aislamiento de bacterias

1. UNIVERSIDAD PRIVADA DE TACNA
FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
AISLAMIENTO DE
BACTERIAS GRAM –
(Enterobacterias)
marcos antonio alcedes rui z
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
Blga. Claudia Clavijo
Grupo II (jueves 2:30-4:10)
Por

2. 1
AISLAMIENTO DE BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
(ENTEROBACTERIAS)
OBJETIVOS
- Realizar el aislamiento de bacterias Gram –.
- Sembrar cepas bacterianas en medios específicos para enterobacterias
- Observar las características de las colonias
- Realizar coloración Gram a las cepas aisladas
- Realizar ña prueba de la catalasa para diferenciar el género enterobacterias.
FUNDAMENTO TEORICO
Enterobacterias, nombre común de una familia de bacterias Gram
negativas que reciben este nombre porque suelen encontrarse en
el intestino de los mamíferos.
Las especies que poseen flagelos son móviles; el resto, inmóviles. La
capacidad para fermentar la lactosa y el tiempo empleado en hacerlo
sirven para diferenciar los géneros y Pueden tener o no cápsulas. Nunca
forman esporas. Son algo polimórficas.
PRUEBAS BIOQUÍMICAS REALIZADAS
A ENTEROBACTERIAS
CATALASA NITRITOS
CITOCROMO OXIDASA
PRUEBA AMINO-ACIDOS
(CALDO DESCARBOXILASA
DE MOELLER)
CITRATO ROJO DE METILO(RM)
(EOSINA-AZUL METILENO)
EMB
SIM (SULFURO-INDOL-
MOTILIDAD)
HECKTOEN-ENTERICO (HE) SS (SALMONELLA SHIGELLA)
LIA ( LISINA-HIERRO) TSI (TRES AZUCARES-HIERRO)
MALONATO UREA
MAC CONKEY VOGES PROSKAUER (VP)
MOTILIDAD
XLD ( XILOSA-LISINA-
DESOXICOLATO)

3. 2
MEDIO DE CULTIVO
Un medio de cultivo consiste en un gel o una solución que cuenta con
los nutrientes necesarios para permitir (bajo condiciones favorables de
pH y temperatura) el crecimiento de virus, microorganismos, células o
incluso pequeñas plantas. Según qué se quiera hacer crecer, el medio
requerirá unas u otras condiciones. Generalmente se presentan
desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados, al
prepararse podemos encontrarlos en estado sólido, semisólido y líquido.
El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación,
multiplicación...
Medios de cultivo: Agar TSI (triple azúcar hierro), agar LIA
(lisina, hierro, agar) agar UREA, agar CITRATO DE
SIMMONS, caldo MR (rojo metilo), caldo VP (voges
proskauer), caldo FENIL ALANINA-malonato, medio SIM
(sulfuro, indol, movilidad), medio OF GLUCOSA (oxidación,
fermetación).
REALIZACIÓN PRÁCTICA
Técnicas de aislamiento. Se realiza un aislamiento de los
microorganismos presentes en un cultivo mixto en caldo ordinario, sobre
agar nutritivo. Se siembran dos placas de agar nutritivo, una mediante la
técnica del agotamiento de asa y otra mediante la de estrías escocesas.
Estas técnicas pretenden diluir la carga microbiana que se deposita sobre
el medio de cultivo de forma que, en los últimos trazos de la siembra,
haya tan pocas células que queden suficientemente separadas unas de
otras y puedan desarrollar colonias independientes.
Técnica de aislamiento y recuento: el banco de diluciones. Se
realizan una serie de diluciones seriadas a partir del cultivo mixto Con
esta técnica conseguimos además de aislar colonias, obtener un recuento
del número de bacterias que tenemos en el cultivo.
Identificación sospechosa:

4. 3
PRUEBAS BIOQUIMICAS
Las pruebas bioquímicas se basan en la determinación de la presencia o
ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material genético del
cromosoma bacteriano. Estas enzimas (catalasas, coagulasas,
decarboxilasas, deaminasas, ureasas, peroxidasas, etc) involucradas en
el metabolismo bacteriano, pueden ser evidenciadas en medios de
cultivo especiales que contienen los substratos (DNA, hidratos de
carbono, aminoácidos, etc) sobre los cuales ellas actúan, junto con un
sistema indicador que va a poner de manifiesto la degradación del
substrato o la presencia de un metabolito específico (ácido fórmico,
ácido láctico, ácido succínico, indol, etc).
Las pruebas bioquímicas también evalúan: la capacidad de reducir
ciertos iones (ferroso a férrico), la presencia o ausencia de flagelos
(prueba de movilidad), la producción o no de hemolisinas, el
requerimiento o no de algunos factores especiales (proteínas séricas), la
producción o no de algunas toxinas con capacidad virulenta (toxina
diftérica, toxina botulínica, etc).
E coli
coliforme
salmonella
• brillo
metalico
• color rojo
• color
blanco

5. 4
PRUEBA DE LA CATALASA
(goumh, s.f.)La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las
bacterias aerobias. Descompone el peróxido de hidrógeno en agua y
oxígeno.
Catalasa positivo: se produce la aparición de burbujas que corresponde
a la liberación de oxígeno, lo que indica que la bacteria tiene el enzima
catalasa.
Catalasa negativo: no se producen burbujas por tanto la bacteria no
posee dicho enzima.
Catalasa (+): Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas sp.
Catalasa (-): Streptococcus spp.
MATERIALES Y REACTIVOS
- Agar MacConkey
- Agar endo

6. 5
- Asa de kolle
- Mechero
- Set de Gram
- H2O2 (peróxido de hidrogeno o agua oxigenada)
PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE LA CATALASA
Se extrae una colonia de agar
macconkey proveniente de
una muestra de mayonesa
sembrmos por estrias o
agotamiento
incubamos de 24 -48 horas
observamos las
caracteristicas de las
colonias
realizar coloracion gram
realizar la prueba de la
catalazs.

7. 6
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Mayonesa en agar endo:
- Gram –
- Lactosa +:producción de ácidos , sospecha de salmonella y shinginella
- Bacilos cortos
- Borde globular
- 2.5 u.
Ilustración 2Muestra de mayonesa Ilustración 1 extraccion
de bacteria
Ilustración 4siembra por estrias(endo ) Ilustración 6 siembra por estrias
(macconkey)
Ilustración 5prueba de la catalasa Ilustración 3 mayonesa en agar endo

8. 7
Mayonesa en agar MacConkey
- Gram –
- Lactosa positiva : de color rojo
Porque el ácido a partir de la lactosa, tiene un indicador de pH que hace
virar el medio.
Y se sospecha presencia de coliformes
- Lactosa negativa : de color blanco
No está produciendo ácido a partir de la lactosa.
DIIISCUSION
En las pruebas de catalasa nos ha resultado negativas,lo cual evidencia que no se
encuentra enterobacterias en la muestra.
Aunque se puede recalcar que el peróxido de hidrogeno usado,no se encontró la
fecha de caducidad. Lo cual pudo haber alterado nuestros resultados
CONCLUSIONES
Las enterobacterias son anaeróbicos facultativos.
No forman esporas, algunas producen toxinas y pueden ser
encapsuladas y son organismos catalasa positivos.
Por medio de la siguiente practica concluimos que en nuestro siembra no
presenta la enzima catalasa.
BIBLIOGRAFIA
goumh. (s.f.). identificacion bacteriana.Obtenido de catalasa:
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/identificacion-bacteriana/catalasa