1. CORPORACIÓN UNIVERSITARIA DEL HUILA CORHUILA<br />FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA<br />PROFESOR: ESP. RAFAEL HERNANDEZ FLOREZ<br />LABORATORIO NRO 2 CARBOHIDRATOS , ENZIMAS Y VITAMINAS<br />LLEVAR : ZUMOS DE VARIAS FRUTAS CITRICAS, MAIZENA.<br />Indispensable diligenciar debidamente el prelaboratorio, solución de cuestionarios, secuencias en una carpeta oficio, elaborado a mano, en hojas de examen y PRESENTARLO ANTES DE INICIAR EL LABORATORIO<br />Llevar la bata como elemento de protección<br />Ser puntuales a la hora de iniciar el laboratorioOBJETIVOEl alumno aplicara algunas pruebas químicas, para detectar la presencia de carbohidratos que se hallen presentes sea como mono, oligo, o polisacáridos.INFORMACION GENERALLos carbohidratos, químicamente son derivados aldehídicos o cetonicos de alcoholes polihidroxilados.De acuerdo con esta definición tenemos dos grandes familias de carbohidratos, las ALDOSAS (contienen en su molécula al radical aldehído):Y las CETOSAS (contienen en su molécula al radical ceto):A los carbohidratos, también se les da el nombre de hidratos de carbono, glúcidos y azucares.Se hallan ampliamente distribuidos en la naturaleza, tanto en vegetales como en animales, en los primeros realiza fundamentalmente una función plástica (forman pared de los tejidos de la planta), y en menor grado una función de reserva de energía (como el almidón de las plantas)En los animales, los carbohidratos constituyen la fuente primaria para la obtención de energía, esta es su principal función; también se les encuentra formando parte de numerosas moléculas, y son a la vez una fuente de reserva de energía a corto plazo (en forma de deposito de glucógeno hepático y muscular).De acuerdo con el numero de moléculas de que constan, los carbohidratos se pueden clasificar en :a) Monosacáridos.---formados por solo una unidad (monómeros), ejemplo la glucosab) Oligosacáridos. ------ Formados por dos o hasta 8 unidades. Reciben el nombre entonces de di, tri, tetrasacáridos, etc.Ejemplo: Lactosa (el azúcar de la leche), formada por la unión de glucosa + galactosa (es un disacárido).Una molécula de un carbohidrato, se une a otro carbohidrato por medio de un enlace llamado glucosidico.c) Polisacáridos. --- formados por mas de 8 unidades o monómeros, por ejemplo: el almidón (es una cadena formada solo por glucosa, unidas a otras moléculas de glucosa, por enlaces llamados glucosidicos).MATERIALES REACTIVOS18 Tubos de ensayo 120 x 10 mm.1 gradilla1 vaso p.p 250 ml1 mechero1 tripie1 tela de asbesto5 pipetas 5 ml6 pipetas 1 ml1 pinza p/ tubo de ensayo Agua destiladaH2SO4 conc.HCL concHNO3 concSol. De lugolSol. De cromato de potasio 5%Ácido fosforico 85%Sol. Al 1% de glucosa, fructosa y almidón.Sobres con 30 mg de glucosa, sacarosa, lactosa, NaCl.Sol. Alcohólica timol 5%Alfa naftol sol. Alcohólica al 2%DESARROLLO DE LOS EXPERIMENTOS<br />4.1- PRUEBA DEL TIMOL PARA CARBOHIDRATOS.Disponer de tres tubos de ensayo, numerarlos y proceder como muestra el siguiente esquema.<br />REACTIVOTUBO 1TUBO 2TUBO 3Glucosa 3mlXLactosa 3 mlXCloruro de Sodio 3 mlXAgua destilada2ml2ml2mlSln alcohólica de Timol 5%2ml2ml2ml<br />AGITAR LA MEZCLA DE CADA TUBOINCLINAR LOS TUBOS, INTRODUCIR H2SO4 concentrado. Con una pipeta, de tal forma que 0.5 ml de ácido queden bajo la solución acuosa.Hacer este pasó para cada uno de los tres tubos. SIN AGITAR.4.1 Resultados esperados1. En que tubos observo un cambio?<br />2. En que consistió dicho cambio?<br />3. A que se debe este cambio?4.2 – PRUEBA DE ÁCIDO NICRÓMICO PARA CARBOHIDRATOSDisponer de tres tubos de ensayo, numerarlos, y proceder como se muestra en el siguiente esquema.<br />REACTIVOTUBO 1TUBO 2TUBO 3Glucosa 3mlXAlmidón 3mlXCloruro de Sodio 3mlXAgua destilada 3mlXXXAcido Nítrico3mlXXXCromato de potasio al 5% 5 gotasXXX<br />AGITAR Y DEJAR EN REPOSO POR DOS MINUTOS. OBSERVAR COLOR1. En que tubos observo un cambio?<br />2. En que consistió dicho cambio?<br />3. A que se debe este cambio?<br />4.3- PRUEBA DEL ÁCIDO FOSFÓRICO PARA CETOSACÁRIDOSMarque dos tubos de ensayo y proceda según el esquema.<br />REACTIVOTUBO 1TUBO 2Sacarosa 3 mlXGlucosa 3 mlXAc fosfórico 85% 1 mlXX<br />AGITAR LA MEZCLA, COLOCAR EN BAÑO MARIA POR 1 MIN, RETIRAR Y OBSERVAR COLOR DESARROLLADO<br />.1. En que tubos observo un cambio?<br />2. En que consistió dicho cambio?<br />3. A que se debe este cambio?<br />4.4-PRUEBA DE MOLISCH.Numere 3 tubos de ensayo y, y proceda según el siguiente esquema.<br />REACTIVOTUBO 1TUBO 2TUBO 3Glucosa 2mlXFructosa 2mlXAgua destilada 2mlXReactivo de Molisch 5 gotasXXXMEZCLAR , INCLINAR CADA TUBO Y AÑADIR CON CUIDADO ELAC.SULFURICOÁcido sulfúrico 2mlXXX<br />1. En que tubos observo un cambio?<br />2. En que consistió dicho cambio?<br />3. A que se debe este cambio?4.5 PRUEBA DE LUGOL PARA ALMIDÓN Y GLUCÓGENONumere 3 tubos de ensayo y, y proceda según el siguiente esquema.<br />REACTIVOTUBO 1TUBO 2TUBO 3Glucosa 2mlXFructosa 2mlXAlmidón 2mlXAc. Sulfúrico 3 gotasXXXLugolXXX<br />MEZCLAR<br />1. En que tubos observo un cambio?<br />2. En que consistió dicho cambio?<br />3. A que se debe este cambio?<br />PARTE II ENZIMAS<br />ACCION HIDROLITICA DE LAS AMILASAS DE SEMILLAS DE GRAMINEAS<br />INTRODUCCION<br />Las fuentes más importantes como materia prima para la obtención de energía son los polisacáridos, el almidón y el glucógeno. En los vegetales el almidón constituye el polisacárido de reserva más abundante, sintetizándose en los cloroplastos de las células fotosintéticas y en los amiloplastos de las células del parénquima de almacenamiento.<br />El camino típico para la movilización del almidón de reserva es a través de la actividad hidrolítica de las alfa y beta amilasas, cuya acción conduce a la formación de maltosa. El desdoblamiento de la maltosa hasta glucosa está a cargo de la maltasa, que se encuentra junto con las amilasas.<br />Las amilasas pueden extraerse de los granos de cereales en germinación mediante maceración con agua. Su acción hidrolítica puede seguirse mediante los reactivos de Lugol y de Fehling.<br />PARTE EXPERIMENTAL<br />REACTIVOS:<br />- Semillas de gramíneas en germinación<br />- Mortero.<br />- Cristalería.<br />- Termostato.<br />- Reactivos de Lugol, Fehling, Tollens y Benedict.<br />- Mechero.<br />PROCEDIMIENTO:<br />Prepare 30 mL de un macerado acuoso con 10 g de semillas de gramíneas germinadas teniendo en cuenta que el agua debe estar caliente (50 grados). Añada 5 gotas de glicerina para extraer lo más posible los enzimas.<br />Deje reposar de 15 - 20 minutos de 30 - 45 grados Celsius y filtre el extracto.<br />En un tubo de ensayo, introduzca 5 ml de disolución de almidón y de 1 - 2 ml del extracto. A intervalos de 5 minutos, comprobar la degradación del almidón por las amilasas ensayando una muestra del sistema de reacción en una placa con excavaduras con el reactivo de Lugol. Para reconocer la presencia de azúcares reductores (maltosa y glucosa), realizar la reacción con los reactivos de Fehling, Tollens o Benedict de una muestra de 1 - 2 ml del sistema de reacción.<br />REPORTE DE LABORATORIO<br />1- Represente a través de una ecuación la acción hidrolítica de las amilasas del almidón (amilosa).<br />Nota : Utilice las estructuras químicas.<br />2- Clasifique las amilasas de acuerdo con el Sistema Internacional.<br />3-¿ Qué objetivo persigue realizar la reacción con el reactivo de Lugol cada cierto intervalo de tiempo?<br />4-¿ Qué objetivo persigue realizar al final del experimento la reacción con el reactivo de Fehling? Represente la ecuación.<br />PARTE III VITAMINAS<br />Material necesario<br />• Normalmente se utiliza un reactivo de <br />laboratorio que recibe el nombre de lugol <br />(disolución de yodo al 5 % y yoduro de potasio <br />al 10%, en agua). Pero también podemos <br />desarrollar esta técnica en casa a partir de los <br />productos farmacéuticos yodados que se <br />utilizan habitualmente para tratar las heridas. <br />Así, se utiliza la tintura de yodo (disolución de <br />yodo en alcohol). <br />• Fécula o almidón de maiz (comercialmente maicena) <br />• agua <br />• vaso de precipitados de 500 mL <br />• tubos de ensayo <br />• cuentagotas <br />• varilla agitadora <br />• placa calefactora <br />• zumos o bebidas de frutas <br />Procedimiento<br /> El primer paso consiste en preparar la disolución indicadora del <br />contenido de vitamina C. Para ello se deben seguir las siguientes <br />indicaciones: <br />1. mezcla una cucharada de almidón de maíz con suficiente agua hasta <br />formar una pasta. <br />2. añade 250 mL de agua a la pasta y hiérvela durante 5 minutos. 3<br />3. añade 10 gotas de la solución hecha con almidón a 75 mL de agua. <br />4. añade suficiente disolución de yodo hasta observar un color <br />púrpura/azul oscuro. <br />Una vez preparada la disolución indicadora se puede comenzar la <br />experimentación. <br />- Añade 5 mL de la disolución indicadora en un tubo de ensayo de 15 <br />mililitros de capacidad (un tubo de ensayo para cada muestra a <br />estudiar). <br />- Usando un cuentagotas limpio, añade 10 gotas del zumo de fruta o <br />de la bebida seleccionada al tubo de ensayo y agita suavemente. <br />- Compara el color de la mezcla frente a un fondo blanco. <br />- Organiza los tubos en orden del color más claro al más oscuro. <br />1. En que tubos observo un cambio?<br />2. En que consistió dicho cambio?<br />3. A que se debe este cambio?<br />CUESTIONARIO<br />MEDIANTE QUE METODOS SE PUEDEN IDENTIFICAR LOS CARBOHIDRATOS?<br />QUE ES EL TIMOL Y PARA QUE SIRVE?<br />QUE FUNCIÓN CUMPLE EL CROMATO DE POTASIO EN LA IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS?<br />CUAL ES LA FUNCIÓN DEL ACIDO FOSFÓRICO PARA LA IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS?<br />QUE ES EL REACTIVO DE MOLISCH Y QUE UTILIDAD TIENE PARA LA IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS?<br />QUE ES EL LUGOL Y QUE UTILIDAD TIENE PARA LA IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS?<br />QUE SON LAS AMILASAS Y CUAL ES SU IMPORTANCIA?<br />QUE OCURRE AL REACCIONAR UN COMPLEJO DE YODO AMILOSA CON LA VITAMINA C?<br />QUE IMPORTANCIA TIENEN LOS REACTIVO SE FEHLING ,LUGOL, , TOLLENS Y BENEDICT.PARA LA IDENTIFICACION DE ENZIMAS?<br />CUÁNTAS CLASES DE AMILASAS EXISTEN?<br />QUE ES UN AZÚCAR REDUCTOR ?<br />