la boca del tubo y la muestra se
deposita en un medio estéril
f) Se vuelve a tapar el tubo y se calienta el asa al final.
X.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
Broock–Biología de los Microorganismos, 10 décima edición, página
162, capitulo 6 -Crecimiento Microbiano.
"Escherichia coli." Microsoft® Student 2009 [DVD]. Microsoft
Corporation, 2008.
Wolin, m. tratado de microbiología, 20ed, editorial interamericana,
México (1973) p.p. 901
http://www.doschivos.com/display.asp?id=45&f=13547
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/morfologiayestructurabact
eriana.pdf
http://imb.usal.es/practicas2/p2/practicas2.pdf