Este documento describe la técnica de elución con gradiente en cromatografía líquida. Explica que involucra el uso de dos o más solventes de polaridad variable cuya proporción cambia a lo largo de la elución, lo que permite una separación más efectiva de analitos con tiempos de retención similares. También detalla los pasos para desarrollar un método de elución con gradiente, incluyendo la selección de condiciones iniciales y el ajuste de parámetros como el rango de gradiente y la selectividad.

1. Título: Elución con gradiente
Estudiante: Tidiam K.
Santamaría
Profesor: Víctor LópezProfesor: Víctor López
Febrero, 2015Febrero, 2015
COLUMBUS UNIVERSITYCOLUMBUS UNIVERSITY
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA EDUCACIÓNFACULTAD DE CIENCIAS DE LA EDUCACIÓN
POSTGRADO EN DOCENCIA SUPERIORPOSTGRADO EN DOCENCIA SUPERIOR
MÓDULO: COMUNICACIÓN Y TECNOLOGÍAMÓDULO: COMUNICACIÓN Y TECNOLOGÍA
Elución en Gradiente

2. Ventajas de la Elución enVentajas de la Elución en
GradienteGradiente Es una de las formas más efectivas para separar
varios analitos que tienen tiempos relativos de
retención similares.
 Muestras que contienen interferencias que
eluyen retrasadas.
Elución en Gradiente
esventajas de la Elución en Gradient
 Reequilibrado de la columna
 Línea base
 Solventes
 Combinaciones de FM no recomendables
 Incompatibilidad con detectores
 Más rutinas de análisis

3. Aplicaciones de la Elución en GradienteAplicaciones de la Elución en Gradiente
 Analitos muy retenidos
O
OOH OH
RR
R = OH, Me, COOH, CHO, CH2OH
Elución en Gradiente
 Maximización de la detección

4. Rango de retención
0.5 < k < 20
Aplicaciones de la Elución en GradienteAplicaciones de la Elución en Gradiente
O
R
O
R
O
O
R = (1-9 Carbonos)

5. PASOS PARA EL MÉTODOPASOS PARA EL MÉTODO
DE ELUCIÓN CONDE ELUCIÓN CON
GRADIENTEGRADIENTE
La separación inicial será
optimizada por k*
Selección de condiciones iniciales
Columna
Composición de la fase móvil
Flujo
Temperatura
Ajuste de rango de gradiente
Ajuste de selectividad (α)
Condiciones de la columna
Protocolo de re-equilibración
Elución en Gradiente

6. Utiliza dos o más solventes de polaridad distinta cuyaUtiliza dos o más solventes de polaridad distinta cuya
relación cambia a lo largo de la elución cromatográfica.relación cambia a lo largo de la elución cromatográfica.
Elución en Gradiente
DESARROLLO DE LA SEPARACIÓN CON GRADIENTEDESARROLLO DE LA SEPARACIÓN CON GRADIENTE

7. Sistema de bombeo
Elución en Gradiente

8. Condiciones experimentales
Efecto del equipo en las separaciones
Elución en Gradiente

9. Referencias…
1.Lloyd R. Snyder, Joseph J. Kirkland, Joseph L.
Glajch. Practical HPLC Method Development. 2nd
ed.1997. pp 350-399
2.Gary D. Christian. Química Analítica. 6º Edición.
McGraw-Hill, México (2009). pp. 555-618
3.D.A. Skoog, J.J. Leary, “Análisis
Instrumental”, McGraw-Hill, Madrid (1996)
Elución en Gradiente

10. Referencias…
1.Lloyd R. Snyder, Joseph J. Kirkland, Joseph L.
Glajch. Practical HPLC Method Development. 2nd
ed.1997. pp 350-399
2.Gary D. Christian. Química Analítica. 6º Edición.
McGraw-Hill, México (2009). pp. 555-618
3.D.A. Skoog, J.J. Leary, “Análisis
Instrumental”, McGraw-Hill, Madrid (1996)
Elución en Gradiente