Este documento proporciona información sobre pruebas de diagnóstico de VIH/SIDA, incluida la carga viral de VIH y el recuento de CD4. Explica cómo la carga viral cuantifica las copias de ARN viral en el plasma y monitorea la eficacia del tratamiento. También describe los métodos de prueba disponibles como PCR y bDNA, así como recomendaciones para la obtención y almacenamiento de muestras.

1. Diagnóstico LaboratorialDiagnóstico Laboratorial
VIH - SIDAVIH - SIDA
Blgo. Hernan Daniel Cornejo PacherresBlgo. Hernan Daniel Cornejo Pacherres
LaboratorioLaboratorio
Referencial Regional de VIHReferencial Regional de VIH
Dirección deDirección de
Laboratorios de Salud PúblicaLaboratorios de Salud Pública

2. RNA
Transcriptasa
reversa
Protesa
Integrasa
gp 40
gp 120
Bicapa
Lipidica
p 17
p 24
p 9

14.  CARGA VIRAL DE VIHCARGA VIRAL DE VIH
 RECUENTO DE CD4 / CD8RECUENTO DE CD4 / CD8
PRUEBA DE MONITOREO DEPRUEBA DE MONITOREO DE
PACIENTES VIH POSITIVOSPACIENTES VIH POSITIVOS

15. CARGA VIRALCARGA VIRAL
DE VIH-1DE VIH-1

16. Carga Viral VIH-DefinicionesCarga Viral VIH-Definiciones
 Cuantificación de copias de RNA viral/ml en elCuantificación de copias de RNA viral/ml en el
plasma de personas infectadas por VIHplasma de personas infectadas por VIH
 Cuantificación de virus circulante que seCuantificación de virus circulante que se
encuentra en el plasmaencuentra en el plasma
 Número de partículas de VIH libres en el plasmaNúmero de partículas de VIH libres en el plasma
de los pacientesde los pacientes
 CARGA VIRAL VIH = VIREMIACARGA VIRAL VIH = VIREMIA

17. UTILIDAD
 Predecir la progresión clínica de la infección
VIH-SIDA.
 Indicar al médico tratante el momento óptimo
para iniciar el tratamiento antirretroviral.
 Monitorizar el tratamiento con antirretrovirales:
•Tratamiento eficaz (reducción a niveles
indetectables)
• Fracaso terapeutico (resistencia,adherencia)
Estimar el riesgo de transmisión ,especialmente
materno-fetal

18. PRUEBAS RNA DISPONIBLES
 Reacción en Cadena de la Polimerasa
 ( PCR Polimerasa Chain Reaction.)
 DNA Ramificado (bDNA, branched Chain DNA
 assay
 Amplificación basado en ácidos nucleicos
 ( NASBA, nucleic acid sequence-based amplification).
 Reportado como “número de copias” o copias /ml

19. RECOMENDACIONESRECOMENDACIONES
 Se debe escoger sólo un método de ensayo paraSe debe escoger sólo un método de ensayo para
carga viral de VIH-1 y debe ser utilizadocarga viral de VIH-1 y debe ser utilizado
consistentemente en un sólo individuoconsistentemente en un sólo individuo
 Ensayos deben realizarse despuès de un mes deEnsayos deben realizarse despuès de un mes de
vacunados o de un proceso infeccioso agudovacunados o de un proceso infeccioso agudo
(vacunas contra la gripe, hepatitis provocan(vacunas contra la gripe, hepatitis provocan
aumento de carga viral)aumento de carga viral)

20. OBTENCION DE MUESTRAS Y
ESTABILIDAD
 Obtención de Sangre en tubos con EDTA o Citrato
 Tubos con heparina no son aceptables
 Preferiblemente se usan tubos con EDTA
 La sangre se diluye un 15% en tubos de citrato
 Estabilidad del RNA en la sangre es mejoren
EDTA que en Citrato
 Separa el plasma antes de 3-6 horas desde la
centrifugación

21.  Almacenary enviarel plasma congelado a 2-8°C
 HIV RNA es estable en plasma a 2-8°C durante 5
dias
 HIV RNA es estable en plasma durante 3 ciclos de
congelación y descongelación
OBTENCION DE MUESTRAS Y
ESTABILIDAD

22. AMPLICORHIV MONITOR
 PREPARACION
• 200uL Plasma
• EstándarInterno de Cuantificación de RNA
 AMPLIFICACION
• Simple Transcripción reversa y PCR
 DETECCION
• Formato similara los ELISA
• Resultado colorimétrico
 RESULTADOS
• 24 tests en 6 horas

23. ¿Qué es Citometría de¿Qué es Citometría de
Flujo?Flujo?
 Medición simultánea de múltiplesMedición simultánea de múltiples
características físicas y químicas de célulascaracterísticas físicas y químicas de células
en suspensión.en suspensión.
 Las mediciones son hechas sobre elLas mediciones son hechas sobre el
principio célula-por-célula en un promedioprincipio célula-por-célula en un promedio
rutinario de 500 a 4000 células porrutinario de 500 a 4000 células por
segundo.segundo.

24. ¿Qué puede decirnos un¿Qué puede decirnos un
Citómetro de Flujo acerca deCitómetro de Flujo acerca de
una célula?una célula?
 Su tamaño relativo (Forward Scatter—FSC)Su tamaño relativo (Forward Scatter—FSC)
 Su granularidad relativa o complejidadSu granularidad relativa o complejidad
interna (Side Scatter—SSC)interna (Side Scatter—SSC)
 Su Intensidad fluorescente relativaSu Intensidad fluorescente relativa
(FL1, FL2, FL3, FL4, and FL5)(FL1, FL2, FL3, FL4, and FL5)

25. FACSCountFACSCount
Principios del ProcedimientoPrincipios del Procedimiento
 Muestra: Sangre Completa no lisadaMuestra: Sangre Completa no lisada
 Método: IF Directa a 02 colores.Método: IF Directa a 02 colores.
 El instrumento detecta: dos colores y el tamaño celular.El instrumento detecta: dos colores y el tamaño celular.
 CD3 fluorescencia roja, CD4/CD8 fluorescenciaCD3 fluorescencia roja, CD4/CD8 fluorescencia
amarilla.amarilla.
 Reactivo o facspet contiene Acs. que ligan al Ag.Reactivo o facspet contiene Acs. que ligan al Ag.
linfocitario respectivo.linfocitario respectivo.

26. FACSCountFACSCount
Principios del ProcedimientoPrincipios del Procedimiento
 ReactivosReactivos: además de los Acs. Específicos poseen un: además de los Acs. Específicos poseen un
número conocido de Beads o perlas de referencia quenúmero conocido de Beads o perlas de referencia que
funcionan como standard de fluorescencia yfuncionan como standard de fluorescencia y
cuantificación para calcular recuentos absolutos de CD4,cuantificación para calcular recuentos absolutos de CD4,
CD8 y CD3.CD8 y CD3.
 FijaciónFijación: Realizada antes del análisis para preservar la: Realizada antes del análisis para preservar la
integridad de la unión de Acs.integridad de la unión de Acs.