1. “EFECTO DE LA FLEBOTOMÍA SOBRE LOS VALORES HEMATOLÓGICOS
DE HIERRO EN Cavia porcellusEN EL MES DE DICIEMBRE 2011”
I. INTRODUCCIÓN
El hierro es uno de los elementos integrantes de la estructura de muchas proteínas
fundamentales en el organismo. Entre ellas se encuentra la hemoglobina,
mioglobina, citocromos y algunas enzimas como la catalasa y peroxidasas. El
hierro presente en la hemoglobina permite, mediante los enlaces de coordinación
del átomo, una unión débil a la molécula de oxígeno de forma reversible,
transportándolo a los tejidos para su posterior liberación en el líquido tisular como
oxígeno molecular.
En las pérdidas continuas de sangre, una persona no puede con frecuencia absorber
suficiente hierro de los intestinos como para formar hemoglobina tan rápidamente
como la pierde. Entonces los eritrocitos se producen más pequeños de lo normal y
tiene muy poca hemoglobina dentro, lo que da lugar a una anemia
hipocrómicamicrocítica, caracterizada por Hb disminuida, VCM<80, así como
hierro y ferroproteínas muydisminuidas o incluso en niveles indetectables.
La flebotomía, consiste en el procedimiento de extracción de sangre desde
una vena periférica, a través de un sistema estéril con aguja, equipo y bolsa de
colecta, semejante al procedimiento para la transfusión de sangre.En el caso de
la hemocromatosis corresponde a parte del tratamiento, ya que con esto se consigue
disminuir los niveles de hierro, o reducir el exceso de hemacias en la policitemia.
La flebotomía terapéutica es la extracción de sangre de pacientes en beneficio de su
propia salud, a menudo por una patología que incrementa el nivel de hemoglobina.
OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES
Variable independiente Variable dependiente
Variable Flebotomía Hierro
Indicador 10% volumen corporal (VC) Hemoglobina, Hematocrito, VCM, HCM
Escala Cuantitativa Cuantitativa
Estadístico Descriptivo Descriptivo
1

2. II. OBJETIVOS
2.1.Objetivo general
Evaluar el efecto de la Flebotomía sobre los valores hematológicos de
hierro en Cavia porcellusen los meses de Octubre-Diciembre 2011.
2.2. Objetivos específicos
Evaluar el efecto de la Flebotomía sobre los valores de hemoglobina en
Cavia porcellusen los meses de Octubre-Diciembre 2011.
Evaluar el efecto de la Flebotomía sobre los valores de hematocrito en
Cavia porcellusen los meses de Octubre-Diciembre 2011.
Evaluar el efecto de la Flebotomía sobre los valores de Volumen
corpuscular medio(VCM) en Cavia porcellusen los meses de Octubre-
Diciembre 2011.
Evaluar el efecto de la Flebotomía sobre los valores de Hemoglobina
corpuscular media (HCM) en Cavia porcellusen los meses de Octubre-
Diciembre 2011.
HIPÓTESIS
Dado que las hemorragias largas y abundantes, producen una disminución de los
niveles de hierro en el organismo; es probable que la flebotomía provoque
disminución de la sideremia en Cavia porcellus.
2

3. III. MARCO TEÓRICO
El hierro es un elemento esencial parala vida, puesto que participa prácticamenteen
todos los procesos de oxidaciónreducción. Lo podemos hallar formandoparte
esencial de las enzimas del ciclo deKrebs, en la respiración celular y
comotransportador de electrones en loscitocromos. Está presente en
numerosasenzimas involucradas en el mantenimientode la integridad celular, tales
como lascatalasas, peroxidasas y oxigenasas. Suelevado potencial redox, junto a su
facilidadpara promover la formación de compuestostóxicos altamente reactivos,
determina queel metabolismo de hierro sea controlado porun potente sistema
regulador. Puede considerarse que el hierro en elorganismo se encuentra formando
parte de2 compartimientos: uno funcional, formadopor los numerosos compuestos,
entre losque se incluyen la hemoglobina, lamioglobina, la transferrina y las enzimas
querequieren hierro como cofactor o comogrupo prostético, ya sea en forma iónica
ocomo grupo hemo, y el compartimiento dedepósito, constituido por la ferritina y
lahemosiderina, que constituyen las reservascorporales de este metal. El contenido
total de hierro de unindividuo normal es aproximadamente de3,5 a 4 g en la mujer y
de 4 a 5 g en el hombre. En individuos con un estado nutricionalóptimo alrededor
del 65 % se encuentraformando parte de la hemoglobina, el 15%está contenido en
las enzimas y lamioglobina, el 20 % como hierro de depósitoy solo entre el 0,1 y
0,2 % se encuentraunido con la transferrina como hierrocirculante. La circulación
del hierro entre estos 2compartimientos se produce a través de unciclo
prácticamente cerrado y muy eficiente. Del total del hierro que se
movilizadiariamente, sólo se pierde una pequeñaproporción a través de las heces, la
orina yel sudor. La reposición de esta pequeñacantidad se realiza a través de la
ingesta, apesar de que la proporción de hierro que seabsorbe de los alimentos es
muy baja, entre1 y 2 mg (aproximadamente el 10 % de laingesta total). En un
adulto normal, lahemoglobina contiene aproximadamente 2 gde hierro (3,4 mg/g de
hemoglobina), queluego de los 120 días de vida media de loseritrocitos, son
cedidos a los fagocitos delsistema retículo endotelial (SRE) a razón de24 mg/día,
de los cuales, 1 mg en los hombresy 2 mg en las mujeres son
excretadosdiariamente. El SRE recibe también unremanente de hierro que proviene
de laeritropoyesis ineficaz (aproximadamente2 mg). De los 25 mg contenidos en el
SRE,2 mg se encuentran en equilibrio con elcompartimiento de depósito y 23 mg
sontransportados totalmente por la transferrinahasta la médula ósea para la síntesis
dehemoglobina. Para cerrar este ciclo, lamédula requiere diariamente 25 mg, de
loscuales 23 mg provienen del SRE y de 1 a 2 mgde la absorción intestinal.
Aproximadamente7 mg se mantienen en equilibrio entre lacirculación y los
depósitos. La principal diferencia entre elmetabolismo del niño y del adulto está
dadapor la dependencia que tienen los primerosdel hierro proveniente de los
alimentos. Enlos adultos, aproximadamente el 95 % delhierro necesario para la
síntesis de lahemoglobina proviene de la recirculacióndel hierro de los hematíes
destruidos. Encontraste, un niño entre los 4 y 12 meses deedad, utiliza el 30 % del
3

4. hierro contenido enlos alimentos con este fin, y la tasa de reutilizacióna esta edad
es menos significativa.
ABSORCIÓN DE HIERRO
En un individuo normal, lasnecesidades diarias de hierro son muy bajasen
comparación con el hierro circulante, porlo que sólo se absorbe una
pequeñaproporción del total ingerido. Estaproporción varía de acuerdo con la
cantidady el tipo de hierro presente en los alimentos,el estado de los depósitos
corporales delmineral, las necesidades, la actividaderitropoyética y una serie de
factoresluminales e intraluminales que interfieren ofacilitan la absorción.
La absorción depende en primer lugardel tipo de compuesto de hierro presenteen la
dieta, en dependencia de lo cual van aexistir 2 formas diferentes de absorción: ladel
hierro hemo y la del hierro inorgánico.
ABSORCIÓN DE HIERRO INORGÁNICO
El hierro inorgánico por acción del ácidoclorhídrico del estómago pasa a su
formareducida, hierro ferroso (Fe2+), que es la formaquímica soluble capaz de
atravesar lamembrana de la mucosa intestinal.Algunas sustancias como el
ácidoascórbico, ciertos aminoácidos y azúcarespueden formar quelatos de hierro de
bajopeso molecular que facilitan la absorciónintestinal de este.Aunque el hierro
puede absorberse alo largo de todo el intestino, su absorciónes más eficiente en el
duodeno y la partealta del yeyuno. La membrana de la mucosaintestinal tiene la
facilidad de atrapar elhierro y permitir su paso al interior de lacélula, debido a la
existencia de un receptorespecífico en la membrana del borde encepillo. La
apotransferrina del citosolcontribuye a aumentar la velocidad yeficiencia de la
absorción de hierro.En el interior del citosol, laceruloplasmina (endoxidasa I) oxida
el hierroferroso a férrico para que sea captado porla apotransferrina que se
transforma entransferrina. El hierro que excede lacapacidad de transporte
intracelular esdepositado como ferritina, de la cual unaparte puede ser
posteriormente liberada ala circulación.
ABSORCIÓN DE HIERRO HEMO
Este tipo de hierro atraviesa lamembrana celular como una metaloporfirinaintacta,
una vez que las proteasas endoluminales o de la membrana del enterocitohidrolizan
la globina. Los productos de estadegradación son importantes para elmantenimiento
del hemo en estado soluble,con lo cual garantizan su disponibilidadpara la
absorción. En el citosol lahemoxigenasa libera el hierro de laestructura
tetrapirrólica y pasa a la sangrecomo hierro inorgánico, aunque unapequeña parte
del hemo puede ser transferidodirectamente a la sangre portal.Aunque el hierro
hemínico representauna pequeña proporción del hierrototal de la dieta, su absorción
es muchomayor (20-30 %) y está menos afectada porlos componentes de ésta. No
obstante, aligual que la absorción del hierro inorgánico,la absorción del hemo es
favorecida por lapresencia de carne en la dieta, posiblementepor la contribución de
ciertos aminoácidosy péptidos liberados de la digestión amantener solubles, y por
4

5. lo tanto,disponibles para la absorción, ambasformas de hierro dietético. Sin
embargo, elácido ascórbico tiene poco efecto sobre laabsorción del hemo, producto
de la menordisponibilidad de enlaces de coordinaciónde este tipo de hierro. Por su
parte el calciodisminuye la absorción de ambos tipos dehierro por interferir en la
transferencia delmetal a partir de la célula mucosa, no así ensu entrada a esta.
FACTORES QUE AFECTAN LA ABSORCIÓN DEL HIERRO
El enterocito desempeña un papelcentral en la regulación de la absorción dehierro,
debido a que los niveles intracelularesadquiridos durante su formacióndeterminan
la cantidad del mineral que entraa la célula. El hierro del enterocito ingresaa la
circulación de acuerdo con lasnecesidades, y el resto permanece en suinterior hasta
su decamación. De este modo,las células mucosas protegen al organismocontra la
sobrecarga de hierro provenientede los alimentos, al almacenar el exceso
delmineral como ferritina, que esposteriormente excretada durante elrecambio
celular normal.La absorción de hierro puede serajustada dentro de ciertos límites
para cubrirlos requerimientos de este metal. De estemodo, condiciones como la
deficiencia dehierro,la anemia, la hipoxia, conllevan unaumento en la absorción y
capacidad detransporte, aunque es bueno destacar queel incremento en la absorción
de hierrohemo es de menor proporción, debidoposiblemente a que la superficie
absortivade la célula intestinal no reconoce al hemocomo hierro, por lo que el
incremento de suabsorción se deberá solamente a la pérdidade la saturación de los
receptores dentrode la célula y en las membranasbasolaterales.La absorción del
hierro puede sertambién afectada por una serie de factoresintraluminales como la
quilia gástrica, eltiempo de tránsito acelerado y lossíndromes de malabsorción.
Además deestos factores, existen sustancias quepueden favorecer o inhibir la
absorción.Así por ejemplo, el hierro hemoproveniente de las carnes y los
pescadoses más fácil de absorber que el hierroinorgánico de los vegetales, los que
enmuchos casos, contienen concentracionesmás elevadas del metal. Sin embargo,
laadición de pequeñas porciones de carneso pescados puede aumentar la
absorcióndel hierro presente en los vegetales, fundamentalmentepor su contenido
de aminoácidos.Existen además otras sustanciasque favorecen la absorción de
hierro, comoson los agentes reductores, especialmenteel ácido ascórbico.Entre los
inhibidores de la absorciónde hierro tenemos la ingesta crónica dealcalinos,
fosfatos, fitatos y taninos. Laabsorción disminuye proporcionalmentecon el
volumen de té o café consumidos,así se ha determinado que en presencia deté la
absorción de este mineral disminuyehasta el 60 % mientras que en la de café
laabsorción se reduce hasta el 40 %.Por su parte los fitatos (hexafosfatosde inositol)
que se localizan en la fibra delarroz, el trigo y el maíz, y la lignina de lasparedes de
las células vegetales, constituyenpotentes inhibidores de la absorciónde hierro,
debido a la formación de quelatosinsolubles. En este sentido, se hacalculado que de
5 a 10 mg de fitatospueden reducir la absorción del hierro nohemo a la mitad, lo
que puede ser evitadopor el consumo de pequeñas cantidades decarne y vitamina C
que impiden la formaciónde estos quelatos, lo que provoca unaumento de la
absorción aún en presenciade los inhibidores de ésta. El contenidode sustancias
5

6. favorecedoras e inhibidorasde la absorción va a determinarla biodisponibilidad del
hierro presenteen la dieta.El conocimiento de los mecanismos queregulan la
absorción de hierro permitedeterminar el valor nutricional de losalimentos y la
forma de mejorar su biodisponibilidad,pero también permiteseleccionar
apropiadamente los compuestosde hierro mejores y más seguros querespeten el
papel regulador de la mucosaintestinal.
TRANSPORTE
El hierro es transportado por latransferrina, que es una glicoproteína
deaproximadamente 80 kDa de peso molecular,sintetizada en el hígado, que posee
2 dominioshomólogos de unión para el hierroférrico (Fe3+). Esta proteína toma el
hierroliberado por los macrófagos producto de ladestrucción de los glóbulos rojos o
elprocedente de la mucosa intestinal, seocupa de transportarlo y hacerlo disponiblea
todos los tejidos que lo requieren.Se le denomina apotransferrina a laproteína que
no contiene hierro, transferrinamonoférrica cuando contiene un átomo dehierro y
diférrica cuando contiene 2 átomos.Cuando todos los sitios de transporte
estánocupados se habla de tranferrina saturaday se corresponde con alrededor de
1,41 μg/mgde transferrina. En condiciones fisiológicas,la concentración de
transferrinaexcede la capacidad de unión necesaria, porlo que alrededor de dos
tercios de los sitiosde unión están desocupados. En el casode que toda la
transferrina esté saturada, elhierro que se absorbe no es fijado y sedeposita en el
hígado.La vida media normal de la molécula detransferrina es de 8 a 10 días,
aunque elhierro que transporta tiene un ciclo másrápido, con un recambio de 60 a
90 minutos como promedio. Del total de hierro transportado por latransferrina,
entre el 70 y el 90 % es captadopor las células eritropoyéticas28 y el restoes
captado por los tejidos para la síntesisde citocromos, mioglobina, peroxidasas
yotras enzimas y proteínas que lo requierencomo cofactor.
CAPTACIÓN CELULAR
Todos los tejidos y células poseen unreceptor específico para la transferrina, através
de cuya expresión en la superficiecelular, regulan la captación del hierro deacuerdo
con sus necesidades. Laconcentración de estos receptores esmáxima en los
eritroblastos (80 % del totalde los receptores del cuerpo), donde elhierro es captado
por las mitocondrias paraser incluido en las moléculas deprotoporfirina durante la
síntesis del grupohemo. A medida que se produce lamaduración del glóbulo rojo, la
cantidad dereceptores va disminuyendo, debido a quelas necesidades de hierro para
la síntesisde la hemoglobina son cada vez menores.El receptor de la transferrina es
una glicoproteínaconstituida por 2 subunidades,cada una de 90 kDa de peso
molecular,unidas por un puente disulfuro. Cadasubunidad posee un sitio de unión
para latransferrina. Estos receptores se encuentrananclados en la membrana a través
de undominio transmembrana, que actúa comopéptido señal interno, y poseen
ademásun dominio citosólico de aproximadamente5 kDa. Se ha observado la
presencia demoléculas de receptor circulando en elplasma sanguíneo, que son
incapaces deunir transferrina, puesto que carecen desus porciones transmembranosa
6

7. ycitosólica; a estos receptores se les conocecomo receptor soluble. No obstante
suincapacidad de unir transferrina, se haencontrado una relación directa entre
laconcentración de receptor circulante y elgrado de eritropoyesis, así en la
deficienciade hierro hay un aumento de laconcentración de receptores solubles.
El receptor de transferrina desempeñaun papel fundamental en el suministro
dehierro a la célula, puesto que la afinidad delreceptor por el complejo hierro-
transferrinaal pH ligeramente alcalino de la sangre,depende de la carga de hierro de
la proteína.La afinidad máxima se alcanza cuando latransferrina está en su forma
diférrica.El complejo hierro-transferrina-receptores internalizado en la célula a
través de unproceso de endocitosis. El cambio del pH ligeramente alcalino al pH
ácido delendosoma provoca un cambio en laestabilidad del complejo que ocasiona
ladisociación espontánea de los átomos dehierro; por su parte, la transferrina
semantiene unida al receptor hasta que unnuevo cambio de pH, en sentido
contrario,al nivel de la membrana, provoca la rupturadel complejo y la consiguiente
liberaciónde la transferrina que queda nuevamentedisponible para la captación y
transporte del hierro circulante. La liberación dentro de la célula delhierro unida a
la transferrina es secuencial.La primera molécula es liberada por el pHácido del
citosol, mientras la segundarequiere ATP para su liberación.
DEPÓSITOS
El exceso de hierro se depositaintracelularmente como ferritina yhemosiderina,
fundamentalmente en el SER del bazo, el hígado y la médula ósea. Cadamolécula
de ferritina puede contener hasta4500 átomos de hierro, aunque normalmente tiene
alrededor de 2500, almacenados comocristales de hidróxido fosfato
férrico[(FeOOH8). FeO. PO3H2].La molécula de apoferritina es unheteropolímero
de 24 subunidades de 2 tiposdiferentes: L y H, con un peso molecular de20 kDa
cada una, formadas por 4 cadenashelicoidales. Las variaciones en elcontenido de
subunidades que componenla molécula determinan la existencia dediferentes
isoferritinas, las que se dividenen 2 grandes grupos: isoferritinas ácidas(ricas en
cadenas H) localizadas en elcorazón, los glóbulos rojos, los linfocitos ylos
monocitos, y las isoferritinas básicas(ricas en cadenas L) predominantes en
elhígado, el bazo, la placenta y losgranulocitos.Las subunidades se organizan entre
síde manera tal que forman una estructuraesférica que rodea a los cristales dehierro.
Esta cubierta proteica posee en suentramado 6 poros de carácter hidrofílico
ytamaño suficiente para permitir el paso demonosacáridos,
flavinmononucleótidos,ácido ascórbico o desferroxamina. Seplantea que estos
poros tienen una funcióncatalizadora para la síntesis de los cristalesde hierro y su
incorporación al interior de lamolécula de ferritina.La función fundamental de la
ferritinaes garantizar el depósito intracelular dehierro para su posterior utilización
en lasíntesis de las proteínas y enzimas. Esteproceso implica la unión del hierro
dentrode los canales de la cubierta proteica,seguido por la entrada y formación de
unnúcleo de hierro en el centro de la molécula.Una vez formado un pequeño núcleo
dehierro sobre su superficie, puede ocurrir laoxidación de los restantes átomos del
metala medida que se incorporan.Se han observado diferencias entre lavelocidad de
7

8. captación de hierro por lasdiferentes isoferritinas; así las isoferritinasricas en
cadenas H tienen una mayorvelocidad de captación y se ha demostradoque ésta es
precisamente la función de estetipo de subunidad. No obstante, lascadenas H y L
cooperan en la captación delhierro, las subunidades H promueven laoxidación del
hierro y las L, la formación delnúcleo. Tanto el depósito de hierro comosu
liberación a la circulación son muyrápidos, e interviene en este último procesoel
flavinmononucleótido. El hierro esliberado en forma ferrosa y convertido enférrico
por la ceruloplasmina plasmática,para que sea captado por la transferrina quelo
transporta y distribuye al resto delorganismo.La hemosiderina está
químicamenteemparentada con la ferritina, de la que sediferencia por su
insolubilidad en agua.Aunque ambas proteínas son inmunológicamenteidénticas, la
hemosiderinacontiene un por ciento mayor de hierro(30 %) y en la microscopia se
observa comoagregados de moléculas de ferritina conuna conformación diferente
de los cristales de hierro. El volumen de las reservas de hierro esmuy variable, pero
generalmente seconsidera que un hombre adulto normal tiene entre 500 y 1500 mg
y una mujer entre300 y 1000 mg, aunque estos valoresdependen grandemente del
estado nutricionaldel individuo.
REGULACIÓN DE LA CAPTACIÓN Y ALMACENAMIENTO DE
HIERRO
La vía fundamental de captación celularde hierro es la unión y
subsecuenteinternalización de la transferrina cargadacon hierro por su receptor. La
cantidad dehierro que penetra a la célula por esta víaestá relacionada con el número
dereceptores de transferrina presentes en lasuperficie celular. Una vez dentro, el
hierroes utilizado para sus múltiples funciones oalmacenado en forma de ferritina
ohemosiderina. Por lo tanto, cuando lasnecesidades de hierro de la célula
aumentan,se produce un incremento en la síntesis dereceptores de transferrina y, en
el casocontrario, cuando hay un exceso de hierro,ocurre un aumento de la síntesis
de ferritina.Esto se logra mediante un estricto sistemade control al nivel
postranscripcional.Tanto la expresión del receptor detransferrina como de la
ferritina sonreguladas en función de la disponibilidad ydemanda de hierro para
asegurar lahomeostasia celular. En esta regulación estáimplicada una proteína
citosólica deaproximadamente 98 kDa de peso molecular,altamente conservada a lo
largo de laevolución, conocida como factorregulador de hierro (IRF) o proteína
deunión al elemento de respuesta al hierroLa vía fundamental de captación
celularde hierro es la unión y subsecuenteinternalización de la transferrina
cargadacon hierro por su receptor. La cantidad dehierro que penetra a la célula por
esta víaestá relacionada con el número dereceptores de transferrina presentes en
lasuperficie celular. Una vez dentro, el hierroes utilizado para sus múltiples
funciones oalmacenado en forma de ferritina ohemosiderina. Por lo tanto, cuando
lasnecesidades de hierro de la célula aumentan,se produce un incremento en la
síntesis dereceptores de transferrina y, en el casocontrario, cuando hay un exceso de
hierro,ocurre un aumento de la síntesis de ferritina.Esto se logra mediante un
estricto sistemade control al nivel postranscripcional. Tanto la expresión del
8

9. receptor detransferrina como de la ferritina sonreguladas en función de la
disponibilidad ydemanda de hierro para asegurar lahomeostasia celular. En esta
regulación estáimplicada una proteína citosólica deaproximadamente 98 kDa de
peso molecular,altamente conservada a lo largo de laevolución, conocida como
factorregulador de hierro (IRF) o proteína deunión al elemento de respuesta al
hierro
EXCRECIÓN
La capacidad de excreción de hierro delorganismo es muy limitada. Las
pérdidasdiarias de hierro son de 0,9-1,5 mg/día(0,013 mg/kg/día) en los hombres
adultos.De éstos, 0,35 mg se pierden en la materiafecal, 0,10 mg a través de la
mucosaintestinal (ferritina), 0,20 mg en la bilis,0,08 mg por vía urinaria y 0,20 mg
pordecamación cutánea.Las mujeres en edad fértil estánexpuestas a una depleción
adicional dehierro a través de las pérdidas menstrualesque incrementan los niveles
de excrecióndiarios a 1,6 mg/día como mínimo.Los cambios en los depósitos de
hierrodel organismo provocan variacioneslimitadas en la excreción de hierro, que
vandesde 0,5 mg/día en la deficiencia de hierroa 1,5 mg/día en individuos con
sobrecargade hierro. Aunque hay pocos estudios enlactantes y niños, se plantea que
en éstoslas pérdidas gastrointestinales pueden sermayores que en los adultos.
Algunosinvestigadores plantean que las pérdidaspromedio son de aproximadamente
2 mg/díaen los lactantes y de 5 mg/día en los niños de6 a 11 años de edad. Otras
causasimportantes de pérdidas son las donacionesde sangre y la infestación por
parásitos.
DEFICIT DE HIERRO
El déficit de hierro se produce cuando la cantidad total de hierro del organismo está
por debajo de los límites normales. Si la deficiencia de hierro persiste aparece el
cuadro de anemia ferropénica, donde la producción de eritrocitos está limitada por
la disponibilidad de hierro en el plasma. Una las causas más importantes de déficit
de hierro es por la pérdida de sangre en el tracto gastrointestinal, tracto
genitourinario y tracto respiratorio. En las mujeres es muy frecuente la anemia
ferropénica debido a menstruaciones abundantes o frecuentes (menorragia) y
abortos consecutivos. Tras una hemorragia rápida, el organismo sustituye la
porción líquida del plasma en 1 a 3 días, pero esto deja una concentración baja de
eritrocitos. Si no se produce una segunda hemorragia la concentración de eritrocitos
suele normalizarse en una a tres semanas. En las perdidas continuas de sangre, una
persona no puede absorber con frecuencia hierro por los intestinos como para
formar hemoglobina tan rápidamente como la pierde. Entonces los eritrocitos se
producen mucho más pequeño de lo normal y tienen muy poca hemoglobina
dentro, lo que da lugar a una anemia hipocrómicamicrocítica.
9

10. ANTECEDENTES
Martínez (2001) indica que las lesiones de sangrado gastrointestinal
crónico en el tramo alto del aparato digestivo es un causante de anemia
ferropénica.
Hasan Basari (2010) indica que el tratamiento terapéutico de flebotomía
aplicado durante 8 semanas a un paciente ingresado al Hospital general
de Massachusetts por un cuadro de eritrocitosis e isuficiencia renal
aguda, disminuyó el hematocrito un 10 % aproximadamente.
10

11. IV. MATERIAL Y METODOS
4.1.MATERIAL
4.1.1. Material biológico: Muestra de sangre de Cavia porcellus.
4.1.2. Material de Laboratorio
Gradilla para tubos de ensayo
Reactivos de Drabkin (Valtek)
Micropipetas
Suero fisiológico
Vacutainer con EDTA
4.1.3. Material de vidrio
Tubos capilares heparinizados
Tubos de ensayo
Pipetas
Pipeta de Thoma para glóbulos rojos con su respectiva sonda de
absorción.
Cámara de Neubauer con cubrecámara.
4.1.4. Equipos
Equipo de disección
Espectrofotómetro
Balanza
Microcentrífuga
4.1.5. Otros
Plastilina
Ábaco de lectura de microhematocrito
Guantes quirúrgicos
Algodón
Alcohol yodado
Jaulas
Cortauñas
Alimento para Cavia porcellus
11

12. 4.2.METODOLOGIA
4.2.1. Metodología de campo.
El presente trabajo se realizó en los meses de Octubre a Diciembre del
2011 en el laboratorio de Fisiología Animal de la Escuela Profesional y
Académica de Biología en la Universidad Nacional de San Agustín.
Primero se realizó la selección del material biológico, Cavia porcellus,
3 hembras tomando en cuenta el peso corporal de los especímenes,
luego estos serán distribuidos en jaulas de acuerdo a los tratamientos a
aplicar. Los sujetos de estudio fueron alimentados con zanahorias y
otros restos vegetales, evitándose suministrar alfalfadurante el tiempo
que duró el trabajo de experimentación.
SUJETO DE
TRATAMIENTOS
PRUEBA
Control 1
Extracción 1.5ml de sangre 1
Extracción 3 ml de sangre 1
3
La extracción de sangre se realizó mediante sangrado de la vena
metatarsal. Se calentó la pata del espécimen con agua tibia. Luego se
procedió a afeitar el pelo del animal para evitar la contaminación o
mezcla de la muestra a obtener. Luego se tomo una de las patas
posteriores y con ayuda de un cortaúñas se cortó una de las garras o
uñas, de preferencia la garra central y se ordeño la pata hasta observarse
gotas de sangre.
La muestra de sangre se colecto en tubos vacutainer con anticoagulante
EDTA y se llevo al laboratorio de Fisiología Animal de la escuela de
Biología para su posterior análisis.
Volumen de extracción
Como orientación aproximativa, hasta un 10% del volumen de sangre
circulante puede ser extraído en una sola ocasión de animales
normalmente sanos y bien nutridos con efectos adversos mínimos. Este
volumen puede repetirse después de 3-4 semanas. Para sangrados
continuos puede extraerse cada 24 horas. El volumen sanguíneo
circulante puede generalmente estimarse en 67-92 ml/kg de peso
corporal. Sin embargo, hay que tener cuidado con estos cálculos ya que
el porcentaje de sangre circulante será algo más bajo (-15%) en obesos
y animales viejos.
12

13. Tabla Nº 1. Distribución de los individuos en los tratamientos, con sus
respectivos volúmenes circulantes y volumen de extracción.
Tratamiento 1 (Control) Tratamiento 2 Tratamiento 3
Peso: 450g Peso: 390g Peso:400g
Sexo: hembra Sexo: hembra Sexo: hembra
Vol. Sangre: 35.77 ml Vol. Sangre: 31.00 ml Vol. Sangre: 31.8 ml
Volumen extracción: 3.57ml Volumen extracción: 3.1ml Volumen extracción: 3.2ml
Volumen a extraer: 1.0 ml Volumen a extraer: 1.5 ml Volumen a extraer: 3 ml
Intervalo extracción: cada 2 días. Cada 2 días Cada 2 días
Duración 10 días 10 días 10 días
4.2.2. Metodología de laboratorio.
4.2.2.1. Determinación del hematocrito.
Viene a ser la determinación del volumen de masa sanguínea
eritrocitaria expresada en porcentaje, de acuerdo al volumen de
sangre total que existe en una muestra.
a) Técnica del microhematocrito.
Fundamento: La determinación del microhematocrito se
fundamenta en el uso de tubos capilares de 7 cm. De largo por 1
mm. de diámetro interior, los cuales pueden ser heparinizados.
Esta técnica es rápida y consiste en separar los eritrocitos del
plasma por centrifugación, obteniéndose hematíes aglomerados,
los cuales son medidos en micro escalas o con una regla
milimetrada.
b) Procedimiento
Llenar el tubo capilar heparinizado con la muestra de
sangre hasta las ¾ partes de la extensión del capilar y el
llenado se hará por capilaridad.
Una vez lleno el capilar, sellar uno de los extremos del
capilar con plastilina, esto con la finalidad de que al
momento de la centrifugación no salga la sangre por
cualquiera de los extremos.
Colocar el capilar en una microcentrifuga a una velocidad
de 5000 r.p.m. por 10 minutos.
13

14. c) Lectura.
Se coloca el capilar centrifugado sobre la escala para
microhematocrito, haciendo que la base de la columna de
eritrocitos (sobre el límite superior de la plastilina) coincida con
la línea inferior de la cartilla; y de manera similar que el tope de
la columna de plasma coincida con la línea superior de, es decir,
que el fondo de la columna de eritrocitos y el tope superior de la
columna de plasma coincida al mismo tiempo con las líneas
inferior y superior de la cartilla. La lectura entonces se realiza
tomando como valor de la lectura el tope superior de la columna
de eritrocitos.
4.2.2.2. Recuento de eritrocitos. Método de Thoma
Viene a ser la determinación del número de eritrocitos por milímetro
cúbico.
Fundamento: Se fundamenta en el uso de la pipeta de Thoma para
glóbulos rojos, la cual viene calibrada para diluir la muestra de
sangre en dilución de 1 en 200 ó 1 en 20. Para ello se utilizó como
solución diluyente suero fisiológico (NaCl al 0,9%).
Procedimiento:
Obtener la sangre hasta la marca de 0.5 en la pipeta para
dilución de eritrocitos (cuenta roja, bulbo mayor, 101 en el
extremo superior).
Aspirar el líquido para dilución de eritrocitos (suero
fisiológico) hasta la marca de 101. Se gira la punta sobre su
eje longitudinal para asegurar una mezcla total entre la sangre
y el diluyente.
Descartar tres o cuatro primeras gotas de sangre diluida y con
cuidado llenar la cámara de Neubauer por capilaridad
colocando la punta de la pipeta en uno de los extremos del
cubreobjetos.
Contar las células que se encuentren en los cuadrados
marcados A-B-C-D-E (Ver anexo)
Para calcular el número total de eritrocitos se aplica:
4.2.2.3. Determinación de Hemoglobina. Método de Drabkin
Fundamento: La hemoglobina (Hb) presente en la muestra, en
presencia de ferricianuro, se oxida a metahemoglobina, que a su vez
se combina con iones cianuro a pH 7.2 convirtiéndose en
cianometahemoglobina. Todos los hemocromógenos, a excepción de
14

15. sulfohemoglobina, reaccionan completamente en 3 minutos y la
lectura se efectúa a 540 nm.
Procedimiento:
Se toma tres tubos de ensayo y se procede de la siguiente forma:
BLANCO MUESTRA PATRÓN
Rvo. Hemoglobina 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml
Sangre total 0.01ml
Patrón 0.01ml
Agitar bien, Dejar 3 minutos en baño maría 37ºC y luego medir la
abosrbancia de la muestra a 540 nm llevando el espectrofotómetro a
cero con el blanco reactivo. Obtener el valor en g/dl utilizando la
calibración (factor) preparada con el patrón de hemoglobina.
Factor: 36.44
Hemoglobina (g/dl)= Factor X Abs. Muestra
4.2.2.4. Volúmenes corpusculares
a) Volumen corpuscular medio (VCM).
Permite calcular el volumen promedio de los hematíes. Se aplica
la siguiente fórmula:
b) Hemoglobina corpuscular media
Permite determinar la cantidad de hemoglobina contenida en
cada hematíe. Se calcula mediante la siguiente formula:
c) Concentración hemoglobina corpuscular media (CHCM)
Expresa la concentración porcentual de hemoglobina en cada
hematíe.
15

16. A B
C D
E F
Lámina Nº 1. A) Colecta de la muestra de sangre. B) Evaluacion de hemoglobina por
método de Drabkin. C) Microcentrífuga para hematocrito. D) Evaluación del hematocrito.
E) Cámara de Neubauer y pipeta de Thoma para conteo de eritrocitos. F) Recuento
eritrocitario al microscopio óptico
16

17. V. RESULTADOS
Tabla Nº 2 Valores hematológicos de hemoglobina (HB), hematocrito (HTO),
recuento eritrocitario (R.E.), Volumen Corpuscular Medio (VCM),
Hemoglobina Corpuscular Media (HCM), Concentración Hemoglobina
Corpuscular media (CHCM)por tratamiento de Flebotomía aplicado a Cavia
porcellus
Colecta TRATAMIENTO HB HTO R.E. VCM HCM CHCM
muestra
Tratamiento 1 (1ml) 15,3048 38 4,6 82,6086957 33,2713043 40,2757895
Primera
Tratamiento 2 (1.5 ml) 11,80656 38 4,4 86,3636364 26,8330909 31,0698947
colecta
Tratamiento 3 (3 ml) 7,79816 32 4,4 72,7272727 17,7230909 24,36925
Tratamiento 1 (1ml) 10,16676 44 5,7 77,1929825 17,8364211 23,1062727
Segunda
Tratamiento 2 (1.5 ml) 7,25156 40 5,4 74,0740741 13,4288148 18,1289
colecta
Tratamiento 3 (3 ml) 8,27188 32 4,3 74,4186047 19,2369302 25,849625
Tratamiento 1 (1ml) 15,3048 44 4,6 95,6521739 33,2713043 34,7836364
Tercera
Tratamiento 2 (1.5 ml) 11,98876 36 5,75 62,6086957 20,8500174 33,3021111
colecta
Tratamiento 3 (3 ml) 11,77012 29 4,7 61,7021277 25,0428085 40,5866207
Tratamiento 1 (1ml) 10,16676 45 5,7 78,9473684 17,8364211 22,5928
Cuarta
Tratamiento 2 (1.5 ml) 11,80656 38 4,4 86,3636364 26,8330909 31,0698947
colecta
Tratamiento 3 (3 ml) 6,23124 32 4,3 74.4186047 19,472625 19,472625
Interpretación: Se observa que los tratamientos 2 y 3 presentan disminución en los
valores evaluados de Hemoglobina, Hematocrito, Volumen corpuscular medio y
Hemoglobina corpuscular media para cada colecta de muestra de sangre respecto al
tratamiento 1 (Control), observándose en el tratamiento 3 la mayor disminución de
los valores hematológicos de Hemoglobina y Hematocrito respecto al control,
siendo este tratamiento el más efectivo.
17

18. Valor promedio de Hb por tratamiento
14
12.73578
12
10.71336
10
8.51785
8 Tratamiento 1
6 Tratamiento 2
4 Tratamiento 3
2
0
Total
Figura Nº 1. Representación de los valores promedio de hemoglobina para cada
tratamiento. Se observa la disminución del valor de hemoglobina para los
tratamientos 2 y 3 respecto al Tratamiento 1 (Control)
Valor promedio de Hto por tratamiento
45 42.75
40 38
35 31.25
30
25 Tratamiento 1
20 Tratamiento 2
15
Tratamiento 3
10
5
0
Total
Figura Nº 2. Representación de los valores promedio de hematocrito para cada
tratamiento. Se observa la disminución del valor de hematocrito para los
tratamientos 2 y 3 respecto al Tratamiento 1 (Control)
18

19. Valor promedio de VCM por
tratamiento
85 83.60030511
80 77.35251061
75 Tratamiento 1
70.39381944
70 Tratamiento 2
Tratamiento 3
65
60
Total
Figura Nº 3. Representación de los valores promedio de Volumen corpuscular
medio para cada tratamiento. Se observa la disminución del valor de VCM para los
tratamientos 2 y 3 respecto al Tratamiento 1 (Control)
Valor promedio de HCM por tratamiento
30
25.5538627
25 21.98625351
19.04118469
20
Tratamiento 1
15
Tratamiento 2
10
Tratamiento 3
5
0
Total
Figura Nº 4. Representación de los valores promedio de hemoglobina corpuscular
media para cada tratamiento. Se observa la disminución del valor de HCM para los
tratamientos 2 y 3 respecto al Tratamiento 1 (Control)
19

20. VI. DISCUSIÓN
En la alteración del metabolismo del hierro se presenta de forma gradual,
describiéndose tres etapas. La primera es denominada empobrecimiento de
hierro observándose una disminución de en los niveles séricos de ferritina.
La segunda etapa es conocida como eritropoyesis deficiente en hierro donde
se observa un agotamiento total de las reservas corporales de hierro y una
disminución en la concentración de hierro circulante que esta unido a la
transferritina. En la tercera etapa, conocida como anemia ferropénica se
observa un incremento en la concentración de hemoglobina, hematocrito
además de alteraciones morfológicas en los eritrocitos como la hipocromía
y la microcitosis. El presenta trabajo muestra una disminución en los
valores de hemoglobina, hematocrito, VCM y HCM para los tratamientos
aplicados, observándose una disminución notable en los valores donde se
aplicó el tratamiento 3, pudiendo indicar que se produjo una disminución de
los valores de hierro, similar a los que se manifiesta en la anemia
ferropénica.
La flebotomía terapéutica se aplica con la finalidad de curar una
enfermedad derivada del exceso de glóbulos rojos (poliglobulia) o del
exceso de ferritina o hierro en la sangre (Hemocromatosis). La flebotomía
aplicada a un paciente con eritrocitosis, insuficiencia renal aguda y
colección de líquido perirrenal por un lapso de 6 a 8 semanas, disminuyó los
valores del hematocrito de un 58.1% a 45%, manteniéndose éste último al
aplicar la flebotomía cada 12 semanas. En el presenta trabajo, la flebotómia
aplicada a Cavia porcelluslogró una disminución significativa del valor de
hematocritoen los tratamientos aplicados respecto al control, siendo el
tratamiento 3 el de mayor efecto en la disminución del hematocrito, así
como disminución de la hemoglobina.
20

21. VII. CONCLUSIONES
La flebotomía continua aplicada aCavia porcellusprovocó disminución de
los valores hematológicos de hemoglobina.
La flebotomía continua aplicada aCavia porcellusprovocó disminución de
los valores hematológicos de hematocrito.
La flebotomía continua aplicada aCavia porcellusprovocó disminución de
los valores hematológicos del Volumen corpuscular medio.
La flebotomía continua aplicada aCavia porcellusprovocó disminución de
los valores hematológicos de Hemoglobina Corpuscular media.
La flebotomía continua aplicada a Cavia porcellus provocó déficit de los
valores hematológicos de hierro.
21

22. VIII. RECOMENDACIONES
Se recomienda trabajar con más unidades experimentales por tratamiento
para poder aplicar un análisis estadístico y obtener diferencias
significativas para los tratamientos aplicados.
Se recomienda aplicar otros métodos más efectivos de extracción de sangre
para animales, puesto que el método de extracción de la vena metatarsal de
Cavia porcelluses un procedimiento lento, observándose en algunos casos
una rápida coagulación por lo que se tuvo que realizar el corte en más garras
de la pata posterior.
Para la colección de la muestra, se recomienda usar vacutainer que contenga
preservante especial pues, en caso que no se pueda evaluar la muestra
inmediatamente a su recolección, esta no sufra alteraciones que pueda
modificar los parámetros que se evaluarán.
22

23. IX. BIBLIOGRAFÍA
Forrellat M., Gautier H., Fernandez N. “Metabolismo del hierro” Artículo
de Revisión Instituto de Hematología e Inmunología, 2000, pp. 149-160.
García B., Rubio F., Carrasco M. 2003 “Hematología I. Citología,
Fisiología y Patología de Hematíes y Leucocitos”. Tercera Edición.
Guyton A., Hall, J.2009 “Tratado de Fisiología Medica” Décimo Primera
Edición. Ed. Latinoamericana.
HasanBazari, M.D., Eyal C. Attar, M.D., Douglas M. Dahl, M.D., Case 23-
2010: A 49-Year-Old Man with Erythrocytosis, Perinephric
FluidCollections, and Renal Failure Raul N. Uppot, M.D., and Robert B.
Colvin, M.D. The New England Journal of Medicine.
Martínez C., Gonzales A. Domínguez M., Fernández J. Lorenzo V.
“Patología digestiva alta en pacientes de edad avanzada con anemia
ferropénica: comparación entre usuarios y no usuarios de anti-inflamatorios
no esteroideos” AN.MED. INTERNA (Madrid)Vol. 18, N.º 7, pp. 357-360,
2001.
Paginas Web
http://resources.metapress.com/pdf-
preview.axd?code=x4k111207728t0n5&size=largest
http://www.lar.iastate.edu/index.php?option=com_content&view=article&id=96&Itemi
d=121
http://netvet.wustl.edu/species/guinea/guinpig.txt
http://www.carloshaya.net/uchematologia/media/orientacion_diagnostica_hematologi
a_primaria.pdf
23

24. X. ANEXOS
Promedio de Hemoglobina por cada
muestra
18
16
14
12
10 Tratamiento 1
8
6 Tratamiento 2
4
Tratamiento 3
2
0
Promedio de Promedio de Promedio de Promedio de
Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4
Figura Nº 5. Representación de los promedio de hemoglobina para cada muestra colectada.
Se observa en la mayoría de toma de datos que el tratamiento 3 muestra menor rango o
valor respecto al tratamiento 1 (Control)
Promedio de hematocrito por cada muestra
50 44 44 45
38 38 40 38
40 36
32 32 32
29
30
Tratamiento 1
20
Tratamiento 2
10 Tratamiento 3
0
Promedio de Promedio de Promedio de Promedio de
Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4
Figura Nº 6. Representación de los promedios de hematocrito para cada muestra colectada.
Se observa en la todas las toma de muestra que el tratamiento 3 presenta menor rango o
valor respecto al tratamiento 1 (Control)
24

25. Promedio de VCM por cada muestra
120
100
80
60 Tratamiento 1
40 Tratamiento 2
Tratamiento 3
20
0
Promedio de Promedio de Promedio de Promedio de
Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4
Figura Nº 7. Representación de los promedio de volumen corpuscular medio para cada
muestra colectada. Se observa en la mayoría de toma de datos que el tratamiento 3 muestra
menor rango o valor respecto al tratamiento 1 (Control)
Promedio de HCM por cada muestra
35
30
25
20
Tratamiento 1
15
Tratamiento 2
10
5 Tratamiento 3
0
Promedio de Promedio de Promedio de Promedio de
Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4
Figura Nº 8. Representación de los promedio de hemoglobina corpuscular media para cada
muestra colectada. Se observa en la mayoría de toma de datos que el tratamiento 3 muestra
menor rango o valor respecto al tratamiento 1 (Control)
25