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   Temas selectos de Biología Sec. C


       Profesor: González Yoval Pablo




          Integrantes del equipo:

      *Alvarado Muñoz Carlos Enrique

          *Balam Villareal Wendy L.

        *Montero Espinoza Leopoldo

      *Ortega Morales Claudia Margarita




             Trabajo: HTLV-1


        Fecha de Entrega: 08/03/2011


          Ciclo Escolar: 2010-2011
VIRUS LINFOTRÓPICO HUMANO DE CÉLULAS T TIPO 1.

          INTRODUCCIÓN.

El VLTH-1 (VIRUS LINFOTRÓPICO HUMANO DE CÉLULAS T TIPO I ) fue el primer

retrovirus patogénico humano aislado descubierto en 1980.


      Infiltrado con patrón difuso de linfocitos atípicos polimorfos de tamaño

pequeño que se mezclan con linfocitos de gran tamaño, todos ellos con núcleos

pleomórficos.


      Los individuos infectados desarrollan anticuerpos contra el virus y se
convierten en portadores de por vida, con un riesgo del 1% al 4% de desarrollar
alguna de las manifestaciones de la enfermedad.

      La transmisión del virus ocurre en forma similar al VIH: por contacto sexual,
transfusión sanguínea, compartir agujas o jeringas contaminadas. La transmisión
intrauterina es muy rara; la transmisión vertical ocurre por exposición perinatal y
por la lactancia materna sobre todo cuando es prolongada.


      Estudios recientes de virología molecular e inmunología del virus han
demostrado la importancia de la respuesta inmune del huésped en reducir el
riesgo de adquirir la enfermedad y explican por qué algunos individuos infectados
con el virus desarrollan enfermedad severa, mientras que la mayoría permanece
como portadores asintomáticos durante toda la vida.


          OBJETIVO.
          Dar a conocer las características que posee el Virus Linfotrópico
          Humano de Células T.
DESARROLLO.
                                     RETROVIRUS


El térmico retro significa “hacia atrás “y deriva del hecho de que estos virus
parecen tener un modo de replicaciones del ácido nucleico hacia atrás.
   Los retrovirus son virus de ARN, pero se replican por medio de un
intermediario de AND. Éstos son impresionantes pues fueron los primeros virus
que se demostró que causan cáncer y el genoma del retrovirus puede integrar
específicamente dentro del genoma del huésped, por medio del ADN
intermediario. Los retrovirus tienen una enzima llamada trancriptasa inversa, que
copia las secuencias del ARN a AND y ha llegado a ser una herramienta
importante en la Ing. Genética.


    Los retrovirus están envueltos
en simetría incierta (figura 1), hay
varias proteínas en la cubierta del
virus, incluyendo     al   menos    2
proteínas de la envoltura y 7
proteínas internas, cuatro de las
cuales son estructurales y tres son
enzimáticas.    Las        actividades
enzimáticas encontradas en la
partícula viral son transcriptasa
inversa,    ADN       endonucleasa
(interesa) y una proteasa.


                                         Figura 1. Estructura de un retrovirus. “Microbiología”
   El proceso de replicación de un retrovirus se puede resumir en las siguientes
etapas:
1.     Entrada a la célula
       2.     Transcripción inversa de uno de los dos genomas de ARN en un
              AND monocatenario que luego se convierte en un AND por la
              transcripción inversa.
       3.     Integración de la copia de ADN dentro del genoma del huésped.
       4.     Transcripción del AND viral, formando ARNm virales ARN viral de la
              progenie
       5.     Encapsidación del ARN viral dentro de nucleocápsides en el
              citoplasma.
       6.     Gemación de las partículas virales envueltas en la membrana
              plasmática y liberación de la célula.


                                         Figura 2. Replicación de un retrovirus. “Microbiología”
    Los retrovirus que pueden replicarse de
manera      independiente   se      llaman   no
defectivos, mientras que los retrovirus que
requieren de un virus que ayude para la
replicaciones se llaman virus defectivos.


    Solo se ha establecido claramente que
tres retrovirus producen enfermedades en
las personas: el virus de la leucemia
humana de células T, cepas 1 y 2 (VLTH-1
y   HTLV-2)    causa     algunos    casos    de
leucemia y HTVL-III es, al menos en parte, la causa del síndrome de
inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El modo de transmisión para HTLV-1 no se
conoce.
VLTH-1 (VIRUS LINFOTRÓPICO HUMANO DE CÉLULAS T TIPO I)

   Figura 3. Representación del HTLV-1. Leucemia/linfoma de células T”.


                                             El VLTH-1 (figura 3)           fue el     primer
                                         retrovirus oncógeno humano conocido.
                                             Se    clasifica    en    la   familia    de   los
                                         Retroviridae basándose en la estructura del
                                         genoma y la secuencia nucleotídica, y en la
                                         subfamilia       de     Oncoviridae         por   su
                                         patogenicidad.

                                         El VLTH-1       tiene como diana principal los
linfocitos TCD4+.

   El VLTH-1        se asocia a células y se trasmite a través de ellas en las

transfusiones sanguíneas, las relaciones sexuales o la lactancia materna. El virus

penetra en la circulación sanguínea e infecta a los linfositos TCD4 cooperadores y

los linfositos T implicados en la respuesta DTH. Estos linfositos T tienen tendencia

a residir en la piel, contribuyendo de esta forma a los síntomas de ATLL. Las

neuronas también expresan un receptor de VLTH-1.


   El VLTH-1 puede replicarse, siendo capaz de transcribir, traducir y procesar los

genes gag, pol y env. Además de su acción sobre los genes víricos, la proteína tax

transactiva los genes celulares del factor de crecimiento de los linfositos T, la IL-2

y su receptor (IL-2R), el cual activa el crecimiento de la célula infectada.


   El virus puede permanecer latente o replicarse lentamente durante muchos

años, aunque también puede inducir un crecimiento policlónico excesico de

determinados clones de linfocitos T.
Este virus provoca una hemopatía maligna llamada leucemia linfocítica aguda
de células T del adulto (LLTA) y desarrolla también una mielopatía subaguda
denominada paraparesia espástica tropical (TSP), una enfermedad neurológica no
oncogénica que presenta un cuadro similar al producido por la esclerosis múltiple.
Además, se han descrito otras tres condiciones asociadas con la infección por
VLTH-1: uveítis por VLTH-1, dermatitis infecciosa asociado a VLTH-1 y artropatía
asociada a VLTH-1.

Los criterios diagnósticos del VLTH-1 son los siguientes:


1. Neoplasia maligna de linfocitos T citológica y/o
histológicamente comprobada.
2. Linfocitos T anormales en sangre periférica excepto en
la forma linfomatosa. Los linfocitos malignos incluyen las
típicas «células en flor» y linfocitos T pequeños maduros
con núcleo hendido o lobulado.
3. Serología positiva para el anticuerpo anti-VLTH-1.


Forma latente: El recuento de linfocitos es normal y puede presentar 5% o más
linfocitos anormales en sangre periférica, puede haber lesiones cutáneas o
pulmonares.


Forma crónica: ocurre una linfocitosis absoluta con más
de 5% de linfocitos T anormales en sangre periférica. Puede
presentarse linfadenopatía, hepatoesplenomegalia, lesiones en piel y pulmón.


Forma linfomatosa: linfadenopatía histológicamente comprobada, ausencia de
linfocitosis y menos del 1% de linfocitos anormales en sangre periférica.


Forma aguda: se presentan manifestaciones leucémicas, linfadenopatías y
tumores extranodales.
 CARACTERÍSTICAS ESTRUCTURALES.

   Posee la organización genómica: gag, pro/pol, env, pχ, flanqueados por
repeticiones terminales largas o LTR; y presenta una homología del 60% a nivel
de sus secuencias nucleotídicas.

   El gen gag codifica para las proteínas estructurales p19, p24, y p15. Los genes
pro/pol codifican para la proteasa y la transcriptasa reversa, respectivamente. El
gen env codifica para las proteínas transmembrana y las glucoproteínas de la
envoltura gp21 y gp46. El gen pχ codifica para las proteínas reguladoras Tax y
Rex y otros tres marcos abiertos de lectura.

        MECANISMOS DE TRANSMISIÓN.

Figura 4. Hemoderivados. Leucemia/linfoma de células T”.


                                          Se produce principalmente por células que
                                      contienen el provirus y no por viriones libres. La
                                      transmisión sexual es poco eficiente en general y
                                      por ser un virus adosado a células es 100 veces
                                      más eficiente su transmisión de hombre a mujer
                                      que a la inversa. La transmisión vertical es
                                      principalmente por leche materna. Hay estudios
que muestran 3% de hijos seropositivos para HTLV-I de madres portadoras que le
dan lactancia artificial y 38% de seropositividad en los hijos que reciben lactancia
materna. Transmisión por sangre: debe ser sangre y hemoderivados (figura 4) que
contengan elementos celulares. Un estudio centinela en Japón mostró que el 68%
de los receptores de sangre, glóbulos rojos y plaquetas seroconvirtieron y tan sólo
0 a 1% de los receptores de plasma. Disminuye mucho la transmisión al usar
glóbulos rojos desleucocitados.
 TERAPIA.

   No tiene tratamiento específico y se han intentado varios esquemas
terapéuticos para su manejo. El trabajo reciente que plantea trasplante alogénico
de médula parece ser por el momento la terapia más promisoria .

       MEDIDAS DE PROTECCIÓN CONTRA LA INFECCIÓN DEL VLTH-1.

      El VLTH-1 no se transmite por medio del contacto doméstico común de
todos los días como son los besos, el uso del inodoro o la preparación de
alimentos, por eso únicamente las medidas principales que deben tomarse son:

        • No compartir agujas, jeringas u otro equipo para inyectarse drogas.

        • Siempre utilizar un condón de látex, especialmente si se tiene relaciones
          sexuales con más de una persona.

         DISCUSIÓN

  Cabe resaltar la importancia de este virus internacionalmente ya que el HTLV-I
fue el primer retrovirus oncógeno humano conocido.

       DISTRIBUCIÓN MUNDIAL

          Figura 5. Distribución mundial del HTLV-1.
                     “Leucemia/linfoma de células T”.




   El HTLV-1 (human T-lymphotropic virus) es
un retrovirus con amplia distribución mundial
se caracteriza por estar distribuida en regiones
geográficas definidas que aparentemente no
se relacionan. Es endémico en Japón, Caribe, África, América del Sur e Islas
Seychelles (figura 5) y es más prevalente en mujeres y en la edad media de la
vida. Hay cerca de 20 millones de infectados en el mundo y desarrollan alguna
enfermedad relacionada entre 3 y 5% de los infectados.

   Aproximadamente 1 de cada 20 personas desarrollan leucemia a los largo de
un período variable entre 10-50 años.

   Se ha implementado el monitoreo en bancos de sangre para evitar la
transmisión de VLTH-1 y 2 por transfusión. Dicho monitoreo emplea métodos
indirectos para detección anticuerpos específicos en suero y plasma.

   La respuesta inmunológica está dada principalmente contra ciertas regiones
altamente inmunogénicas de las proteínas codificadas por los genes gag y env.
habitualmente se emplean.

        CONCLUSIÓN
     Se puede decir que el Virus Linfotrópico Humano de Células T Tipo I es un
retrovirus del que se deben de tomar las medidas necesarias para evitar el
contagio como de cualquier enfermedad, ya que su vía de transmisión es la
común, por compartir jeringas o agujas, transfusiones de sangre o por contacto
sexual, y de madre a hijo en el momento del nacimiento o durante la lactancia
además de que puede infectar a las células T, linfocitos B, monocitos y
fibroblastos.


        BIBLIOGRAFÍA
~Roger y Stanier, John L. Ingraham. Microbiología. Edit. Reverte S.A. 2ª Ed.
España. 1997. Pág.283-285.

   ~D. Brock Thomas. Microbiología. 6ª Ed. Edit. Prentice Hall Hispanoamericano
S.A. México. 1982. Pág. 243-244.

 ~ Elízabeth Ball de Picón, Yosely Moreno, Bernardino Tachón, Yasmín Ordoñez,
   Marisela Morales, Dermatología Venezolana. Vol. 42, Nº 2, 2004,
"Leucemia/linfoma de células T del adulto asociado al virus linfotrópico humano
   tipo 1."

   Instituto de Hemato-Oncología, Universidad Central de Venezuela.

   ~Jawetz, E., J. L. Melnick y E. A. Adelberg, Review of Medical Microbiology,
16th ed. Los Altos, Calf: Lange Medical Publications, 1984.

~~ Sociedad Iberoamericana de Información Científica (SIIC). Sociedad Chilena
de Infectología. Resumen objetivo elaborado por el Comité de Redacción
Científica de SIIC. Laboratorios Bagó S.A. 2002. Fechas de consulta:
04/marzo/2011.14: 50 hrs. http://www.bago.com/bagoarg/biblio/infectoweb486.htm.

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Trabajo de vlth 1

  • 1. “Erasmo Castellanos Quinto “ Temas selectos de Biología Sec. C Profesor: González Yoval Pablo Integrantes del equipo: *Alvarado Muñoz Carlos Enrique *Balam Villareal Wendy L. *Montero Espinoza Leopoldo *Ortega Morales Claudia Margarita Trabajo: HTLV-1 Fecha de Entrega: 08/03/2011 Ciclo Escolar: 2010-2011
  • 2. VIRUS LINFOTRÓPICO HUMANO DE CÉLULAS T TIPO 1. INTRODUCCIÓN. El VLTH-1 (VIRUS LINFOTRÓPICO HUMANO DE CÉLULAS T TIPO I ) fue el primer retrovirus patogénico humano aislado descubierto en 1980. Infiltrado con patrón difuso de linfocitos atípicos polimorfos de tamaño pequeño que se mezclan con linfocitos de gran tamaño, todos ellos con núcleos pleomórficos. Los individuos infectados desarrollan anticuerpos contra el virus y se convierten en portadores de por vida, con un riesgo del 1% al 4% de desarrollar alguna de las manifestaciones de la enfermedad. La transmisión del virus ocurre en forma similar al VIH: por contacto sexual, transfusión sanguínea, compartir agujas o jeringas contaminadas. La transmisión intrauterina es muy rara; la transmisión vertical ocurre por exposición perinatal y por la lactancia materna sobre todo cuando es prolongada. Estudios recientes de virología molecular e inmunología del virus han demostrado la importancia de la respuesta inmune del huésped en reducir el riesgo de adquirir la enfermedad y explican por qué algunos individuos infectados con el virus desarrollan enfermedad severa, mientras que la mayoría permanece como portadores asintomáticos durante toda la vida. OBJETIVO. Dar a conocer las características que posee el Virus Linfotrópico Humano de Células T.
  • 3. DESARROLLO. RETROVIRUS El térmico retro significa “hacia atrás “y deriva del hecho de que estos virus parecen tener un modo de replicaciones del ácido nucleico hacia atrás. Los retrovirus son virus de ARN, pero se replican por medio de un intermediario de AND. Éstos son impresionantes pues fueron los primeros virus que se demostró que causan cáncer y el genoma del retrovirus puede integrar específicamente dentro del genoma del huésped, por medio del ADN intermediario. Los retrovirus tienen una enzima llamada trancriptasa inversa, que copia las secuencias del ARN a AND y ha llegado a ser una herramienta importante en la Ing. Genética. Los retrovirus están envueltos en simetría incierta (figura 1), hay varias proteínas en la cubierta del virus, incluyendo al menos 2 proteínas de la envoltura y 7 proteínas internas, cuatro de las cuales son estructurales y tres son enzimáticas. Las actividades enzimáticas encontradas en la partícula viral son transcriptasa inversa, ADN endonucleasa (interesa) y una proteasa. Figura 1. Estructura de un retrovirus. “Microbiología” El proceso de replicación de un retrovirus se puede resumir en las siguientes etapas:
  • 4. 1. Entrada a la célula 2. Transcripción inversa de uno de los dos genomas de ARN en un AND monocatenario que luego se convierte en un AND por la transcripción inversa. 3. Integración de la copia de ADN dentro del genoma del huésped. 4. Transcripción del AND viral, formando ARNm virales ARN viral de la progenie 5. Encapsidación del ARN viral dentro de nucleocápsides en el citoplasma. 6. Gemación de las partículas virales envueltas en la membrana plasmática y liberación de la célula. Figura 2. Replicación de un retrovirus. “Microbiología” Los retrovirus que pueden replicarse de manera independiente se llaman no defectivos, mientras que los retrovirus que requieren de un virus que ayude para la replicaciones se llaman virus defectivos. Solo se ha establecido claramente que tres retrovirus producen enfermedades en las personas: el virus de la leucemia humana de células T, cepas 1 y 2 (VLTH-1 y HTLV-2) causa algunos casos de leucemia y HTVL-III es, al menos en parte, la causa del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El modo de transmisión para HTLV-1 no se conoce.
  • 5. VLTH-1 (VIRUS LINFOTRÓPICO HUMANO DE CÉLULAS T TIPO I) Figura 3. Representación del HTLV-1. Leucemia/linfoma de células T”. El VLTH-1 (figura 3) fue el primer retrovirus oncógeno humano conocido. Se clasifica en la familia de los Retroviridae basándose en la estructura del genoma y la secuencia nucleotídica, y en la subfamilia de Oncoviridae por su patogenicidad. El VLTH-1 tiene como diana principal los linfocitos TCD4+. El VLTH-1 se asocia a células y se trasmite a través de ellas en las transfusiones sanguíneas, las relaciones sexuales o la lactancia materna. El virus penetra en la circulación sanguínea e infecta a los linfositos TCD4 cooperadores y los linfositos T implicados en la respuesta DTH. Estos linfositos T tienen tendencia a residir en la piel, contribuyendo de esta forma a los síntomas de ATLL. Las neuronas también expresan un receptor de VLTH-1. El VLTH-1 puede replicarse, siendo capaz de transcribir, traducir y procesar los genes gag, pol y env. Además de su acción sobre los genes víricos, la proteína tax transactiva los genes celulares del factor de crecimiento de los linfositos T, la IL-2 y su receptor (IL-2R), el cual activa el crecimiento de la célula infectada. El virus puede permanecer latente o replicarse lentamente durante muchos años, aunque también puede inducir un crecimiento policlónico excesico de determinados clones de linfocitos T.
  • 6. Este virus provoca una hemopatía maligna llamada leucemia linfocítica aguda de células T del adulto (LLTA) y desarrolla también una mielopatía subaguda denominada paraparesia espástica tropical (TSP), una enfermedad neurológica no oncogénica que presenta un cuadro similar al producido por la esclerosis múltiple. Además, se han descrito otras tres condiciones asociadas con la infección por VLTH-1: uveítis por VLTH-1, dermatitis infecciosa asociado a VLTH-1 y artropatía asociada a VLTH-1. Los criterios diagnósticos del VLTH-1 son los siguientes: 1. Neoplasia maligna de linfocitos T citológica y/o histológicamente comprobada. 2. Linfocitos T anormales en sangre periférica excepto en la forma linfomatosa. Los linfocitos malignos incluyen las típicas «células en flor» y linfocitos T pequeños maduros con núcleo hendido o lobulado. 3. Serología positiva para el anticuerpo anti-VLTH-1. Forma latente: El recuento de linfocitos es normal y puede presentar 5% o más linfocitos anormales en sangre periférica, puede haber lesiones cutáneas o pulmonares. Forma crónica: ocurre una linfocitosis absoluta con más de 5% de linfocitos T anormales en sangre periférica. Puede presentarse linfadenopatía, hepatoesplenomegalia, lesiones en piel y pulmón. Forma linfomatosa: linfadenopatía histológicamente comprobada, ausencia de linfocitosis y menos del 1% de linfocitos anormales en sangre periférica. Forma aguda: se presentan manifestaciones leucémicas, linfadenopatías y tumores extranodales.
  • 7.  CARACTERÍSTICAS ESTRUCTURALES. Posee la organización genómica: gag, pro/pol, env, pχ, flanqueados por repeticiones terminales largas o LTR; y presenta una homología del 60% a nivel de sus secuencias nucleotídicas. El gen gag codifica para las proteínas estructurales p19, p24, y p15. Los genes pro/pol codifican para la proteasa y la transcriptasa reversa, respectivamente. El gen env codifica para las proteínas transmembrana y las glucoproteínas de la envoltura gp21 y gp46. El gen pχ codifica para las proteínas reguladoras Tax y Rex y otros tres marcos abiertos de lectura.  MECANISMOS DE TRANSMISIÓN. Figura 4. Hemoderivados. Leucemia/linfoma de células T”. Se produce principalmente por células que contienen el provirus y no por viriones libres. La transmisión sexual es poco eficiente en general y por ser un virus adosado a células es 100 veces más eficiente su transmisión de hombre a mujer que a la inversa. La transmisión vertical es principalmente por leche materna. Hay estudios que muestran 3% de hijos seropositivos para HTLV-I de madres portadoras que le dan lactancia artificial y 38% de seropositividad en los hijos que reciben lactancia materna. Transmisión por sangre: debe ser sangre y hemoderivados (figura 4) que contengan elementos celulares. Un estudio centinela en Japón mostró que el 68% de los receptores de sangre, glóbulos rojos y plaquetas seroconvirtieron y tan sólo 0 a 1% de los receptores de plasma. Disminuye mucho la transmisión al usar glóbulos rojos desleucocitados.
  • 8.  TERAPIA. No tiene tratamiento específico y se han intentado varios esquemas terapéuticos para su manejo. El trabajo reciente que plantea trasplante alogénico de médula parece ser por el momento la terapia más promisoria .  MEDIDAS DE PROTECCIÓN CONTRA LA INFECCIÓN DEL VLTH-1. El VLTH-1 no se transmite por medio del contacto doméstico común de todos los días como son los besos, el uso del inodoro o la preparación de alimentos, por eso únicamente las medidas principales que deben tomarse son: • No compartir agujas, jeringas u otro equipo para inyectarse drogas. • Siempre utilizar un condón de látex, especialmente si se tiene relaciones sexuales con más de una persona. DISCUSIÓN Cabe resaltar la importancia de este virus internacionalmente ya que el HTLV-I fue el primer retrovirus oncógeno humano conocido.  DISTRIBUCIÓN MUNDIAL Figura 5. Distribución mundial del HTLV-1. “Leucemia/linfoma de células T”. El HTLV-1 (human T-lymphotropic virus) es un retrovirus con amplia distribución mundial se caracteriza por estar distribuida en regiones geográficas definidas que aparentemente no se relacionan. Es endémico en Japón, Caribe, África, América del Sur e Islas Seychelles (figura 5) y es más prevalente en mujeres y en la edad media de la
  • 9. vida. Hay cerca de 20 millones de infectados en el mundo y desarrollan alguna enfermedad relacionada entre 3 y 5% de los infectados. Aproximadamente 1 de cada 20 personas desarrollan leucemia a los largo de un período variable entre 10-50 años. Se ha implementado el monitoreo en bancos de sangre para evitar la transmisión de VLTH-1 y 2 por transfusión. Dicho monitoreo emplea métodos indirectos para detección anticuerpos específicos en suero y plasma. La respuesta inmunológica está dada principalmente contra ciertas regiones altamente inmunogénicas de las proteínas codificadas por los genes gag y env. habitualmente se emplean. CONCLUSIÓN Se puede decir que el Virus Linfotrópico Humano de Células T Tipo I es un retrovirus del que se deben de tomar las medidas necesarias para evitar el contagio como de cualquier enfermedad, ya que su vía de transmisión es la común, por compartir jeringas o agujas, transfusiones de sangre o por contacto sexual, y de madre a hijo en el momento del nacimiento o durante la lactancia además de que puede infectar a las células T, linfocitos B, monocitos y fibroblastos. BIBLIOGRAFÍA ~Roger y Stanier, John L. Ingraham. Microbiología. Edit. Reverte S.A. 2ª Ed. España. 1997. Pág.283-285. ~D. Brock Thomas. Microbiología. 6ª Ed. Edit. Prentice Hall Hispanoamericano S.A. México. 1982. Pág. 243-244. ~ Elízabeth Ball de Picón, Yosely Moreno, Bernardino Tachón, Yasmín Ordoñez, Marisela Morales, Dermatología Venezolana. Vol. 42, Nº 2, 2004,
  • 10. "Leucemia/linfoma de células T del adulto asociado al virus linfotrópico humano tipo 1." Instituto de Hemato-Oncología, Universidad Central de Venezuela. ~Jawetz, E., J. L. Melnick y E. A. Adelberg, Review of Medical Microbiology, 16th ed. Los Altos, Calf: Lange Medical Publications, 1984. ~~ Sociedad Iberoamericana de Información Científica (SIIC). Sociedad Chilena de Infectología. Resumen objetivo elaborado por el Comité de Redacción Científica de SIIC. Laboratorios Bagó S.A. 2002. Fechas de consulta: 04/marzo/2011.14: 50 hrs. http://www.bago.com/bagoarg/biblio/infectoweb486.htm.