Se basa en contar el número de colonias desarrolladas en una placa de medio de cultivo sólido, al que se le ha sembrado un volumen conocido de agua, transcurrido un tiempo y una temperatura de incubación determinados.

1. Práctica 1:
Determinación de
bacterias aerobias totales
Curso FPE “Ensayos microbiológicos y biotecnológicos”.
FPO “Cartuja”, Granada. 2020.
Antonio Cárceles
Técnico Sup. de Laboratorio
15/03/2020

2. Se sigue las instrucciones de la Legislación, BOE de 13 de agosto de 1983: orden de 27
de julio de 1983 en la que se aprueban los métodos oficiales microbiológicos para
aguas potables de consumo público.
 Análisis mínimo: Determinación de coliformes totales y fecales.
 Análisis normal: Análisis mínimo + gérmenes totales.
 Análisis completo: Análisis normal + estreptococos fecales, Clostridium sulfito-
reductores y “otros gérmenes patógenos”.

3. Bacterias aerobias totales (aguas consumo humano)
37 ºC 22 ºC
10 UFC/mL 100 UFC/mL
Límites máximos permitidos:
Definición:
Son todas las bacterias heterótrofas,
aerobias y anaerobias facultativas,
mesófilas y psicotróficas capaces de
crecer en un medio de agar
nutritivo.
Fundamento:
Se basa en contar el número de
colonias desarrolladas en una
placa de medio de cultivo sólido, al
que se le ha sembrado un volumen
conocido de agua, transcurrido un
tiempo y una temperatura de
incubación determinados.
Se establecen dos criterios de
incubación:
• 37 ºC, durante 48 horas.
• 22 ºC, durante 72 horas
Se prepara diluciones seriadas o
decimales de la muestra de agua
objeto de análisis para obtener una
concentración de microorganismos
(30-300 colonias) según la técnica
descrita en la Figura 1.Muestra:
Agua de río.

4. 9 mL
NaCl 0,9%
10 - 1
Muestra
de agua
1 mL
9 mL
NaCl 0,9%
10 - 2
9 mL
NaCl 0,9%
10 - 3
9 mL
NaCl 0,9%
10 - 4
1 mL 1 mL
1 mL
1 mL
9 mL
NaCl 0,9%
10 - n
Fig. 1: Preparación de diluciones seriadas o decimales

5. 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
Bacterias aeróbias
a 22 ºC :
Bacterias aeróbias
a 37 ºC :

6. • A cada placa, añadir 15 mL de agar
nutritivo atemperado a 45 ºC.
10 - 1 10 - 2 10 - 3 10 - 4
• Agitar suavemente mediante movimientos circulares y de traslación para
homogenizar la mezcla , y sin dejar de apoyarlas sobre la mesa de trabajo.
• Dejar solidificar con la tapa un poco abierta y con el mechero bunsen cerca,
invertir las placas y colocarlas en la estufa.
Siembra por sobrefusión:

7. Incubación:
Bacterias aeróbias
a 22 ºC, 72 h.
Bacterias aeróbias
a 37 ºC, 48 h.
Lectura y expresión de resultados:
Transcurrido el tiempo de incubación,
contar las colonias desarrolladas en la
placa que contenga entre 30 y 300
colonias.
UFC/mL=
𝑛 𝑥 𝐹𝐷
𝑉 (𝑚𝐿)
Donde:
n = número de colonias
FD = factor de dilución
V = volumen, expresado en mL.
90 * 4 = 360 colonias
360 * 104 / 1 = 3,60 x 106 UFC/mL
110 colonias
110 * 104 / 1 = 1,10 x 106 UFC/mL