El documento describe varios métodos para medir el crecimiento bacteriano, incluyendo recuentos de células viables y determinación de masa celular. Explica cómo realizar recuentos de colonias en placas mediante siembra en placa o vaciado en placa, usando diluciones seriadas para asegurar colonias separadas. También describe la preparación y uso de medios de cultivo, incluyendo elección de ingredientes, ajuste de pH, esterilización y técnicas de siembra para cultivo puro e aislamiento de bacterias.

1. Medida del crecimiento bacteriano Métodos: Recuento total de células. Recuento de células viables. Determinación de Masa celular. Medida de la Turbidez.

2. b) Recuento de células viables. Célula viable: “ A quella capaz de dividirse y formar una progenie ” La viabilidad se determina por el nª de células capaces de formar colonias, el recuento se denomina “ recuento en placa o de colonias ”. 2 métodos: Método de siembra en placa por extensión Método de vaciado en placa (la bacteria debe soportar los 45ºC del agar) 1 célula 1 colonia

3. En ambos métodos necesitamos “Diluciones Seriadas” para Asegurarnos de obtener placas donde el recuento sea posible: El resultado se expresa como número de UFC (Unidades Formadoras de Colonias), cada colonia puede proceder de 1 o + células. Método muy usado en microbiología de alimentos, aguas,lácteos, médica.....

4. MEDIOS DE CULTIVO Imprescindibles para el estudio de microorganismos en laboratorio. Muchos tipos según su composición en nutrientes, condiciones ambientales....etc. Se necesitan para: Separar y aislar distintas especies. Como paso previo a la identificación de 1 especie. Conocer el metabolismo bacteriano. Estudios macroscópicos (morfología). Realización de antibiogramas. Conservación de especies Las bacterias tienen ciertos requerimientos ENERGÉTICOS y NO-ENERGÉTICOS para su crecimiento, que deberán ser aportadas por los medios de cultivo: Energéticos: Fuente de C y N. No-Energéticos: Iones, factores de crecimiento, inhibidores.........

5. PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO Elección de ingredientes Pesada Hidratación : en agua destilada o desionizada (milliQ) calentada a 50-60ºC Ajuste de pH : Con papel indicador o pHímetro, se ajusta con tampones de HCl o NaOH (1% o >). Adición de agar Distribución : en recipientes, a ser posible, definitivos: - Tubos (tapados con algodón graso o tapón de rosca) - Matraces Erlenmeyer, Botellas de pyrex....etc (para Placas Petri) Esterilización : generalmente en AUTOCLAVE (121ºC, 1.2 atm presión y 15-20 min) Vertido en placas : Con el medio atemperado (45-50ºC) y en condiciones estériles. Enfriamiento : - Medios líquidos: tal y como sale del autoclave. - Medios sólidos: * Tubos: A Tª ambiente en horizontal (para picadura) o inclinados (en superficie, slant) * Placas: en superficie horizontal (mejor en campana flujo)

6. TÉCNICAS DE SIEMBRA: INOCULACIÓN Y AISLAMIENTO TÉCNICAS DEL CULTIVO PURO: Para estudiar los microorganismo debemos de cultivarlos en el laboratorio y aislados de otras especies. Los recipientes y medios de cultivo han de ser estériles La principal fuente de contaminación: la atmósfera Cultivo puro Aislamiento de una especie a partir de una población mixta, Mantenimiento de la especie aislada en ambiente de lab.

7. INOCULACIÓN Inóculo : material microbiano que se utilizará para sembrar o inocular el recipiente de cultivo . Métodos de Inoculación: En medio líquido : con asa o pipeta, directamente al medio En medio sólido : 1. En PLACA : - Inoculación PREVIA al vertido del medio - Inoculación SOBRE medio sólido 2. En TUBO : - Estría en superficie inclinada - Picadura

8. AISLAMIENTO Se hace en PLACA y su objetivo es obtener CEPAS (Cultivos) PURAS 1) Por DILUCIÓN: 2) Por AGOTAMIENTO : a) SIEMBRA EN ESTRÍA O ZIG-ZAG b) SIEMBRA EN ESTRÍA MÚLTIPLE c)TÉCNICA DE LOS 4 CUADRANTES d)TÉCNICA DE LOS 3 GIROS

9. El MICROSCOPIO: Fundamento y manejo Partes de un microscopio óptico

10. Sistema óptico OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Sistema mecánico SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, .... REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos . Permite, al girar, cambiar los objetivos. TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micromético, que consigue el enfoque correcto.