Virologia en ets

Biol. Carlos Béjar Lozano
Patólogo Clínico
Jefe del Depto de Inmunología
Servi-Med
Laboratorios Clínicos

 VIH
 VPH
 Herpes
 Hepatitis
Servi-Med

• No son exclusivos de transmisión Sexual
• Parenteral: transfusiones de sangre y sus derivados
• Picaduras con material contaminado como agujas hipodérmicas
(drogas endovenosas), material quirúrgico, tatuajes, acupuntura.
• Vertical: perinatal, infección intrauterina.
• Exposición cutánea de secreciones contaminadas
OTRAS VIAS DE TRANSMISIÓN DE LOS
VIRUSVIRUS DE TRANSMISION SEXUAL
Servi-Med

• Sexual
* Exposición percutánea
y de mucosas a fluidos
corporales infectados.
Servi-Med

Servi-Med

* Embarazo de madre infectada
* Lactancia de madre infectada
* Contacto sexual con personas
infectadas
Personal ocupacional
expuesto:
* Contacto con sangre
y fluidos contaminados
o sus derivados, aún
en piel íntegra.
Servi-Med

Usuarios de drogas
endovenosas
Grupos de riesgo 2
“alto reciclaje” viral
Promiscuidad
Prostitución
Servi-Med

Otros datos clínicos que nos
permiten conocer su evolución,
son la presencia de infecciones
oportunistas y el tipo de gérmenes
que se presenten.
Existen dos parámetros que involucran
el manejo de pacientes infectados:
 Carga Viral del VIH:
 Subpoblaciones de Linfocitos

La estructura del VIH-1 y el VIH-2 es la misma, variando solo la
estructura molecular y antigénica de algunos de sus componentes.
Servi-Med

Cada partícula de color
verde corresponde a un
virus en proceso de
exocitosis.
Servi-Med

 Diagnóstico inicial por técnica deDiagnóstico inicial por técnica de ELISAELISA..
- Prueba- Prueba presuntivapresuntiva solamente.solamente.
-- RequiereRequiere ratificarseratificarse al menos con segunda muestra antes deal menos con segunda muestra antes de
confirmatoria, checando condiciones óptimas de muestra.confirmatoria, checando condiciones óptimas de muestra.
 Nunca definir al paciente comoNunca definir al paciente como VIH +,VIH +, pero considerarlopero considerarlo
como tal hasta demostrar lo contrario.como tal hasta demostrar lo contrario.
- Seleccionar técnica adecuada: sensibilidad y especificidad- Seleccionar técnica adecuada: sensibilidad y especificidad
de monoclonales, contra fracciones mas inmunogénicas, conde monoclonales, contra fracciones mas inmunogénicas, con
monoclonales de mayor avidez (coctel de monoclonales)monoclonales de mayor avidez (coctel de monoclonales)
 Confirmación por técnica de Western-Blot.Confirmación por técnica de Western-Blot.
- Identifica anticuerpos del paciente, contra diferentes- Identifica anticuerpos del paciente, contra diferentes
fracciones del VIH.fracciones del VIH.
- No discrimina cantidad de virus presente ni mutaciones- No discrimina cantidad de virus presente ni mutaciones
en el virus. Solo discrimina entre VIH-1 y VIH-2.en el virus. Solo discrimina entre VIH-1 y VIH-2.
Servi-Med

Técnicas de ELISA (Primeras Generaciones de Reactivos)Técnicas de ELISA (Primeras Generaciones de Reactivos)
Servi-Med

Diagnostico por
Inmunoelectrotransferencia
(western blot)
-Cada banda representa un Ac contra
una fracción viral
-Se contrasta contra un corrimiento de
antigenos/proteinas de peso molecular
conocido
Servi-Med

Interpretación
Para VIH-1
Interpretación
Para VIH-2

ESTUDIO DE
GENOTIPO DE VIH:
DETECCION DE MUTACIONES QUE
CONFIEREN RESISTENCIA A
ANTI-RETROVIRALES
NRTI´s = Nucleoside ReverseNRTI´s = Nucleoside Reverse
Transcriptase Inhibitor´sTranscriptase Inhibitor´s
NNRTI´s = Non Nucleoside ReverseNNRTI´s = Non Nucleoside Reverse
Transcriptase Inhibitor´sTranscriptase Inhibitor´s
PI´s = Protease Inhibitor´sPI´s = Protease Inhibitor´s
Servi-Med

 Los médicos necesitan los valores de Carga Viral y
Subpoblaciones de Linfocitos para evaluar a un paciente y su
estado en un momento dado.
 La CV evalúa la actividad viral, mientras que las células
CD4+ evalúan el estado inmune del paciente.
 Generalmente existe una correlación inversa: A mayor CV menor
cantidad de células CD4+
 El Genotipo del VIH evalúa resistencia a anti-retrovirales de la
cepa de VIH de un paciente en lo particular.
Servi-Med

Sc. Am. Vol 273
No 2 Agosto ´95Servi-Med

 Metodología para cuantificarMetodología para cuantificar
 Carga Viral:Carga Viral:
Reacción en Cadena de laReacción en Cadena de la
Polimerasa (rtPCR)Polimerasa (rtPCR)
 Metodología para el estudio de las
Subpoblaciones de Linfocitos:
Citometría de Flujo y anticuerpos
monoclonales
Servi-Med

Citómetro de flujo
Coulter EPICS XLmcl
Servi-Med

Interpretación de Resultados:
Relación CD3+CD4+ / CD3+CD4+ Normal
Servi-Med

Interpretación de Resultados:
Relación CD3+CD4+ / CD3+CD4+ Anormal
Servi-Med

CD4 < 350 cel/mm3
con Carga Viral (copias/ml):
% PROGRESION A SIDA
bDNA RT-PCR N 3 años 6 años 9 años
< 500 < 1,500 - - - -
500 – 3,000 1,500 – 7,000 30 0 18.8 30.6
3,000 – 10,000 7,000 – 20,000 51 8.0 42.2 65.6
10,000 – 30,000 20,000 – 55,000 73 40.1 72.9 86.2
> 30,000 > 55,000 174 72.9 92.7 95.6
CD4 351 - 500 cel/mm3
con Carga Viral (copias/ml):
% PROGRESION A SIDA
bDNA RT-PCR N 3 años 6 años 9 años
< 500 < 1,500 - - - -
500 – 3,000 1,500 – 7,000 47 4.4 22.1 46.9
3,000 – 10,000 7,000 – 20,000 105 5.9 39.8 60.7
10,000 – 30,000 20,000 – 55,000 121 15.1 57.2 78.6
> 30,000 > 55,000 121 47.9 77.7 94.4
http://www.hivatis.org/spanish/Sp_adult/text/tables.html

Al final del 2º ciclo
hay 4 copias de DNA
Servi-Med

Al final de 30 ciclos
se acumulan
536´850,912
copias de DNA

8´400,000 copias/ml
Cantidad NO
detectable
520 copias/ml
Servi-Med

La PCR cuantitativa (quantitative polymerase chain reaction; qPCR o Q-PCR)
o PCR en tiempo real (real time PCR; RT-qPCR) es una variante de la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizada para amplificar y
simultáneamente cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación
de ADN.
- Para ello emplea, del mismo modo que la PCR convencional, un molde de
ADN, al menos un par de cebadores específicos, dNTPs, un
tampón de reacción adecuado, y una ADN polimerasa termoestable.
- A dicha mezcla se le adiciona una sustancia marcada con un fluoróforo que,
en un termociclador que albergue sensores para medir fluorescencia tras
excitar el fluoróforo a la longitud de onda apropiada, permita medir la tasa de
generación de uno o más productos específicos.
rtPCR: Medición de la Carga ViralrtPCR: Medición de la Carga Viral
Servi-Med

La medición se realiza en cada ciclo de amplificación, por lo que
también se le denomina PCR en tiempo real (es decir, PCR inmediata,
simultánea).
rtPCR: Medición de la Carga ViralrtPCR: Medición de la Carga Viral
(de cualquier virus; VIH, VHB, VHC…)(de cualquier virus; VIH, VHB, VHC…)
Medición de amplificación de DNA
en un ciclo y discriminación de
dobletes de primers
Curvas de regresión lineal log para
el cálculo del número de copias de
DNA basado en múltiples ciclos.
Servi-Med

Virus del Papiloma Humano (VPH)
• Los VPH son virus de ADN
• Género: Papillomavirus
• Familia: Papovaviridae
• Tamaño: 50-55 nm
• Capside icosaédrica, (72 capsómeros)
Servi-Med
Laboratorios Clínicos Cortesía: Dra Sandra Guadalupe Sánchez

 Papilomavirus cutáneos
Verrugas cutáneas
Virus del Papiloma Humano (VPH)
Papilomavirus mucosos
Bajo riesgo: Neoplasias benignas
Verrugas y Condilomas acuminados
Alto riesgo: Neoplasias malignas
Condilomas invertidos
Cáncer de cuello uterino,
Cáncer de vulva, vagina, ano y pene
Servi-Med

VIRUS DEL PAPILOMA HUMANA
Servi-Med

 Tracto ano-genital 40 tipos
Por su asociación con el cáncer
cervical y lesiones precursoras:
• VPH Bajo Riesgo: 6,11, 40,42, 43, 44,
54, 61, 70, 72 y 81
• VPH Alto Riesgo: 16, 18, 31, 33, 34,
35, 39, 45, 51, 52,56, 58, 59, 66, 68, 70
Servi-Med

Servi-Med

 Ser menor de 25 años
 Primera relación sexual antes de
los 17 años
 Parejas múltiples u ocasionales
 Pareja masculina que tiene o ha
tenido múltiples parejas sexuales
 Padecer enfermedades
sexualmente transmisibles
Servi-Med

 La resistencia del virus al calor y deshidratación,
lo hace factible de infectar a través de fómites.
 El uso del condón no garantiza la protección
contra la infección del VPH
Servi-Med

CITOLOGIA
VAGINAL
Servi-Med

CITOLOGIA VAGINAL
(Papanicolau)
Servi-Med

CAPTURA DE HIBRIDOS: Uso de
sondas de DNA complementario de múltiples
cepas de VPH
Servi-Med

Membranas de nitrocelulosa
Con las sondas virales específicas
Servi-Med

 Familia con mas de 100 especies en toda la naturaleza.
 Formado por dsDNA lineal, con aprox 74 genes.
 La liberación del virus por destrucción celular (ciclo lisogénico).
 Pueden infectar: neuronas, células epiteliales (boca, genitales, piel),
fibroblástos, linfocitos u otros tipos celulares distintos.
 Lesión como vesícula ampollosa agrupadas en racimo, rodeada
por halo rojo
 Forma latente en neuronas
 Al menos 8 especies son
específicas para humanos:
◦ HSV-1 y HSV-2
◦ Varicela
◦ VEB
◦ CMV
◦ HHV6, HHV7, HHV8
Servi-Med

 ALFAVIRUS:
- Ciclo reproductivo relativamente corto y crecimiento fácil en cultivo
- Eficiente destrucción celular y alta capacidad para establecer latencia en ganglios
nerviosos.
- Existen 2 géneros: Simplexvirus (HSV-1 y 2), y Varicellovirus (VZV,
pseudorabia y herpes equino 1).
 BETAVIRUS:
- Tienen un rango de huésped muy estrecho.
- El ciclo reproductivo es lento y crecen muy lentamente en cultivos.
- La célula infectada puede aumentar mucho de tamaño (citomegalia).
- El virus puede permanecer en latencia en glándulas secretoras, células linfoides,
riñón y otros tejidos.
- Existen 2 géneros: Cytomegalovirus (HCMV) y Muromegalovirus (MCMV).
 GAMMAVIRUS:
- In vitro, todos los miembros de este grupo se replican en células linfoblásticas,
aunque en algunos casos pueden lisar células fibroblásticas o epiteliales.
- Existen virus específicos de linfocitos T y B. Se suele inducir la fase de latencia.
- Existen 2 géneros: Lymphocryptovirus (EBV) y el Rhadinovirus (herpesvirus
saimiri)
Servi-Med

Terminaciones empleadas en terminología de clasificación de los virus:
Familia: -viridae  ej. Filoviridae, Herpesviridae
Subfamilia: -virinae  ej. Alphaherpesvirinae, beta y gammavirinae
Género: -virus  ej. Ebolavirus Zaire, HCMV, EBV, HSV
Alphaherpesvirinae Herpes Simplex Virus 1 (HHV-1)
Herpes Simplex Virus 2 (HHV-2)
Varicella zoster virus (HHV-3)
Herpes genital, estomatitis aguda
y llaga labial del resfriado.
Encefalitis.
Herpes genital, encefalitis.
Varicela, Herpes Zóster
Betaherpesvirinae Citomegalovirus Humano (HHV-5)
Herpes virus 6
Herpes virus 7
Mononucleosis infecciosa,
hepatitis, neumonitis.
Roseola, pneumonitis
Roseola
Gammaherpesvirinae Epstein Barr virus (HHV-4)
Herpes virus 8
Mononucleosis infecciosa,
hepatitis, linfomas B.
Linfomas B y Sarcoma de Kaposi

(infección secundaria por HHV-3)
Herpes
Zoster
Varicela Zoster
(infección primaria por HHV-3

 El herpes es una de las enfermedades de transmisión sexual más
comunes. Es causada por el virus del herpes simple de tipo 1 y 2 pero en
infección genital es más común el HSV tipo 2
 El HSV tipo 1 solo es responsable solo de 5-10 % de los herpes
genitales y de hasta un 90 % de los herpes labiales.
 Causas: Contacto oral-genital o contacto genital-genital con
una persona que tiene la infección por HSV-2.
 Los brotes del HSV-1 genital reaparecen con menos
regularidad que los brotes del HSV-2 genital.

 Estas lesiones no deben muestrearse para cultivo u otro estudio.
Su abordaje es por serología, excepto por sospecha de
complicación con infección bacteriana.

 Se estima que entre el 20-40% de los niños sanos y entre el
50-70% de los adultos sanos presentan anticuerpos
producidos tras la exposición al virus del herpes tipo 1.
 Para el herpes tipo 2 la frecuencia se sitúa entre el 0-5% de
los niños y 20-50% de los adultos.
 Alta prevalencia de pacientes con anticuerpos
positivos en los que no se han presentado lesiones
herpéticas
 La alta positividad para Ac anti-Herpes1 & 2 obliga a que la
interpretación se haga en correlación con la
clínica.
Servi-Med

 Ac IgM Anti-Herpes Indican exposición resiente al virus.
Apoya diagnóstico de INFECCIÓN ACTIVA en presencia de
lesiones típicas por este virus.
 Ac IgG Anti-Herpes solo indican que el paciente ha estado
expuesto al virus, con o sin historia de lesiones típicas del
virus.
 En presencia de lesiones sugestivas o dudosas,
puede llegar a ser conveniente una segunda
determinación para confirmar la infección por
aumento del titulo de anticuerpos.
 Técnica para investigar Ac Anti-Herpes 1 & 2:  ELISAELISA.
Servi-Med

 Es un virus de forma esférica de 42 nm de diámetro con dos zonas, una interna
de 27 nm denominada núcleo o core, donde se encuentra el genoma, y una
envoltura externa de composición lipoproteica.
 El VHB es un virus DNA y se clasifica dentro del orden de los Hepadnavirus,
en el grupo que infecta exclusivamente a los mamíferos
Servi-Med

 Periodo de Incubación: 60 a 90 días
 Los anticuerpos contra el HBVsAg confieren protección
contra reinfección:  VACUNA
 Ictericia
Si infección ocurre en < 5 años : < 10 % de los casos
Si infección ocurre en > 5 años: 30 a 50 % idem
 Cronicidad:
Si infección ocurre en < 5 años : cronicidad = 30 %
Si infección ocurre en > 5 años : cronicidad = 2 a 10 %
Servi-Med

Infección con HBVInfección con HBV
Hepatitis B Aguda Hepatitis B CrónicaHepatitis B Crónica
Con resolución
favorable 99 %
Fulminante
< 1%
Hepatitis
Crónica Activa
Portador
Asintomático..?
Latente..?
Cirrosis Carcinoma
Hepatocelular
< 90% < 10%
Servi-Med

 HBsAg: Infección aguda o crónica
 HBeAg: Actividad de replicación viral
 Anti-HBc IgM: Infección aguda
 Anti-HBc IgG: Memoria inmunológica
 Anti-HBs: Inmunidad / infección liberada
 DNA-VHB (rtPCR): Cuantificación de carga
viral
Servi-Med

HBsAg (Antígeno de superficie del VHB)
- Marcador de infección activa e infectividad.
- La negatividad excluye infección por VHB.
- La positividad por un período mayor a 6 meses
indica portador crónico.
- Se detecta en suero a partir de la cuarta semana de
infección mediante técnicas de inmunoanálisis
enzimático (ELISA).
Marcadores serológicos en el
curso de la infección por VHB
Servi-Med

 La posibilidad de que exista infección siendo este marcador
serológico negativo sólo se puede dar en tres circunstancias
excepcionales:
1. Durante el primer mes del periodo de incubación de la
infección.
2. En la fase de resolución de la infección cuando se ha
negativizado el antígeno sin llegar a desarrollarse anti-HBs
todavía.
3. En el caso de mutación del VHB que determina una
incapacidad de éste para sintetizar el HBsAg.
Servi-Med

 Proteína que se produce por escisión de la proteína precore y
core,
 Positividad indica la replicación viral.
 La negatividad de este marcador no implica la ausencia de
ésta. Hay enfermos infectados por virus mutantes que no
sintetizan el HBeAg y no lo presentan en suero a pesar de la
existencia de replicación viral.
 Ayuda a identificar si la cepa del virus infectante es
nativa (si expresa el HBeAg en el suero) o mutante
(si no lo expresa).
 Hace años se le otorgaba a estas diferencias un valor
pronóstico y de respuesta terapéutica, pero esto se ha ido
perdiendo conforme se ha conocido mejor la historia natural de
la infección y la importancia de las mutaciones.
Servi-Med

 Las indicaciones actuales para solicitar la
determinación de DNA del VHB son:
1.1. Valoración inicialValoración inicial de una infección crónica por el
VHB, ya que la replicación es un factor de progresión
de la enfermedad y de su actividad.
2. Monitorear el tratamiento con antivirales o
interferón en las hepatitis crónicas por VHB.
3. No es necesario para el diagnóstico y
seguimiento de una hepatitis aguda por el VHB
Servi-Med

 Familia Flaviviridae, Genero, HepacivirusHepacivirus.
 Tiene forma esférica de aprox 50 nm y posee envoltura externa y un core
que contiene al material genético
 El genoma del VHC consta de una cadena de RNA que codifica para:
proteína de nucleocápside, de núcleo, de la envoltura y proteínas no
estructurales (complejo replicasa del ARN viral).
Envoltura externa
Core o
envoltura interna
RNA monocatenario
Servi-Med

 Periodo de incubación: 6-8 semanas.
 La infección aguda puede ser sintomática, o cursar con malestar general,
nauseas y dolor en hipocondrio derecho.
 En estudios de laboratorio presenta aumentos de las PFH.
 Coliuria e ictericia (solo en el 25 % de los casos).
 Hasta el 70 % de los casos de hepatitis C aguda evolucionan a la
cronicidad y se estima que el 10 % de los pacientes con hepatitis C
crónica progresan hacia la cirrosis luego de 20 años de iniciada la
enfermedad.
 Los pacientes infectados por el VHC, especialmente los que tienen cirrosis,
presentan un riesgo mayor de padecer carcinoma hepatocelular.
  Muchos casos de hepatitis C crónica ocurren en personas sin
antecedentes de hepatitis C aguda.
 La tercera parte de los pacientes con Hepatitis C crónica tienen
valores de transaminasas normales o casi normales  MAL
PRONÓSTICO
 NO HAY MANIFESTACIÓNES GENITALES DE INFECCIÓN POR HEPATITIS B o C
Servi-Med

 Se inyectan drogas ilícitas o comparten agujas con alguien que tenga hepatitis
C.
 Hayan estado sometidas a diálisis renal durante mucho tiempo.
 Tienen contacto frecuente con sangre en su trabajo (por ejemplo, un trabajador
de la salud).
 Nacieron de una madre infectada con hepatitis C.
 Recibieron una transfusión de sangre antes de julio de 1992.
 Les hicieron un tatuaje o acupuntura con agujas reutilizadas.
 Recibieron un trasplante de órganos de un donante con hepatitis C.
 Comparten elementos de uso personal, como cepillos de dientes o rastrillos, con
alguien que tiene hepatitis C (menos común).
 Recibieron una transfusión de sangre mal tamizada
 Tienen relaciones sexuales sin protección con una persona que padece
hepatitis C.
 NO HAY MANIFESTACIÓNES GENITALES DE INFECCIÓN POR
HEPATITIS B o C
Servi-Med

Pruebas de
Confirmación:
 Se utilizan luego de una prueba de
ELISA positiva e incluyen:
 RIBA recombinant immunoblot
assay (western blot para
detectar anticuerpos
específicos)
 Carga Viral (UI/mL):
Detección cuantitativa del
ARN del VHC
 Cobas-Amplicolor,
 Versant HCV-RNA.
Pruebas de Laboratorio:
Anticuerpos Anti - VHC.
 ELISA es el estándar
 La prueba de ELISA (3ª gen) tiene
una sensibilidad del 97 % por lo que
se utiliza como Tamizaje de la
infección por VHC.
 Se positiviza a las 6-8 semanas del
inicio de la infección.
 Diferenciar anticuerpos IgM &
IgG no son útiles en la clínica.
 Los anticuerpos no confieren
protección contra reinfección:
 NO HAY VACUNA
Servi-Med

 Hay 6 genotipos del VHC (del 1 a 6) con tres grupos subdivididos
(1a y 1b, 2a, 2b y 2c, 3a, 3b y 3c).
 Los genotipos 1a, 1b, 2a, 2b, 2c y 3a se encuentra en el 90%
de las infecciones por el VHC en América del Norte y en
Sudamérica, Europa, Rusia, China, Japón, Australia y Nueva
Zelanda.
 Genotipo 3: en Africa y en adictos a drogas ilicitas.
 Genotipo 4: presentes en Africa y Medio oriente. En un estudio
egipcio, mas del 90 % de los casos estudiados eran de este
genotipo.
 Genotipos 5 y 6: presentes en Sudamerica y el Suroeste de Asia.
 El 45%El 45% de las personas con el genotipo 1 del VHC tienen una respuesta
sostenida seis meses después de finalizar el tratamiento,
 El 75%El 75% de las personas con genotipo 2 o 3 del VHC tienen una respuesta
sostenida seis meses después de finalizar el tratamiento.
Servi-Med

• El 90% de los casos se asocia a
transfusiones y diálisis, son muy
pocos los asociados a relaciones
sexuales y por transmisión
perinatal.
• Hasta el 50 % de las parejas
sexuales de personas infectadas,
llegan a contraer la Hepatitis C.
Servi-Med

◦ Insuficiencia renal terminal o hemodiálisis, en las cuales se
ha registrado una seroprevalencia de 6.7 y 10.2%
◦ Adultos (con mas de dos parejas sexuales) asistentes de
clínicas de detección de ETS, prevalencia de 2% de anti-
VHC
◦ Bancos de sangre / donadores: en México entre los años
1999 y 2003, se notificó en México, una frecuencia de
0.76 % del marcador anti-VHC (ELISA) en más de un
millón de donaciones realizadas cada año
  Cronicidad de entre el 50 a 70 % de los casos.
Servi-Med

Gracias
!!
Servi-Med

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