TECNICA DE CONSERVACION DE MICROORGANISMOS POR LIOFILIZACION.pdf

1. DESCRIPCION DE LA TECNICA
DE CONSERVACIÓN DE
MICROORGANISMOS POR
LIOFILIZACIÓN
ALUMNA:
Luna Merma, Mayra Alexandra
DOCENTE:
Dr. Soto Gonzales, Hebert
Hernán

2. 1. HISTORIA Y ANTECEDENTES HISTORICOS
La liofilización tuvo su origen en el imperio Inca, alrededor del año 200 a.C., en
la zona del altiplano andino a 4.000 msnm, el cual era utilizado para la fabricación
del chuño (papa deshidratada) y charqui (carne de llama deshidratada), esta fue
reinventada en 1906 por Arsène d’Arsonval y Frédéric Bordas, mientras que en el
año 1911 surgen los primeros métodos de liofilización para bacterias, empleando
suero y leche como agentes protectores.
Uno de los principios básicos de la liofilización es la interrupción del crecimiento
microbiano, donde prevalece la viabilidad y estabilidad genética del cultivo por
un período prolongado. Este método proporciona una ventaja respecto a otras
metodologías de preservación como la crio preservación, ya que no requiere de
suministro eléctrico o de nitrógeno líquido constante.
2. METODO DE PRESERVACION DE MICROORGANISMOS POR
LIOFILIZACION
Este proceso consta de cuatro grandes etapas: recepción de un cultivo microbiano,
verificación de la pureza del cultivo, preservación del microorganismo por
liofilización y evaluación de la viabilidad postratamiento de liofilización.
2.1 Inspección primaria del cultivo microbiano
El proceso de liofilización se inicia con la
recepción de un cultivo microbiano. Al llegar la
muestra al laboratorio, ésta debe ser observada
bajo lupa estereoscópica para determinar que el
microorganismo se encuentre puro y sin
crecimiento micelial o bacterial contaminante.
2.2 Procesamiento primario de la muestra
Luego de realizar la inoculación, el cultivo microbiano debe ser incubado hasta
obtener un crecimiento evidente sobre la placa; en el caso de hongos, la
temperatura de incubación va desde los 15 a 25 °C, para bacterias, la temperatura
de incubación oscila entre los 28 a 38°C, y el
tiempo de incubación va desde las 24 a 48
horas. Al finalizar esta etapa, se debe
asegurar que el cultivo microbiano esté puro,
para luego pasar a la preparación y
formulación de la muestra para liofilización.

3. 2.3 Formulación de la muestra para la liofilización
Dependiendo de la estrategia para lograr una liofilización exitosa, se pueden usar
dos protocolos para la formulación de las muestras. El primer protocolo es para
bacterias y hongos esporuladores en formulación líquida, y el segundo es para
basidomicetes en soporte sólido.
2.4 Precongelado y liofilización de las muestras
Posterior al proceso de llenado de los
viales, ya sea usando el protocolo en
formulación líquida o formulación en
soporte sólido, éstos deben ser llevados al
congelador del refrigerador, donde son
mantenidos a -20 °C durante 2 horas,
aproximadamente, posteriormente, las muestras son transferidas al liofilizador
durante un período de 15 horas, al día siguiente, los viales se cierran al vacío,
utilizando manivela y se apaga el equipo.
2.5 Evaluación de viabilidad de la muestra post-liofilizacion
Para la evaluación de la viabilidad post-
liofilización, se deben recuperar los
microorganismos desde un vial testigo, luego de
48 horas desde que el proceso de liofilización
haya finalizado. En una colección microbiana.
3. EQUIPOS PARA LA LIOFILIZACION
3.1 LIOFILIZADOR
El liofilizador posee un sistema de vacío,
generado a través de una bomba de aceite que
se encuentra anexa al equipo principal. La
función de la bomba es, eliminar el aire del
interior de la cámara de secado y luego generar
el vacío suficiente para permitir la salida del
vapor producido durante la sublimación
3.2 INSUMOS, ACCESORIOS Y OTROS EQUIPOS REQUERIDOS
4. BIBLIOGRAFÍA
- Macassi, A. S., & de Ugaz, O. L. (1995). Liofilización. Revista de Química, 9(2), 173-
183.
A Vial para liofilización y
tapas de goma
B Tapas metálicas
C Alicate
D Congelador
E Etiqueta adhesiva