En esta practica, cultivamos con muestras de agua de la llave para identificar sus bacterias, y hacer su conteo

1. CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓ GICO INDUSTRIAL Y DE
SERVICIOS. N.128
Practica 4: Dilución bacteriana, NMP y Cultivo Puro.
Sub-módulo 3: Ejecuta técnicas de identificación de Microorganismos con base a
las normas.
Integrantes. Barrón Arredondo Evelin, Batres Arias Viviana, Bernal Loera Alejandro, Cardona
Barbosa Adriana Fernanda, Cervantes de la Cruz Ángel, Chávez Castorena Edna Paola, Chávez
Ortega Miriam Vanessa, González Gómez Cynthia Judith.
Facilitadora: Ing. Acosta Bezada Jessica Alicia.
Introducción.
El método del número más probable es una
estrategia eficiente de estimación de
densidades poblacionales especialmente
cuando una evaluación cuantitativa de células
individuales no es factible.
La técnica se basa en la determinación de
presencia o ausencia (positivas o negativas)
en réplicas de diluciones consecutivas de
atributos particulares de microorganismos
presentes en muestras de suelo u otros
ambientes.
Por lo tanto, un requisito importante de este
método es la necesidad de poder reconocer un
atributo particular de la población(es) en el
medio de crecimiento a utilizarse. El estimado
de densidad poblacional se obtiene del patrón
de ocurrencia de ese atributo en diluciones
seriadas y el uso de una tabla probabilística.
Mediante el uso de esta técnica de simple
ejecución y fácil interpretación, se pueden
evaluar di ferentes grupos bacterianos según el
medio de cultivo que contenga el frasco.
Es aplicable para evaluar bacterias
heterotróficas, aerobias totales (BAT),
bacterias reductoras de sulfato (BRS),
anaerobias heterotróficas totales (BAnT), etc.
Esta técnica está recomendada por el Instituto
Americano del Petróleo (API) para evaluar
calidad biológica en aguas de inyección en
recuperación secundaria y también es
ampliamente usada en evaluación de
problemas microbiológicos en aguas de
refrigeración.
Resumen.
En esta práctica se vieron procedimientos que
con los que anteriormente ya se habían
trabajado, como lo son los medios de cultivo, y
todos los métodos que estos conllevan en su
elaboración e identificación. Además
trabajamos con la dilución bacteriana que es
prácticamente la concentración mínima
bacteriana (CMB). También el numero mas
probable (NMP) esta es una estrategia
eficiente de estimación de densidades
poblacionales bacteriológica especialmente
cuando una evaluación cuantitativa de células
individuales nos es factible. Y por ultimo el
cultivo puro que son básicamente aquellos en
los cuales solo contiene un tipo de
microorganismos.
Se analizo detalladamente cada parte de cada
paso y se busco la mejor manera de realizar el
método para obtener un mejor resultado.
Abstract.
In this practice the procedures that previously
had worked, such as culture media and all
methods they pose in their preparation and
identi fication were. We also work with bacterial
dilution is practically the minimum bacterial
concentration (MBC). Also the most probable
number (MPN) this is an efficient strategy for
estimating bacterial densities especially when
a quantitative evaluation of single cells is
feasible to us. And finally the pure culture are
basically those in which only contains one type
of microorganisms.
Each part of each step was analyzed in detail
and look for the best way to perform the
method for best results.
Materiales y Reactivos.
• 14 cajas Petri.
• 14 tubos de ensaye.
• Matraz E.M.
• Balanza.
• Mangueras de látex.

2. • Asas de platino.
• Espátula.
• Vidrio de reloj.
• Capsula de porcelana.
• Gradilla.
• Microscopio.
• Cubreobjetos.
• Portaobjetos.
• Mechero bunsen.
• Guante de asbesto.
• Autoclave.
• Agar nutritivo.
• Caldo Nutritivo.
• 2 Muestras de agua de la llave.
• Alcohol cetona.
• Yodo.
• Alcohol.
• Lugol.
• Cristal violeta.
• Aceite.
Procedimiento. (Métodos)
1) Se piden todos los materiales, y luego se
hacen las conversiones para calcular lo que se
necesita de cada agar.
2) De una vez las conversiones hechas, se
pesa lo necesario de cada agar, para después
mezclarlos con el agua en un matraz, y
ponerlos al mechero, en constant e movimiento
hasta que el agar quede listo.
3) En autoclave Se meten a esterilizar los
medios de cultivo, y el material (Cajas petri y
tubos.)
4) De una vez las cosas esterilizadas, se
preparo todo para hacer la técnica de vaciado
de matraz a caja Pet ri y tubos de ensaye.
Teniendo listo el triangulo de seguridad que
consta de 3 mecheros al centro de la mesa, y
se procede a vaciar.
5) De una vez los medios ya preparados para
estriar, con un asa de platino, esterilizamos a
este para estriar en nuestras cajas Petri.
6) Se inoculan en las cajas las muestras de
agua, con el asa , mientras que en el tubo se
inocula con una muestra de 1ml de agua el
cual se va pasando de un tubo a otro para así
preparar la dilución.
7) De una vez estriado, se pone en la
incubadora nuestros medios ya inoculados, y
esperamos 24 horas. NOTA: los resultados
correctos son durante las primeras 24 horas.
8) Después de 24 horas, observamos las
bacterias desarrolladas y se hace la
morfología (conteo) bacteriana de nuestros
cultivos.
9) Finalmente hacemos tinción de
GRAM.
Resultados.
Como resultado de nuestra practica pudimos
observar crecimiento en ambos grupos de
cajas Petri, como ya se había mencionado en
un grupo se estrió un con un muestra de una
zona de la ciudad y el otro grupo con otra
muestra de otra zona distinta de la ciudad.
Los resultados fueron claros y contundentes,
pues en la muestra #1 hubo un crecimiento de
185 colonias de una misma bacteria. En el
caso de la muestra #2 su crecimiento fue un
poco menos pues fue tan solo un 79.45% que
en números es exactamente 147 colonias en
ese grupo.
Ver anexos 1 y 2, para cajas Petri.
Morfología en caja (ver anexo 3).
Morfología de tubos: todos tuvieron
crecimiento en la parte inferior del tubo y su
coloración se tornó amarillo turbio u pálido y su
crecimiento fue masivo.
Conclusiones.
BARRÓN ARREDONDO EVELIN.
Puedo conclui r en que la practica fue muy
interesante y de algún modo compleja, ya que
en nuestro equipo se trabajo con dos muestras
de agua diferentes por lo tanto, el trabajo en
cierta parte fue doble pues se realizaron 2
series de Vp (por serie se toma en cuenta
como 7 tubos) y 2 grupos de cajas Petri con
Agar nutritivo (por grupo de igual forma son 7).

3. Las muestras de agua se tomaron de las
tuberías de la Ciudad (Cd. Juárez Chihuahua)
el día Martes 21 de octubre del presente año,
de di ferentes partes de la ciudad, esto para
poder identificar que tan contaminadas o
limpias se encuentran estas. Con estas
muestras trabajamos todo lo que fue estriado y
la dilución en nuestros tubos. Pudimos
observar gracias a las primeras 24 horas como
las bacterias fueron creciendo y de esta forma
poder saber que tantos agentes patógenos
hay en nuestras tuberías de agua.
A partir de las muestras inoculamos en las
cajas e hicimos las diluciones en los tubos. La
practica fue en si muy laboriosa ya que las
diluciones se tenían que hacer con mucho
cuidado ya que un mililitro mas o un mililitro
menos podía causar el error de la practica.
Es de suma importancia en estos métodos
tomar en cuenta la precisión en la que se
trabaja ya que de esto parte la practica ya que
su propi o nombre lo dice: “Dilución bacteriana,
NMP Y Culti vo puro” son pequeñas cosas que
hacen la di ferencia al momento de realizar un
método de alta precisión.
BATRES ARIAS NIDIA VIVIANA.
Mi conclusión en general es la misma de las
practicas anteriores ya que en generalmente
hemos visto lo mismo pruebas bioquímicas,
agares, morfología, estriados, etc.; pero cada
día aprendemos a utilizar mejor los
instrumentos y saber cómo hacer
correctamente el procedimiento y segui rlo
paso por paso y así tenemos más certeza de
los resultados de cada practica y podemos
hablar de ellos con seguridad.
BERNAL LOERA ALEJANDRO.
A pesar de que esta práctica requería de
mucho cuidado y trabajo en equipo logramos
terminarla con resultados correctos.
La practica consistía en hacer diluciones de
agua de la llave de diferentes partes de la
ciudad de las cuales se hicieron 2 series de 7
cada una. De los cuales cada uno debería de
estriarse en una caja Petri y otra pequeña
muestra en un tubo con Vp.
Con resultado de 24 horas nos percatamos
que en algunas de las tuberías que conducen
agua hacia nuestras casas están
contaminadas con algún tipo de
microorganismo.
Es de suma importancia hacer esta practica
con mucho cuidado y paciencia ya que es
mililitro a mililitro para que en nuestro cultivo
fuera puro y solo crecieran microorganismos
deseados.
CARDONA BARBOSA ADRIANA FERNANDA.
En esta practica observamos diferentes
bacterias, las cuales vienen de diferentes
zonas de las tuberías de nuestra ciudad.
Aquí pudimos analizar lo que fue el agua, en
diferentes zonas de la ciudad, utilizando la
dilución bacteriana y cultivo puro para después
hacer la morfología de las bacterias crecientes
en nuestros medios (tubo y placas) con lo que
es el NMP (Numero Mas Probable). Para esto
tuvimos que ser muy cuidadosos, sobretodo al
momento de la dilución, pues si echábamos
mas o menos de lo que se pide, se echaría a
perder la practica. Así como también fue
importante hacer la morfología correctamente,
para así poder sacar el NMP.
Es de suma importancia ser muy cuidadosos
al estar trabajando en el laboratorio, y llevar
correctamente los procedimientos y métodos,
para obtener buenos resultados, y sobre todo
correctos.
CERVANTES DE LA CRUZ JOSE ANGEL.
Un cultivo puro, es aquel que se produce en
un medio de cultivo, con un crecimiento
uni forme y total, del mismo tipo de
microorganismos en el área: cumpliendo
ciertas características y condiciones, tales
como: Mismas colonias en tamaño y forma, sin
inhibiciones, mismo aspecto en tinciones, y
con propiedades bioquímicas y fisiológicas
idénticas.
De misma forma, el NMP es lo que llamamos
una técnica eficiente para la estimación de
densidades poblaciones, especialmente
cuando se da una evaluación del tipo
cuantitativa de células en un medio de cultivo.
Al tanto, después de la experimentación,
logramos comprobar el uso de las diluciones,
cuando, investigamos y analizamos las
muestras de las distintas zonas y sus
respectivas tuberías. Pocas veces, sabemos lo
que consumimos.
CHÁVEZ CASTORENA EDNA PAOLA
Mi conclusión es que aprendimos a como
hacer agares y que es trabajar con seres vivos
y tener cuidado con ellos, aprendimos a como
trabajar con medidas de seguridad y técnicas
de estriado trabajamos con agua del gri fo
para poder hacer nuestro estriado supimos
esterilizar y saber identi ficar nuestras

4. bacterias si son gram positivas o gram
negativas también hicimos morfología en tubo
y cultivamos en ellas estriamos e hicimos
varias muestras de cada una serie. (SOLO
PRESENTO CONCLUSION).
CHÁVEZ ORTEGA MIRIAM VANESSA.
Por conclusión es que a lo largo de todo lo que
hemos realizado anteriormente los cuales son
los medios de cultivo y sus funciones a la
elaboración e identificación, en esta práctica
realizamos disolución bacteriana, el número
más probable, como también ya anteriormente
cada cultivo tiene una función y un fin
respectivo a cada resultado esperado, a lo
largo del tiempo podemos observar y aprender
de las distintas bacterias que se nos presentan
hoy en día como ha sido una de ellas en el
impacto que tienen y no lo sabemos que lo es
el agua.
GONZÁLEZ GÓMEZ CYNTHIA JUDITH.
Con esta práctica de laboratorio se pudo
realizar el cultivo de bacterias en cajas Petri
con muestreo de agua de las tuberías de la
ciudad, (Cd. Juárez Chihuahua), que por
medio del estriado se pudo observar las
diferentes bacterias y colonias que crecieron
en ellas, de este modo se realizó la morfología
de ellas.
Por primera vez se aplicó la dilución
bacteriana en tubos de ensaye, que de
acuerdo a lo aprendido a lo largo de las
investigaciones se tenía un concepto claro de
lo que se iba a realizar en la práctica, es así
como quedo finalizada y esto me trae un
cuestionamiento a mi persona….
¿Es importante saber qué es lo que contienen
las aguas que se transportan a través de las
tuberías de la ciudad?
La respuesta a eso es positiva, ya que
estamos expuestos a millones de bacterias
diferentes que pueden causar algún daño a
nuestro organismo, por ende es importante
consumir agua que este purificada para así
asegurarnos que no contraeremos alguna
infección o daño en nuestro sistema.
Discusión.
Como fundamento de lo aprendido se pusieron
en práctica los medios de cultivo, técnicas de
tinción y la dilución bacteriana.
Se tenía un concepto claro de lo que se
realizaría en la práctica, por las
investigaciones antes realizadas en el
cuaderno de trabajo.
Se consiguió cumpli r los objetivos generales
que a través de ellos se utilizó la dilución
bacteriana para evaluar los di ferentes grupos
de bacterias según su medio de cultivo, en
este caso se hizo un muestreo de las aguas de
tubería de Cd. Juárez Chihuahua, además del
número más probable (NMP) para evaluar las
densidades poblacionales de las bacterias en
el medio de desarrollo.
Uno de los aspectos difíciles a tratar en esta
práctica fue la dilución bacteriana, pero al
lograr esto, se supo que la práctica fue todo un
éxito y que el objetivo principal se había
cumplido.
Bibliografías-APA.
Frank McCaster. (2009). El Numero mas
probable. 2014, de UPRM Sitio web:
http://www.uprm.edu/biology/profs/massol/man
ual/p4-nmpenumeracion.pdf
Microbio logia Equipo 2. (2014). Dilución
Bacteriana. 2014, de PDF Sitio web:
http://microbiologiacbtis2.infored.mx/blog_6356
93_Dilucion-bacteriana.html
Anexos
Anexo #1 muestra 1
Agar Forma Color Superficie Borde NUM.
NUTRITIVO *1 Circular Crema Plana Entero 15
NUTRITIVO *2 Circular Crema Plana Entero 61

5. NUTITIVO *3 Circular Crema Plana Entero 34
NUTRITIVO *4 Circular Crema Plana Entero 11
NUTRITIVO *5 Circular
Circular
Anexo #2 muestra 2
Crema
Amarilla
Plana
Plana
Entero
Entero
Agar Forma Color Superficie Borde NUM.
Nutritivo *1 Circular Amarillo
pálido
Plana Entero 18
Nutritivo *2 Circula Amarillo
pálido
Plana Entero 12
Nutritivo *3 Circular Amarillo Plana Entero 13
Nutritivo *4 Circular Crema Plana Entera 2
Nutritivo* 5 Circular ,
Bacilo,
bacilococcus,
Amarillo
pálido
Plana,
plana,
plana
Entera,
ondulado,
ondulado
17
1
1
Nutritivo *6 Cocobacilos
Circular
Rogosas,
Amarillo
Plana,
plana
Ondulados
promedio
entero
2
51
Nutritivo *7 Circular Amarillo
pálido
Plana Entera
ondulada
30
Anexo #3
Nombre Color Numero
Gram positiva Azul 5
Gram negativa Rosa 3
Gram positiva Azul 1
Gram negativa Rosa 7
31
3
NUTRITIVO *6 Circular Crema Plana Entero 14
NUTRITIVO *7 Crema
Naranja
Irregular
circular
Plana
Plana
Entero
Entero
14
2