1. TÉCNICAS BIOQUÍMICAS: CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO FERNANDA FUENTEALBA VALENTINA FUENTES MACARENA LOBO CARLA MORA ROMINA PULVERMÜLLER JONATHAN RIQUELME FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA BIOQUÍMICA DOCENTES: Dr. REGINALDO DEL POZO BQ. MIRNA MUÑOZ MIÉRCOLES 30 DE JUNIO DE 2010
2.
3.
4.
5.
6. PROPIEDADES DE LOS INTERCAMBIADORES Intercambiador Iónico: Polímero que tiene grupos cargados unidos. Intercambiador Catiónico: Si un grupo está cargado negativamente, podrá intercambiar iones positivos. Un grupo típico que se utiliza en los intercambiadores de cationes es el grupo sulfónico, SO3-. El grupo ácido sulfónico es un intercambiador de cationes fuertemente acido. Otros grupos de utilización corriente son el carbonilo e hidroxilo fenólico, dos intercambiadores catiónicos débilmente ácidos.
7. PROPIEDADES DE LOS INTERCAMBIADORES Intercambiador Aniónico: Si el grupo cargado es positivo, es un intercambiador de aniones. Los intercambiadores aniónicos débilmente básicos más corrientes son grupos aminos alifáticos o aromáticos.
8. MATERIALES Columna de vidrio Matriz de intercambio iónico (Resina) Eluyente Muestra a fraccionar Colectores.
9. PROCEDIMIENTO Equilibrio: Toda la fase estacionaria se encuentra asociada a iones complementarios (que pueden ser cloro o sodio). Aplicación y Lavado: Aplicar la muestra la cual queremos filtrar a través de la columna mediante un lavado específico. Se aplica un buffer con el mismo pH y fuerza iónica que el buffer inicial para que todas las proteínas cargadas se unan al intercambiador. Elusión: Las moléculas captadas por el intercambiador son eluídas debido a cambios en la composición del buffer. Regeneración: Remover las partículas que aún están asociadas al intercambiador. Se debe generar un cambio más drástico en el pH y la concentración salina. La fase estacionaria puede volver a ser utilizada.
14. VENTAJAS /DESVENTAJAS Ventajas: Alta capacidad Alta resolución Paso concentrador: Se puedesembrar un granvolumenparaluegoeluirlo en un menorvolumen. Con una misma columna se puede utilizar a diferentes pH y obtener diversos perfiles de elución. Desventajas: Las muestras deben estar desalinizadas antes de ser aplicadas a este tipo de cromatografía
15.
16.
17.
18. Las resinas ácidas fuertes siguen ionizadas incluso en disoluciones muy ácidas, en cambio las resinas ácidas débiles se protonan a un pH próximo a 4 y pierden su capacidad de intercambio catiónico, reduciéndose así, el tiempo de retención.
19.
20.
21. Este problema se resolvió mediante un sistema supresor de conductibilidad colocado a la salida de la columna cromatográfica.
31. Cuando los pacientes con PAI presentan una crisis aguda, disminuye la actividad de la PBGD y, como consecuencia los niveles de BPG y/o ALA en la orina se incrementan significativamente.
32.
33. El PBG se queda retenido en la aniónica y el ALA en la catiónica. En la columna con PBG, se utiliza ácido acético 1M para que éste eluya y pueda ser cuantificado. En la columna con ALA, se le agrega acetato de sodio 1M para que éste eluya y sea cuantificado. Luego, el eluido de cada columna reacciona con Reactivo de Ehrlich, formando un producto rojo intenso. Este reactivo está conformado por 4-dimetilbenceno diluido en ácido acético y ácido perclórico.
![CROMATOGRAFÍA ,[object Object], Estacionaria Móvil ,[object Object], Adsorción Absorción](data:image/gif;base64,R0lGODlhAQABAIAAAAAAAP///yH5BAEAAAAALAAAAAABAAEAAAIBRAA7)