1. Mitogen-activated Protein Kinase-independent Pathways Mediate the Effects of Nerve Growth Factor and cAMP on Neuronal Survival* Douglas J. Creedon, Eugene M. Johnson, Jr., and John C. Lawrence, Jr. From the Departments of ‡ Molecular Biology and Pharmacology and § Neurology, Washington University School of Medicine, St. Louis, Missouri 63110 Carlos Gabriel Contreras Serrano. Bsc. Mj. Maestría en ciencias básicas biomédicas. Universidad el Bosque.
2. Neurotrofinas. Contribuyen a la regeneración neuronal. Relacionadas estructuralmente. Factores Ntr. Regulan el numero final de neuronas y conexiones del SN. Proteínas endógenas. Promueven la supervivencia. Favorecen la diferenciación de Ciertas poblaciones neuronales. Regulan el proceso de formación y establecimiento De conexiones sinápticas.
5. NGF. Nudo de cisteìnas. Dos Péptidos idénticos unidos por enlaces no covalentes. El monómero cuenta con una forma alargada con tres pares de estructuras beta antiparalelas conectadas por loops.
6. Estabilización de la estructura molecular de algunos factores de crecimiento. 50% de similitud entre las NT. Las regiones activas se encuentra ubicadas en los mismos sitios. NT cuentan con un motivo denominado nudo de cisteínas que estabilizan la estructura terciaria de los polipéptidos. Consiste en la formación de un anillo donde participan cuatro residuos de cisteína y tres puentes disulfuro.
7. NGF y TRK. Se han descrito alrededor de 66-88% de similitud entre los tres receptores.
13. Procedimientos. 1 ¿NGF promueve la activación de la vía MAP Kinasa? EN SCG. Después de retirado NGF, ¿se puede rehabilitar la función kinasa en la célula?., ¿CPTcA y PMA pueden tener los mismos efectos que NGF?. 2 3 Las mediciones de fosforilación de MBP revela que hay actividad de las dos isoformas de MAPK. ¿CPTcA activa selectivamente los isomorfismos ERK-1 y ERK 2 de MAP kinasa?
14. Procedimiento 1. Cultivo celular. Reemplazo del medio de cultivo después de 6 días Centrifugado a 4ºC y durante 10 minutos. Siguiente .
15. Resultado. Incremento de las concentraciones de NGF sobre la actividad kinasa de MBP en neuronas disociadas. Proteína Básica de Mielina.
16. Resultado. Efecto del retiro de NGF sobre la actividad kinasa de MBP a razón del tiempo De retirada. Inicial.
17. Procedimiento 2. Cultivo celular. Reemplazo del medio de cultivo después de 6 días Centrifugado a 4ºC y durante 10 minutos. Siguiente. Reemplazo del medio de cultivo después de 12 a 16 horas.
18. Resultados. Actividad kinasa en neuronas que habían sido privadas de NGF y fueron inmersas En tres diferentes medios: NGF, PMA y CPTcA luego de haber estado en medio con Anticuerpos antiNGF.
21. Resultados. Actividad kinasa en neuronas que habían sido privadas de NGF y fueron inmersas En tres diferentes medios: NGF, PMA y CPTcA luego de haber estado en medio con Anticuerpos antiNGF. Activa la vía MAP en diferentes células, se observa que con PMA hay un aumento en la actividad MBP kinasa pero no un efecto promotor de supervivencia en neuronas. Inicial.
22.
23. Resultado. En cada una de las bandas hay actividad Kinasa a la altura de ERK1 y ERK 2. Esto motiva ensayos de inmunoprecipitación Para evaluar confirmar estos resultados Y discriminar el rol especifico de CPTcA en La activación de ERK 1 y ERK 2.