metodos citoquimicos de tincion

1. METODO CITOQUIMICOS

2. • El objetivo de estos metodos es la localizacion
e identificacion de las sustancias quimicas
constituyentes de las celulas, para lo cual hay
dos lineas de investigacion.

3. • 1.-obtencion de fracciones subcelulares y su
posterior analisis bioquimico,
• 2.- determinacion de diferentes compuestos
quimicos en el interior de la celula.

4. ¿QUE ES LA CITOQUIMICA?
• La citoquimica estudia la composicion quimica
de la celula y permite detectar la localizacion
topografica de algunos principios
inmeditos,enzimas, metales pesados y otras
sustancias. Se considera como un nexo de
union entre la morfologia y la bioquimica.

5. EN UNA REACCION BIOQUIMICA
HAY TRES PASOS FUNDAMENTALES:
• 1.-fijacion:para preservar las mestruicturas y reactividad funcional
celulares evitando fenomenos nocivos para la misma e impidiendo
tambien la difucion de componentes bioquimicas entre los diferentes
comportamientos celulares asi como al medio extracelular. Existen
diversos fijadores: metanol, etanol, acetona, glutaraidehido,
formaldehido, etc.
• 2,. Incubacion en el medio de reaccion: como consecuencia se liberan
unos productos que bien por si mismo, o al combinarse con otra
sustancia presente, dan lugar a un presipitado visible en lugar de la
reaccion.
• 3,. Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reacción y
permitir una óptima visualización del núcleo y del citoplasma. Las
reacciones deben tener 3 características: sensibilidad, especificidad y
reproductibilidad. Las muestras a estudiar son extensiones de sangre
periférica y de médula ósea, improntas de tejidos y células
impactadas mediante cito centrifugación procedentes de diversos
líquidos biológicos. Las muestras deben ser recientes y a poder ser sin
anticoagulantes.Para la correcta valoración citoquímica hay que
intercalar controles positivos y negativos.

6. LA CROMATOGRAFIA
• permite la separación de biomoléculas
basándose en la diferente velocidad de
desplazamiento de los componentes de una
mezcla a través de un medio determinado.
• La velocidad de desplazamiento dependerá de
las características de las biomoléculas. Dentro
de esta técnica existen distintas modalidades.

7. CROMATOGARFIA EN PAPEL
• se aplica una mezcla de biomoléculas sobre una
hoja de papel adsorbente. Uno de los extremos
se impregna con un disolvente que avanzará por
capilaridad a través del papel. Aquellas moléculas
que sean solubles en el disolvente serán
arrastradas y avanzarán más rápido que las que
no lo sean obteniéndose así una separación en
función de la solubilidad .

8. CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO
IONICO
• la muestra se pasa por una columna con una
resina cargada(positiva o negativamente) de
forma que las moléculas de la muestra
interaccionarán con la resina en mayor o
menor grado en función de su carga y, por
tanto, avanzarán a distinta velocidad. Al final
podrán recogerse las distintas fracciones
• separadas en función de su carga.

9. CROMATOGRAFIA DEFILTRACION
• se pasa la muestra por una columna de resina
porosa sin cargas. Las moléculas pequeñas
avanzarán más despacio pues tienden a entrar
en los poros de la resina, mientras lasgrandes
irán más rápido. La
• separación se hace, por tanto, en función del
tamaño molecular.

10. ELECTROFORESIS
• es una técnica derivada de la cromatografía que lo que
hace es aplicar un campo eléctrico a una muestra
colocada en la base de una lámina del gel agarosa.
• La electricidad forzará el desplazamiento delas
moléculas en función de su carga, es decir, se moverán
al polo positivo o al negativo según cual sea su carga
neta y lo harán a una velocidad que dependerá de
sumas a y del número de cargas eléctricas.

11. METODOS DE FRACCIONAMIENTO
CELULAR
• En los métodos de fraccionamiento celular lo que se hace es destruir la célula por
procedimientos mecánicos o químicos (trituración, vibración ultrasónica, choque
osmótico...) y luego se separan los distintos componentes que constituyen la
célula.
• El método más usado es la ultra centrifugación diferencial, proceso durante el cual
se somete a las células destruidas a una serie de centrifugaciones, con fuerzas
centrífugas progresivamente mayores, de forma que las partículas se van
separando en función de su tamaño; en cada fase se obtiene un precipitado que se
recoge y un sobrenadante que se vuelve a centrifugar.
• Por este método separamos los distintos componentes celulares que podemos
estudiar de forma aislada . La última fracción que se obtiene corresponderá a una
fase soluble en la que tendremos todo tipo de moléculas. Para estudiar esta fase
soluble, es decir, para separar distintas biomoléculas podemos recurrir a otras
técnicas como la cromatografía y la electroforesis.