Este informe describe un experimento que demuestra la naturaleza proteica de las enzimas. Se utilizó la enzima amilasa y varios agentes como sales, ácidos, bases y temperatura para tratar de desnaturalizar la enzima. Los resultados mostraron que la amilasa solo se desnaturalizó en presencia de sales pesadas, ácidos y bases fuertes, o altas temperaturas, lo que lleva a la conclusión de que las enzimas son proteínas sensibles a factores ambientales.

1. INFORME N° 01
DEMOSTRACION DE LA NATURALEZA PROTEICA DE LAS ENZIMAS
I.-Resultados e interpretación:
Se armo el siguiente sistema:
TUBOS
COMPONENTES (en ml) I II III IV V VI
Amilasa al 1% 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
NaOH 1N - 2.4 - - - -
HCl 3N - - 2.4 - - -
Ácido Tricloro acético 20% - - - 2.4 - -
Sulfato de Cobre al 20% - - - - 2.4 -
Buffer fosfato 0.1M / pH 6.6 2.4 - - - - 2.4
Se observó todos los cambios producidos, los cuales indicamos a continuación:
Tubo I:
Luego de verter 1 ml de amilasa al 1% al tubo (con ayuda de la pipeta) se agregó Buffer fosfato 0.1M /
pH 6.6, puesto que cada enzima actúa a un PH determinado ( normalmente entre 6-8, superado este
intervalo tiende a desnaturalizarse e inactivarse). Al utilizar esta sustancia amortiguadora (buffer
fosfato) nos permitirá, que la enzima no se desnaturaliza.
Tubo II:
Una vez vertida la amilasa al 1% , posteriormente se agregó NaOH 1N (con ayuda de la pipeta), este por
ser una base fuerte tenderá a producir la desnaturalización de la enzima (amilasa) por lo cual no
actuará. No se observa cambio de color de la solución.
Tubo III:
Luego de verter amilasa, pasamos a agregar HCl 3N ( con ayuda de la pipeta), al ser este un ácido fuerte
va a alterar la conformación de la amilasa y esta tenderá a desnaturalizarse; sin embargo no
presenciamos cambio de color de la solución.
Tubo IV:
Al haber ya agregado amilasa, procedimos a verter 2.4 ml de Ac. Tricloro acético 20 % (con la pipeta), el
cual siendo un ácido débil, procederá a desnaturalizar a la enzima (amilasa).

2. Tubo V:
A este tubo con amilasa se le agrega sulfato de cobre al 20%( utilizando la pipeta), el cual por ser una sal
pesada generará un cambio en la enzima. Se observó que este tubo si cambio de color, y se tornó un
color celeste debido a la presencia del cobre.
Tubo VI:
Luego de agregar la amilasa al 1% al tubo (con la pipeta) se agregó Buffer fosfato 0.1M / pH 6.6, siendo
esta una sustancia amortiguadora no permite la desnaturalización de la enzima. Presenta las mismas
características del tubo 1 debido que se utilizaron los mismos reactivos. No presentó cambio de color.
Al finalizar todo el sistema A, se dejó los 5 primeros tubos del sistema en reposo por 10 minutos a la
temperatura ambiente. El tubo restante (tubo VI) se colocó en un baño de agua hirviendo también por
10 minutos.
Durante este lapso se construyó el sistema B:
Uso del sustrato almidón, este es un homopolímero de la glucosa:
TUBOS
COMPONENTES (en ml) I II III IV V VI
Almidón al 1.0% en solución 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
acuosa
Buffer fosfato 0.1 M / pH 6.6 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
NaCl 0.15 M 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4
Agua Destilada 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
En este sistema se utilizaron 6 tubos más, a los cuales se les agregó los reactivos indicados en el
recuadro del sistema correspondiente: Almidón al 1.0% en solución acuosa, Buffer fosfato 0.1 M / pH
6.6 (daráel ambiente adecuado para que actúe la enzima), NaCl 0.15 M (el cloro (cofactor) será quien
active la enzima), Agua Destilada, a todos los tubos se le agregó el mismo volumen de cada reactivo.
Luego se pre incubó los tubos a una temperatura de 37 °C, favoreciendo que el sustrato tenga una
actividad normal ya que la temperatura es la misma que la temperatura corporal. Esto se realizo por un
lapso de dos minutos.
Posteriormente se agregó 0.6 ml. de la enzima tratada, de cada uno de los tubos del primer sistema A a
su correspondiente tubo del último sistema B .Una vez realizado esto, se dejó incubar nuevamente a 37
°C por un transcurrir de 20 minutos.
Se observó que todos los tubos se tornaron de un color transparente a excepción del tubo V, el cual
presentó un precipitado y un sobrenadante de color celeste.

3. A continuación se armó el sistema C:
TUBOS
COMPONENTES (en ml) I II III IV V VI
HCl 0.05N 5 5 5 5 5 5
De los tubos de reacción del 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
sistema B, agregar:
Solución yodada 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Al ya tener los tubos en donde están actuando la enzima (amilasa) del sistema A con el sustrato
(almidón) del sistema B, se procede a verter el volumen de cada reactivo indicados en el recuadro del
sistema C según corresponda al número de tubo. Se observó diferencias en la actividad de la enzima,
debido a la cantidad de sustrato residual formado; la cual se reconoció por ayuda de la solución yodada.
Como resultado se observó que el primer tubo nos mostró un color amarillento, lo cual es signo que la
enzima no ha sufrido ningún tipo de cambio (desnaturalización) y la gran parte del sustrato se ah
convertido en producto.
En cambio los tubos restantes (II-VI) presentaron un color azul marino oscuro, lo cual nos indica que
gran cantidad de sustrato no se ah activado con la enzima (no hubo reacción).
II.- Conclusión:
Con esta práctica se a demostrado como es que la enzima (en este caso amilasa) tiene que estar en un
medio adecuado para poder actuar, y por el mismo hecho de ser esta una proteína tiende a
desnaturalizarse fácilmente si son expuestos a factores como : PH fuera del rango 6-8, temperatura,
ácidos y bases tanto débiles como fuerte.
CUESTIONARIO
1.-¿Cuál es el mecanismo de acción de las sales pesadas sobre la proteína (enzima)?
Las sales pesadas actúan sobre las enzimas desnaturalizándolas. En el caso de la práctica la sal pesada
que se utilizó fue el So4Cu y la enzima fue la amilasa, al reaccionar origina que de la sal se desprenda un
ion cúprico el cual une el coo- de la enzima a los grupos de las cadenas laterales originando la ruptura de
los puentes salinos.
2.-¿Cómo actúan los ácidos y bases fuertes sobre la proteína (enzima)? Ejemplos
La exposición de los ácidos y bases fuertes a la enzima tienden a desnaturalizar a la proteína. Estas
tienden a precipitarse de la solución acuosa por la adición de ciertos ácidos y bases.

4. Ejemplo:
Ácidos fuertes: disminuyen el PH: HCl, ATCA
Bases fuertes: aumentan el PH: NaOH
3.-¿Cómo actúa la temperatura sobre la estructura proteica de la enzima?
Con la acción de la temperatura elevada, también aumenta la energía cinética de las moléculas que
conforman la enzima, desorganizando la envoltura acuosa de la enzima y desnaturalizándola.
El aumento de temperatura también destruye las interacciones débiles y desorganiza la estructura de la
proteína, de tal forma que el interior hidrófobo interacciona con un medio acuoso y se produce la
precipitación de la enzima desnaturalizada.
4.-¿Cómo repercute la modificación de la estructura proteica, producida por agentes físicos y
químicos, sobre la actividad enzimática?
La modificación de la estructura de las proteínas (desnaturalización), ocasiona que esta enzima se
inactive y no tenga una actividad enzimática normal.
Algunos agentes son mas desnaturalizantes que otros, por ende la actividad de la enzima depende del
agente que la desnaturalice. Por ejemplo la enzima estará mas inactivada si es sometido a altas
temperaturas.