microscopio

1. EL MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO

4. MICROSCOPIO INVERTIDO

5. SISTEMA MECANICO

6. SISTEMA OPTICO

7. SISTEMA OPTICO

8. CONDENSADORES

9. OBJETIVOS

11. APERTURA NUMERICA
Apertura Numérica (NA)
NA=n.sen u
u =1/2 ángulo del cono de luz
aceptada por el objetivo.
n= índice de refracción del
medio entre lente y
especimen.
n del aire =1
N del aceite de
inmersión=1.515

12. • Límite de resolución: es la menor distancia que debe existir entre dos
objetos para que puedan visualizarse por separado. Fig 2 y 3 (6).
• Poder de resolución: es la capacidad de mostrar la imagen en sus
detalles más finos. Está en relación inversa con el límite de resolución

13. Fórmula para la obtención del límite de resolución (D):
0.61 X λ
D=----------------------------------
Anobjetivo + ANcondensador
D= distancia entre dos puntos resueltos
0.61= constante cuando cambia entre dos medios con
densidad diferente
λ = longitud de onda de la luz utilizada (540 nm)
AN= apertura numérica

17. Microscopio campo obscuro
Este microscopio usa un condensador especial con una apertura tan grande que el has de luz
iluminará todo el objetivo. El objeto en el centro difractará la luz que será colectada por el
objetivo y se usará para formar la imagen. Los objetos se verán brillantes con un fondo
obscuro.

18. SISTEMA OPTICO DE CAMPO OBSCURO

19. VIAJE INTERNO DE LA LUZ EN EL
CONDENSADOR DE CAMPO OBSCURO

21. a) deer tick (Ixodes demmini) b) trematodo (Echinostoma revolutum C) silkworm
trachea and spiracle
La microfotografía ilustra el efecto de la iluminación del campo claro y campo obscuro del esqueleto de
silice de un pequeño protozoario marino (Radiolario).

23. Synonyms
syphilis bacterium
Classification
aerobic or microaerophilic, gram- bacteria, spirals

24. Secondary syphilis
fevermalaiseheadachesore
throatjoint
painanorexianauseavomitingwei
ght losshair
losslymphadenopathycondyloma
lataraculopapular rashrashrash
on palms and soles

25. MICROSCOPIO DE CONTRASTE
DE FASES

26. CONTRASTE DE FASES
Fue descrita en 1934 por
el Alemán Fritz Zernike.
Es una técnica óptica que
aumenta el contraste en
células transparentes no
teñidas, vivientes ó en
cortes muy delgados de
tejidos.
La óptica consiste en un
condensador con un
dispositivo anular especial
que emite un campo de
luz sobre el espécimen,
las ondas luminosas que
atraviesan el objeto
transparente van a ser
retardas en un cuarto de
longitud de onda y este
retardo va a modificar la
imagen en el ocular.

29. Derecha: Has circular de luz formado por debajo del objeto y el anillo de fase dentro del objetivo.
Solamente el haz de luz directo está influenciado por el anillo de fase.
Izquierda: Camino de los rayos luminosos dentro del microscopio de contraste de fases. 1. Anillo en el
condensador, 2. condensador, 3. espécimen, 4. objetivo, 5. placa de fase, 6. plano del objetivo.

34. Microscopio
de Contraste
Diferencial de
Interferencias
(DIC), produce
una imagen de
sombras
monocromáticas
que
efectivamente
manifiesta
diferencia en los
relieves
presentes en el
espécimen.
Se inventó por el
Francés George
Nomarski en
1950

43. MICROSCOPIO DE
FLUORESCENCIA

44. • DESCRIPCION
• Consta de una fuente de luz
(lámpara de mercurio o
halógena) que emite luz
ultravioleta; el microscopio y un
sistema de 3 filtros.
• 1) El de excitación o selección
de luz ubicado entre la lámpara
y el preparado, (permite el paso
de ondas de luz con longitud
que caiga en el rango azul).
• 2) El de calor y está entre la
fuente de luz y el filtro de
excitación en los microscopios
de luz transmitida y entre la
fuente de luz y el espejo
dicróico en los de luz incidente.
3) El de barrera, colocado antes
del ocular para prevenir daños
retinianos que podrían ser
causados por rayos ultravioleta
que escapan del espejo
dicróico.

45. LAMPÁRAS PARA MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

48. FLUORESCENCIA
•FLUORESCENCIA
•Propiedad de algunas
sustancias que
consiste en la emisión
de un fotón cuando
son excitados por un
fotón incidente.
Luminiscencia.
Fenómeno en el que
ocurre la emisión de
una sustancia
luminiscente y ésta
cesa cuando la fuente
excitante es removida.
FLUOROCROMOS

49. FLUOROCROMOS
• Sustancias
que emiten
un fotón
cuando son
excitados
por un
fotón
incidente.

50. Fluorescein Isothiocyanate (FITC) 490 ---- 525 (verde) Argon-Ion
Rhodamine B Extra 550 --- 605 (amarillo) Green He-Ne
Evans Blue 550 --- 610 (rojo) Green He-Ne
MPS (Methyl Green Pyronine Stilbene) 364 --- 395 (violeta) Argon-Ion

51. TECNICA INMUNOFLUORESCENTE

52. MICROSCOPIO CONFOCAL

54. • La microscopia de
inmunofluorescencia es
una técnica
inmunohistoquímica que
consiste en conjugar
colorantes fluorescentes
(isotiocianato de
fluoresceína, rodamina B
de lisamina o ácido 1-
dimetilaminonaftalen-5-
sulfónico) con
anticuerpos o antígenos,
exponiendo después este
conjugado a los
anticuerpos o antígenos
correspondientes en
cortes de tejidos, frotis de
microorganismos o de
células, o cultivo de
tejidos en capa única.

55. • Cuando la
reacción es
positiva y se
expone a la luz
ultravioleta se
producirá
fluorescencia
observable
bajo el
microscopio
de
inmunofluores
cencia

58. MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO

63. MICROSCOPIO ELECTRONICO DE
TRANSMISIÓN
INTRODUCCIÓN.
El entender lo intrincado de la
vida a nivel molecular y celular
depende de la comprensión de
la química y función de las
unidades estructurales de la
materia viviente.

64. El microscopio ha sido un instrumento muy valioso para el campo de la
morfología. Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723) construyó los primeros
microscopios.
Robert Hooke, acuñó la palabra célula (1677) mediante el uso de microscopios.
Se introducen las técnicas de corte y tinción de los tejidos (1890).
A principios de 1931 se inició la construcción de los MET (Microscopios
Electrónicos de Transmisión). Se les atribuye a Ernst Ruska y a Max Knoll de
Berlin, la idea para la construcción del MET. En ese tiempo solo alcanzaron 16
aumentos. Por ese invento a Ernst Ruska se le otorgó el premio Nóbel en 1986.

65. El aparato consistió en la
sustitución de los
componentes del microscopio
de luz visible (b) con base en
un haz de luz, por un haz de
electrones que partían de un
filamento especial de
tungsteno (a) y las lentes
ópticas se sustituían por
lentes magnéticas, que
concentraban el haz y lo
hacían incidir sobre la
preparación.

66. Los principios básicos para el MET, no han cambiado
en los últimos 10 años, sin embargo, las técnicas de
tinción se han revolucionado, de tal manera que ahora
se pueden hacer inmunotinciones, tinciones
citoquímicas para sustancias especiales y metales
exógenos, microscopia confocal de alto voltaje, análisis
químico de la muestra (EDS).

67. PRINCIPIOS BASICOS.
ELECTRONES.
Son partículas con carga eléctrica negativa que forman parte de los
átomos de la materia, pueden desprenderse por la aplicación de una
corriente eléctrica de alto voltaje a un filamento de metal puro como el
TUNGSTENO dentro de una columna al alto vacío, para formar una
haz de electrones que puede tener gran potencia como para poder
atravesar delgadas películas de materia e imprimir la imagen en una
pantalla fluorescente.

68. Con el haz de electrones, se va a aumentar el poder de
resolución del aparato.
Sustancias electrondensas (a), son las que no dejan pasar los
electrones y por lo tanto se ven obscuras.
Sustancias electroopacas (b), son aquellas que por su bajo
contenido en materia orgánica, en la pantalla del MET se ven
claras.
PRINCIPIOS BASICOS.
a b

69. PODER DE RESOLUCIÓN

70. APERTURA NUMERICA

71. Factores que influyen en el poder de penetración de los
electrones y por lo tanto en el poder de resolución.
a) Poder de resolución de un MET es de 0.2 a 0.5 nm.
b) La profundidad del campo o poder de penetración de los
electrones que son acelerados de 60 a 100 kV, es de 200 nm.
La tendencia actual es acelerarlos desde 200 a 400 kV que
permita usar especimenes de mayor grosor y mantener un alto
poder de resolución.
c) La tinción del especimen debe ser homogénea para
distribuir los electrones en forma homogénea.
d) La densidad electrónica está en función del grosor del
corte y del tiempo de tinción.
PODER DE RESOLUCIÓN

72. Una micrografía electrónica es una imagen de un espécimen
alterado de su estado viviente, el grado de alteración depende
del procedimiento citoquímico empleado, Estas preparaciones
se tiñen por lo general con plomo y uranilo, lo cual, no
solamente da mayor opacidad a los tejidos sino también
estabilidad que les permite resistir mas al paso de los
electrones y por lo tanto no dañarse y a dar mas contraste.

73. COMPONENTES DEL MET
100 Kv
Columna al alto vacío
con:
•Fuente de
electrones.
•Sistema de vacío.
•Lentes
condensadores,
objetivos y oculares.
•Pantalla
fluorescente.
•Sistema de
fotografía.
•Sitio introductor de
muestras.
Consola de controles
para movimientos
del objeto a
observar, haz de
electrones y sistema
de fotografía.

74. MET ALTO VOLTAJE (200 kV)
COLUMNA AL ALTO
VACÍO
-Cañón de emisión de electrones
De ZrO/W.
- Lentes de iluminación: 1er y
2do condensadores; minilente
condensadora y lente objetiva.
-Lentes formadoras de la
imagen: objetivo, minilente
objetivo, 1ra, 2da y 3er lentes
intermedias, lente de
proyección.
Las lentes de imagen
proporcionan: altos aumentos,
libre rotación de la imagen y
orientación para la difracción y
la formación de la imagen.

75. -Cañón de emisión de
electrones
De ZrO/W, W(100) y
W(310)
CFE (cold field emission):
emite electrones a T.A.
TFE (thermal field emission)
emite electrones a
temperaturas de 1600 K

76. Lentes de iluminación: permiten alta resolución, difracción y
necesidades analíticas.
Lentes de imagen: grandes aumentos, rotación libre de la imagen y
su orientación entre el patrón de difracción y su imagen.
TEM= haz de electrones
Paralelos.
EDS(Energy Dispersive
X-ray Spectometry)=
haz de electrones que
incide en forma angular
para hacer un análisis de
rayos X.
NBD (Nanometer Beam
Diffraction)=Para
observar areas
nanometricas.
CBD (Convergent-Beam
Electrondiffraction)=
para obtener efectos de
iluminación tipo
contraste de fases.

77. OBSERVACIÓN AL MET