Métodos estudio célula

MÉTODOS DE ESTUDIO DE LA
CÉLULA Docente: Dra. Cinthya Santa Cruz López.

MÉTODOS DE ESTUDIO DE LA CÉLULA
Técnicas para el estudio
morfológico de la célula
Técnicas para el estudio
fisicoquímico
• Microscopia óptica
• Microscopia electrónica
• Centrifugación
• Cromatografía
• Electroforesis
• Cultivos in vitro

2. TÉCNICAS PARA EL ESTUDIO MORFOLÓGICO DE LA CÉLULA
MICROSCOPIA
ÓPTICA

oEl poder de resolución de un microscopio depende de la
longitud de onda de la luz utilizada (λ) y de la apertura
numérica del objetivo.

MICROSCOPIA ÓPTICA
TIPOS DE
MICROSCOPIO
ÓPTICO
DE CAMPO
CLARO
DE CAMPO
OSCURO
CONTRASTE DE FASES
CONFOCAL
FLUORESCENCIA

MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO
La luz pasa directamente y se
aprecian detalles que estén
naturalmente coloreados

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
El microscopio de campo oscuro se coloca un
stop opaco de tal manera que los rayos
lumínicos que pasan a través de la muestra a
partir del ángulo oblicuo son difractados,
refractados y reflejados hacia el objetivo
generando una imagen brillante sobre un fondo
oscuro.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE
DE FASES.
 Se usa principalmente para aumentar el contraste
entre las partes claras y oscuras de las células sin
colorear.
 Es ideal para especímenes delgados, o células
aisladas.
 El microscopio de fase ilumina el espécimen con un
cono hueco de luz, como en el microscopio en
campo oscuro.

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
Microscopio que incorpora una lámpara especial,
que actúa emitiendo una luz excitadora de los
fluorocromos, con los que se tiñen las muestras a
observar, y que posee además un filtro especial,
que permite el paso de la luz emitida por el
fluorocromo.

MICROSCOPIO CONFOCAL
La propiedad fundamental y distintiva
de la imagen confocal es que sólo lo
que está enfocado es detectado. Las
áreas de la muestra fuera de foco
aparecen negras, y no contribuyen a
la formación de la imagen.
Es un microscopio capaz de obtener
imágenes tridimensionales de la
célula. Se basa en un principio similar
al de un microscopio de fluorescencia,
pero se utilizan dos diafragmas
confocales (uno antes de la muestra y
otro después) capaces de enfocar la
iluminación en un único punto de la
muestra.

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
DE TRANSMISIÓN
DE BARRIDO
Se basa en el estudio de electrones
reflejados por una superficie.

Microscopio electrónico
de transmisión.
El microscopio electrónico de transmisión (TEM)
es un instrumento que aprovecha los fenómenos
físico-atómicos que se producen cuando un haz
de electrones suficientemente acelerado
colisiona con una muestra delgada
convenientemente preparada. Cuando los
electrones colisionan con la muestra, en función
de su grosor y del tipo de átomos que la forman,
parte de ellos son dispersados selectivamente,
es decir, hay una gradación entre los electrones
que la atraviesan directamente y los que son
totalmente desviados. Microfotografía electrónica de una mitocondria al Microscopio
electrónico de transmisión. Aumento 60.000x.

Microscopio electrónico de barrido
Microfotografía electrónica de un
glomérulo renal al Microscopio
electrónico de barrido.
El microscopio electrónico de barrido
(SEM) es un instrumento capaz de
ofrecer un variado rango de
informaciones procedentes de la
superficie de la muestra. Su
funcionamiento se basa en barrer un haz
de electrones sobre un área del tamaño
que deseemos (aumentos) mientras en
un monitor se visualiza la información
que hayamos seleccionado en función
de los detectores que hayan disponibles.

 Preparación de una muestra para observación en el microscopio electrónico.

MICROSCOPIA ELECTRÓNICA
Ventajas
•Proporciona resultados de amplia resolución y magnificación que permiten
•Visualizar muestras muy pequeñas.
Desventajas
• Elevados costos de los equipos y una infraestructura adecuada y esto impide el uso de esta
técnica en cualquier laboratorio.
• Altos costos de procesamiento de las muestras
•La manipulación de reactivos se torna peligroso por la elevada condición toxica de los mismos.
•Procesamiento tedioso de la muestra. Creación de artefactos
• La complejidad de los equipos requiere de personal técnico especializado.

TÉCNICAS PARA EL ESTUDIO
FISICOQUÍMICO DE LA CÉLULA.
Separación de los componentes de una mezcla en función de las diferencias
entre las velocidades que presentan al someterlos a elevadas aceleraciones.
Esto se consigue haciendo girar la mezcla en un rotor a un gran número de
vueltas por minuto.
CENTRIFUGACIÓN

FRACCIONAMIENTO CELULAR
Método para aislar y separar los orgánulos celulares
1) Se realiza un homogeneizado
2) se separan los diferentes componentes mediante una
ultracentrífuga. La fuerza centrífuga separa los
componentes celulares en función de su densidad, su
forma y tamaño.

Se fundamenta en la separación de los componentes de una
mezcla por sus diferencias de absorción. Éstas diferencias van a
ser debidas a las fuerzas de Van der Wals que se establecen
entre los componentes de la mezcla y una sustancia que actúa
de fase estacionaria. Según la naturaleza de la fase estacionaria.
CROMATOGRAFÍA

CROMATOGRAFÍA SOBRE PAPEL Se
emplea para la separación de
sustancias químicas que presenten
propiedades muy parecidas.
CROMATOGRAFÍA DE GASES
Este método tiene la ventaja de
necesitar pequeñísimas cantidades
(0,05 mg) y es capaz de separar
sustancias muy parecidas
químicamente; por ejemplo: ácidos
grasos, azúcares u hormonas.

ELECTROFORESIS
Las sustancias que componen la mezcla se
desplazarán en función de su carga eléctrica.
Naturalmente este método se empleará con
sustancias que presenten cargas eléctricas
(proteínas y ácidos nucléicos)

CULTIVOS in vitro
Permite mantener líneas celulares en
el exterior de un organismo en
condiciones favorables a su
multiplicación.
La gran ventaja es la facilidad para el
tratamiento del material biológico y
su estandarización.

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