Preparacion de medios de cultivos jhonás

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERIA
E.A.P AGROINDUSTRIAL
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS.

CURSO

: MICROBIOLOGÍA GENERAL

GRUPO

: “B”

DOCENTE

:Blgo.Mblgo. Eterio Alva Muñoz

CÓDIGO

: 0201212051

INTEGRANTES

:VEGA VIERA JHONAS ABNER.

CICLO:

“IV”

NUEVO CHIMBOTE - PERÚ

2013

FACULTAD DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
1. Medio puro.
Peptona cloruro de sodio.
50g

pesar.

[Balanza analítica].

pesar.


añadir.

[Homogenizamos].

Extracto de carne agua destilada.

3g y1000ml

Agar.
15g

añadimos.

[50 ml de aguapara disolver la sustancia].

[El balón de fondo plano con algodón, seda, hilo

sellamos

Pabilo, papel bond para evitar que entren los
vapores al estar en la autoclave].

calentamos

llevar a un autoclave.

anotar

[Sometemos en una cocina eléctrica las
mezclas de isimos en el laboratorio].


2. Caldo común.
Peptona y cloruro de sodio.
0.25g

pesar.


pesar.


añadir.

[Disolverlas en la cantidad].

Extracto de carne.

0.15g
y1000ml
.

añadimos.



sellamos


calentamos


anotar



3. Agar común.
Peptona cloruro de sodio.
0.25g

pesar.


pesar.


añadir.

[Homogenizamos].


3g y1000ml

Agar.
0.75g

añadimos.



sellamos


calentamos


anotar



4. Medio saboraud.
Peptona y glucosa.
0.5 y 2g

pesar.


pesar.


añadir.

[Homogenizamos].


3g y1000ml

Agar.
0.75g

añadimos.



sellamos


calentamos


anotar



I.

INTRODUCCIÓN

El medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el
desarrollo de los microorganismos el cual constituye el aporte de nutrientes
indispensables para el crecimiento de los microorganismos. Los medios de cultivo deben
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de
cualquier microorganismo contaminante.
Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fósforo
y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias
inductoras del crecimiento. También se añaden colorantes que actúan como indicadores
para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de
unas bacterias y no de otras.
De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en:
Líquido: Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulación.
Semisólidos: Contienen 0.5% de agar en su formulación. Se utilizan para estudiar la
movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo).
Sólidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulación. Estos medios inmovilizan a las
células, permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias.
El agar es el principal agente solidificante utilizado en los medios de cultivo. Se disuelve
completamente a 100°C y se solidifica al enfriarse a 42°C.
La composición precisa del medio de cultivo dependerá del microorganismo que se
quiera cultivar, por lo que las necesidades nutricionales tienden a variar de al tipo de
microorganismo. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios
de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas
sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.
Durante las prácticas se van a manejar medios de cultivo de composición muy variada y
de tres tipos diferentes en cuanto a ingredientes. Este último aspecto es importante a la
hora de la preparación de los mismos. Aunque los medios artificiales o sintéticos se
pueden preparar a partir de sus componentes individuales, se pueden adquirir
comercialmente como medios deshidratados a los que solamente hay que añadir la
cantidad de agua necesaria. El fabricante indica la composición, la caducidad, y la
cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e incluso como debe esterilizarse.
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de


10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un
medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura,
grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez
o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de las
bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los
líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es
una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. El
agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo.
Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a
40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias
y no es atacado por aquellas que crecen en él. La Gelatina es otro agente solidificante pero
se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos
de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor
nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos
que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el
crecimiento de los microorganismos menos resistentes.También se añaden colorantes
que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como
inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como
indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se
usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Grampositivas).
CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por
una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.
1. Disponibilidad de nutrientes adecuados: Un medio de cultivo adecuado para la
investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno,
azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas
vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Todas estas sustancias se
suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o
extractos de levadura.


2. Consistencia adecuada del medio: Partiendo de un medio líquido podemos
modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar,
con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido. Los medios
solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
3. Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases: Los microorganismos
anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin
oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos
en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias mientras los anaerobios
facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas
condiciones.
4. Condiciones adecuadas de humedad: Hay que prever el mantenimiento de
estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una
fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento
de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.
5. Luz ambiental: La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la
oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el
caso de los microorganismos fotosintéticos.
6. PH: La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque
los hay que requieren medios más o menos ácidos.
7. Temperatura:Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a
temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los
temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos).
8. Esterilidad del medio:Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente
estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar,
enmascarar o impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especímenes
inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de
cultivo es la autoclave.


II.

OBJETIVOS
Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el
desarrollo de los microorganismos in vitro.
Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que
imprescindibles, en el laboratorio de microbiología
Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de:
Conocer los medios de cultivo.
Preparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes
y manejar adecuadamente la autoclave.

III.

FUNDAMENTO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de
los microorganismos. Puesto que la diversidad metabólica de los
microorganismos es enorme, la variedad de medios de cultivo es también muy
grande. La mayoría de los medios de cultivo se comercializan en forma de
liofilizados que es preciso rehidratar.
La preparación de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad
de medio y redisolverla en agua destilada (libre de inhibidores del
crecimiento) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias
termolábiles se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los
componentes previamente esterilizados en laautoclave.
IV.

MATERIALES
Balanza
Infernillo eléctrico
Probeta 500 ml
Balones de fondo plano
Gasa
Tubos de ensayo
Algodón
Hilo Pabilo
Espátula
Papel Bond
Plumón
Tijera


-

INGREDIENTES
o Pectona.
o NaCl
o Glucosa.
o Agua Destilada.
o Extracto de Carne.
o Agar.

V.

PROCEDIMIENTO
1° Caldo común (Bacteria)
-

Preparación:
Peptona
5 gr
Cloruro de Sodio (NaCl)
5 gr
Extracto de Carne
3 gr
Agua Destilada
1000 ml

-

Pesamos todos los productos para parte del agua destilada (50 ml)
e
n
t
o
n
c
e
s
:

Peptona para 50ml
(agua destilada)
0.25 de Peptona
g


Extracto de Carne para 50ml
(agua destilada) 0.15 de Ext.
De Carne
g

NaCl para 50ml (agua
destilada) 0.25g de
NaCl

-

Medimos 50 ml de agua destilada en una probeta.


-

Pasar aproximadamente la mitad de los 50 ml a un balón de fondo plano,
donde se realizara la mezcla de lo anteriormente medido.

Vaciamos la mitad del agua
destilada al balón de fondo plano

Pasamos los productos medidos
al balón de fondo plano

Mezclamos

Vaciamos el resto de agua

-

Sellar el balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo, papel bond
para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave.


2° Agar común (Bacteria)
-

Preparación:
Peptona
5 gr
Cloruro de Sodio (NaCl)
5 gr
Extracto de Carne
3 gr
Agua Destilada
1000 ml
Agar
15 gr

-

entonces:

Peptona para 50ml
(agua destilada)
0.25 de Peptona
g


Extracto de Carne para 50ml
(agua destilada) 0.15 de Ext.
De Carne
g

NaCl para 50ml (agua
destilada) 0.25g de
NaCl

Agar para 50ml (agua destilada)
0.75 de Agar
g

-



-

aproximadamente la mitad de los 50 ml a un balón de fondo plano, donde
se realizara la mezcla de lo anteriormente medido.



-

Pasamos los productos medidos al
balón de fondo plano

Mezclamos

Sellar el balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo, papel bond
para evitar que entren los vapores al estar en la autoclave.


3° Agar Sabouraud (Hongo)
-

Preparación:

-

entonces:

Glucosa
40 gr
Peptona
10 gr
Agua Destilada 1000 ml
Agar
15 gr

Peptona para 50ml
(agua destilada)
0.5 g de Peptona

Glucosa para 50ml
(agua destilada) 2g
de Glucosa

Agar para 50ml (agua destilada)
0.75 de Agar
g

-



-

Pasar aproximadamente la mitad de los 50 ml a un balón de fondo plano,
donde se realizara la mezcla de lo anteriormente medido.



-

Pasamos los productos medidos al
balón de fondo plano

Mezclamos

Sellar el balón de fondo plano con algodón, seda, hilo Pabilo.


-

Después de realizado los medio de cultivos se le iba colocando el nombre y
cubriendo con papel bond para evitar que se pierda o contamine el medio
de cultivo.


-

Procedemos a calentar los tres balones de fondo plano, con la intención de
poder disolver totalmente los productos mezclados, para ello calentamos
en el infernillo eléctrico hasta notar la presencia de burbujas en la
superficie del cultivo (no hervir).


VI.

RESULTADOS

VII.

GLOSARIO.
Define los siguientes términos.
1.

Elemento traza
Un elemento traza es un compuesto químico que es necesario en
cantidades ínfimas para el crecimiento, desarrollo y fisiología de un
organismo. También puede ser referido como micronutriente.

2.

Macronutrientes
Los macronutrientes son aquellos nutrientes que suministran la
mayor parte de la energía metabólica del organismo. Los principales
son glúcidos, proteínas, y lípidos. Otros incluyen alcohol y ácidos
orgánicos.

3.

Micronutrientes
Son sustancias que el organismo de los seres vivos necesitan en
pequeñas dosis. Son indispensables para los diferentes procesos
bioquímicos y metabólicos de los organismos vivos y sin ellos
morirían. Algunos de los más importantes micronutrientes son el
yodo, el hierro y la vitamina A. Existen otros micronutrientes como el
zinc, el ácido fólico, el calcio y todas las vitaminas y minerales.


4.

Reactivo grado reactivo o químicamente puro
Son aquellos cuyo grado de impureza es mínimo, son utilizados en
laboratorios.

5.

Peptona
Son una variedad de hidrolizados proteínicos derivados de caseína,
carne y vegetales, que en su presentación final ofrecen una fuente
efectiva de nitrógeno y carbono en otros nutrientes. En formulaciones
adecuadas estimulan y promueven el crecimiento bacteriano.

6.

Cloruro de sodio
El cloruro de sodio es un compuesto iónico formado por
un catión sodio (Na+) y un anión cloruro (Cl-), y como tal, puede
reaccionar para obtener cualquiera de estos dos iones. Como cualquier
otro cloruro iónico soluble, precipita cloruros insolubles cuando es
agregado a una solución de una sal metálica apropiada como nitrato
de plata

7.

Extracto de carne
El extracto de carne es un caldo de carne muy concentrado,
normalmente de vacuno. Se usa para dar sabor a carne a diversas
recetas, y para elaborar consomés y sopas.

8.

Glucosa
La glucosa es un monosacárido con fórmula molecular C6H12O6. Es
una hexosa, es decir, contiene 6 átomos de carbono, y es una aldosa,
esto es, el grupo carbonilo está en el extremo de la molécula (es un
grupo aldehído). Es una forma de azúcar que se encuentra libre en
las frutas y en la miel.

9.

Agar
Agar o agar-agar es una gelatina vegetal de origen marino.
Químicamente el agar es un polímero de subunidades de galactosa; en
realidad es una mezcla heterogénea de dos clases de
polisacáridos: agaropectina y agarosa.
El agar nutritivo es usado como medio de cultivo para el crecimiento
de bacterias y hongos,
pero
no
para virus (aunque
los
virus bacteriófagos crecen frecuentemente en bacterias cultivadas en
agar).


10. Autoclave
Una autoclave es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas
con un cierre hermético que permite trabajar a alta presión para
realizar
una
reacción
industrial,
una
cocción
o
una esterilización con vapor de agua. Su construcción debe ser tal que
resista la presión y temperatura desarrollada en su interior. La
presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores
a los 100 °C. La acción conjunta de la temperatura y el vapor produce
la coagulación de las proteínas de los microorganismos, entre ellas las
esenciales para la vida y la reproducción de éstos, cosa que lleva a su
destrucción.

VIII.

CONCLUSIONES
Se reconocieron los diferentes medios de cultivoexistentes para
el crecimiento de microorganismosaplicando conceptos básicos de
nutrición ypreparación de los mismos.
Con la realización de la práctica de preparación de medios para el
cultivo de tejidos vegetales, se lograron los objetivos establecidos en la
misma, proporcionando al alumno gran conocimiento de cómo
prepararlo y cuáles son los nutrimentos necesarios de acuerdo a la
consistencia que el medio de cultivo obtuvo. Es importante mencionar
que se obtuvieron buenos resultados ya que se pudo hacer la
preparación del medio sin dificultad alguna.
Aprendimos los pasos para elaborar un medio de cultivo, sus cálculos
respectivos de las cantidades necesarias para su preparación.

IX.

BIBLIOGRAFIA
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedra
Micro/10_Preparaci%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf
http://www.slideshare.net/WARAUYA20/medios-de-cultivosmetodologa-y-usos


http://www.slideshare.net/Pashmina19/medios-de-cultiv0
http://yactivany.blogspot.com/2012/03/practica-n3-preparacion-demedios-para.html
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20
micagral.pdf

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