trabajo en base a un trabajo de laboratorio de aislamiento de microorganismo

1. INFORME AISLAMIENTO E
IDENTIFICACIÓN DE
MICROORGANISMOS
Cancela, María Belén

2. INTRODUCCIÓN
Se buscó aislar coliformes, principalmente Escherichia coli, a partir de
una muestra de agua.
La búsqueda incluía también a otros coliformes que pudieran estar
presentes. Este grupo contempla bacterias entéricas.

3. Las características generales de este grupo son:
- Gram negativos.
- No formadores de esporas.
- Aerobios o anaerobios facultativos.
- La mayoría fermentadores de lactosa con producción de
ácido y gas.

4. ¿Por qué se utiliza el agua como muestra?
Las bacterias coliformes se encuentra comúnmente en el agua. La
presencia de coliformes se debe a que el agua estuvo en contacto con
heces.
Se esperaba que la muestra de agua contenga baja carga microbiana y
cierta diversidad.
Las muestras utilizadas provienen de agua de pozo y agua de zanja.

7. Primer día
Con ambas muestras de agua, se realizaron dos procesos:
● Se filtraron 100 ml→ El filtro fue colocado en un agar
EMB.
● Se tomaron 100 ul → Se rastrillaron en EMB agar y
MacConkey agar con la utilización de la espátula de
Drigalsky.

8. Resultados del primer día:
● Agar EMB con filtro (agua de pozo)
● Agar EMB con filtro (agua de zanja)
● Agar MacConkey + 100 ul directos de la muestra.
(agua de pozo)
● Agar MacConkey + 100 ul directos de la muestra.
(agua de zanja)
● Agar EMB + 100 ul directos de la muestra. (agua
de pozo)
● Agar EMB + 100 ul directos de la muestra. (agua
de zanja)
Sólo en este medio se
observaron colonias
correspondientes a
fermentadores de lactosa.

9. Segundo día:
● Se observó detenidamente la morfología que presentan las colonias
en los medios.
Sobre las pequeñas colonias negras correspondientes a fermentadores
de lactosa se realizó:
● Una serie de pruebas básicas para verificar su género y presunta
especie bacteriana: Se efectuaron las pruebas bioquímicas de
catalasa y oxidasa.

10. ● Tinción de gram: reacción de Gram y morfología de las bacterias.
● Siembra por agotamiento por estrías para obtener colonias
aisladas y poder realizar las pruebas bioquímicas pertinentes para
la identificación del microorganismo

11. Resultados del segundo día:
-MORFOLOGÍA POR TINCIÓN DE GRAM: Se observó al microscopio obteniéndose como resultado
colonias gram negativas (ya que se tiñeron de rosa), con una morfología presuntamente correspondiente a
enterobacterias como se buscaba ya que eran colonias bacilos sin una agrupación específica.
PRUEBAS BIOQUÍMICAS INICIALES:
-CATALASA: POSITIVO
-OXIDASA: NEGATIVO
- No se logró obtener colonias aisladas en el agar EMB.

12. Tercer día:
DESVIACIÓN DEL PROTOCOLO INICIAL

13. Resultados tercer día:
PRUEBAS BIOQUÍMICAS:
CATALASA: NEGATIVO
OXIDASA : NEGATIVO
Tinción de gram: Las bacterias tenían una morfología que no se correspondía con la familia que
buscábamos, eran bacilos gram positivos agrupados en cadenas y con una posible formación de
esporas.
Se trabajó con la muestra del otro grupo de carne que también buscaban Coliformes y que habían
obtenido resultados acordes a lo esperado:
CATALASA: NEGATIVA
OXIDASA: NEGATIVA
Tinción de Gram: Bacterias Gram negativas, sin agrupación específica con forma de bacilos.

14. Cuarto día:
Se realizaron las pruebas bioquímicas en caldo de:
-Glucosa -Arabinosa -Maltosa
-Sacarosa -Xilosa -Gelatina
-Ribosa -Lactosa -Ureasa
-TSI -Citrato -Nitrato
-RM/VP
Y el test multiprueba: API 20E
Nota: las pruebas en color rojo necesitan un revelado posterior a la incubación

15. Resultados pruebas bioquímicas:
Tubos:
● Sacarosa, Glucosa, Arabinosa, Ribosa, Xilosa → Positiva (medio amarillo)
● Lactosa → Negativa (medio rojo)
● Maltosa → No presentó crecimiento.
● TSI → Ácido-ácido con producción de gas (amarillo-amarillo)
● Citrato → Positiva (pico de flauta azul).
● Gelatina y Ureasa → No presentó crecimiento.
● RM → Positiva
● VP→ Positiva
● Nitrato → Positiva

16. Tubo de ensayo de
Nitrato
Tubo de ensayo
de TSI

17. API 20 E (RESULTADOS)
ONPG: + H2S: - GEL: + RHA: +
ADH: - URE: - GLU: + SAC: +
LDC: + TDA: - MAN:+ MEL: +
ODC: + IND: - INO: + AMY: +
CIT: + VP: + SOR: + ARA: +

19. Conclusión:
● No arribamos al objetivo ya que el microorganismo
identificado pertenece a la carne y no al agua.
● Según los resultados obtenidos con el test multiprueba API 20
E, se obtuvo el número 5 307 773 que corresponde a un
microorganismo perteneciente al género Serratia.

20. ● Dentro de dicho género contamos con dos especies posibles:
Serratia odorifera o Serratia liquefaciens.
● Pruebas claves para la elección de especie:
■ Ser. odorifera → Indol 99%
■ Ser. liquefaciens → RHA 2%
● Al dar negativa la prueba de indol y positiva la prueba de
ramnosa se trata de la especie Ser. liquefaciens con un 2%
de certeza.

21. Género Serratia:
● En dicho género hay 9 especies, dentro de ellas Ser.
odorifera y Ser. liquefaciens.
● Son bacilos móviles gram negativos.
● Son aerobios o anaerobios facultativos.

22. ● Se encuentran en alimentos, suelos, aguas
estancadas, en animales y en vegetales.
● En el caso de encontrarse en animales, habitan en el
intestino pero no producen patología. Sin embargo,
pueden afectar a otros tejidos en los que producen
inflamación purulenta.

24. MUCHAS GRACIAS
POR SU ATENCIÓN
Cancela, María Belén
mbcancela@unq.com.ar